基于STING/NF-κB信号通路探讨蓟黄素对小鼠类风湿性关节炎的影响

[目的]评价蓟黄素通过调控STING/NF-κB信号通路对小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的影响。[方法]取40只SPF级雌性C57BL/6小鼠平均分为空白对照组(Sham)、模型组(CIA)、甲氨蝶呤组(MTX,1 mg/kg)和蓟黄素组(JHS,100 mg/kg),通过胶原免疫法建立小鼠类风湿性关节炎模型。药物干预4周后实验结束,分别检测后爪肿胀度、血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察左侧膝关节形态学变化,测定右侧膝关节STING/NF-κB通路关键蛋白表达水平。[结果]与CIA组相比,MTX组和JHS组小鼠后爪肿胀度明显降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和MDA水平明显降低,而SOD活性明显增加(P<0.01),膝关节炎症细胞浸润明显减少,软骨组织损伤明显减轻,膝关节STING和p-NF-κB p65/NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。[结论]蓟黄素可明显改善类风湿性关节炎,其机制可能通过调控STING/NF-κB信号通路减轻炎症和氧化应激损伤有关。

川陈皮素通过抑制STING/NF-κB信号通路促进骨质疏松大鼠的骨折愈合

目的探讨川陈皮素(NOB)通过抑制干扰素基因刺激因子(STING)/核转录因子kappaB(NF-κB)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠骨折愈合的影响。方法通过切除卵巢+右侧股骨干骨折髓内固定术建立OP性骨折大鼠模型;将造模后的大鼠随机分为模型组、NOB高(NOB-H,30 mg/kg NOB)、中(NOB-M,20 mg/kg NOB)、低剂量(NOB-L,10 mg/kg NOB)组以及NOB-H+STING激活剂(DMXAA)组(30 mg/kg NOB+25 mg/kg DMXAA),并以仅暴露卵巢的18只大鼠作为假手术组。干预结束后,对大鼠骨折愈合状况进行评估;Micro-CT检测大鼠骨小梁微结构变化;试剂盒检测血清中骨代谢相关指标[碱性磷酸酶(ALP)、钙、磷]及炎症因子(TNF-α、IL-1β)水平;HE检测股骨组织形态学变化及骨小梁面积;Western blot检测STING/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组骨折线清晰,骨小梁结构紊乱、且间隙较大,TNF-α、IL-1β水平、STING、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加,骨小梁面积、ALP、钙、磷水平、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁厚度(Tb.Th)显著降低(P<0.05);与模型组相比,NOB-L组、NOB-M组、NOB-H组骨折线逐渐模糊,骨小梁结构排列有序,且间隙逐渐减少,指标变化趋势与模型组相反(P<0.05);STING激活剂减弱了NOB对OP大鼠的骨折愈合的促进作用,并增加大鼠炎症反应。结论NOB可减少OP性骨折大鼠炎症反应,促进其骨折愈合,可能与抑制STING/NF-κB信号通路有关。

刺五加注射液通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻糖尿病肾病小鼠肾损伤的研究

[目的]研究刺五加注射液(ASI)调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾损伤的影响。[方法]采用高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素的方法构建DKD小鼠动物模型,设正常对照组、模型组、ASI(75 mg/kg)组、ASI(75 mg/kg)+瑞沙托维(TAK-242,TLR4抑制剂,0.5 mg/kg)组和ASI(75 mg/kg)+脂多糖(LPS,TLR4激动剂,10 mg/kg)组,每组10只。持续给药8周后,检测小鼠空腹血糖(FBG)和肾功能指标[24 h尿蛋白量(24 h UTP)、尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)],称量体质量、肾脏质量并计算肾脏系数,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾组织炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察肾组织病理改变,马森(Masson)染色和末端标记法(TUNEL)检查肾纤维化和肾细胞凋亡,逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾组织TLR4、NF-κB p65 mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织TLR4、NF-κB p65、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。[结果]与模型组相比,ASI组和ASI+TAK-242组小鼠FBG、24 h UTP、UA、BUN、Scr、肾脏质量、肾脏系数、IL-1β、IL-6、TNF-α均显著降低,体质量显著升高(P<0.05);肾组织病理改变、纤维化及肾细胞凋亡状况均明显改善,肾组织损伤评分、胶原容积分数(CVF)及细胞凋亡指数(AI)均显著降低(P<0.05);TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量显著降低,Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达比值显著降低(P<0.05)。TAK-242能够明显增强ASI对DKD小鼠FBG、肾功能、体质量、肾脏系数、肾组织病变、纤维化、细胞凋亡及TLR4/NF-κB信号通路相关mRNA和蛋白表达的作用;LPS则明显逆转ASI对DKD小鼠的上述作用。[结论]ASI具有减轻DKD小鼠肾损伤并改善其肾功能的作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路,进而抑制炎症、肾纤维化和细胞凋亡有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病大鼠肠道炎症损伤的影响

目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病(T2DM)大鼠肠道炎症损伤的影响及作用机制。方法将8只ZDF(fa/+)大鼠作为空白组,40只ZDF(fa/fa)大鼠经高脂饲料喂养后,随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g/kg二甲双胍)和中药高、中、低剂量组(2.16、1.08、0.54 g/kg大黄糖络丸),给药组分别以相应药液灌胃,连续12周。干预前后测定大鼠体质量和空腹血糖(FBG),干预结束后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),检测血清葡萄糖(GLU)、糖化血清蛋白(GSP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,ELISA测定血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)及结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-22、脂多糖(LPS)、肠道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量,HE染色观察结肠组织形态,Western blot检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、核因子-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα、髓样分化因子88(MyD88)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、FBG显著升高(P<0.01),OGTT各时间点血糖显著升高(P<0.01),血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著升高,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著降低(P<0.01),结肠组织细胞核固缩,胞质溶解,炎性细胞浸润,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著升高,IκBα、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组和中药高、中剂量组体质量、FBG显著降低(P<0.01),OGTT不同时间点血糖降低,血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著降低,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织结构明显改善,炎性细胞浸润减少,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著降低,IκBα、ZO-1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论大黄糖络丸可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,减少炎症因子释放,改善肠道炎症损伤,恢复肠道内环境稳态,进而改善糖脂代谢,发挥治疗T2DM作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨芪黄解毒化瘀饮治疗脓毒症急性肾损伤的作用机制

[目的]基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨芪黄解毒化瘀饮治疗脓毒症急性肾损伤(AKI)的影响及作用机制。[方法]将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄解毒化瘀饮低、中、高剂量组,每组10只。通过盲肠结扎穿刺的方法构建脓毒症AKI大鼠模型,各组分别于造模前每12 h灌胃,连续3 d,造模后12 h灌胃。记录各组大鼠的一般状态,酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、中性粒细胞明胶酶相关脂质释放素(NGAL)、肾损伤分子(KIM)-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)水平。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态变化。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。[结果]与模型组相比,芪黄解毒化瘀饮低、中、高剂量组大鼠的一般状态均已改善;高剂量组血清Scr、BUN水平明显降低(P<0.05),中、高剂量组NGAL和KIM-1水平明显降低(P<0.05,P<0.01);低、中、高剂量组大鼠肾脏组织病理损伤明显改善;芪黄解毒化瘀饮低、中、高剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.01或P<0.05),IL-10水平升高(P<0.01);芪黄解毒化瘀饮低、中、高剂量组MDA的水平明显降低(P<0.01),CAT水平明显升高(P<0.05或P<0.01);中、高剂量组GSH-PX水平明显升高(P<0.05);高剂量组T-SOD水平明显升高(P<0.05);芪黄解毒化瘀饮低、中、高剂量组TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。[结论]芪黄解毒化瘀饮可以改善脓毒症AKI大鼠的一般状态,改善肾功能障碍和肾脏病理损伤,减轻炎症水平和氧化应激反应,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。

中药靶向IκB/NF-κB信号通路干预脓毒症研究进展

脓毒症是临床感染、严重创伤、烧伤等疾病常见并发症。IκB/NF-κB介导脓毒症的炎症过程被认为是抗炎药物的新靶点。中药干预脓毒症具有多成分、多靶点且不良反应小等特点。本文通过梳理中药靶向IκB/NF-κB信号通路干预脓毒症相关研究,归纳总结中药单体及其提取物、中药复方及制剂通过靶向IκB/NF-κB信号通路而发挥减轻脓毒症的炎症反应和氧化应激、调节免疫、保护重要脏器免受损伤的作用机制研究,为中药治疗脓毒症提供参考。

基于BAFF介导的NF-κB非经典信号通路探讨梅花生津饮对干燥综合征模型小鼠的治疗机制

目的:基于B细胞活化因子(BAFF)介导的核因子(NF)-κB非经典信号通路探讨梅花生津饮对干燥综合征(SS)模型小鼠的作用机制。方法:选择杂交型小鼠中的非肥胖性糖尿病型(NOD)/Ltj小鼠作为SS疾病模型动物,同时应用与之遗传背景相似的C57BL/6小鼠作为健康模型动物。将NOD小鼠随机分为模型组、硫酸羟氯喹组(每日给药量0.07 g/kg)和梅花生津饮低剂量(每日给药量11.11 g/kg)组、中剂量(每日给药量22.23 g/kg)组、高剂量(每日给药量44.46 g/kg)组,每组6只,另取6只C57BL/6小鼠为正常组。各组每日灌胃给予相应药物,模型组与空白组每日灌胃给予等量蒸馏水,均每日1次,连续6周。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot法)检测各组小鼠颌下腺组织BAFF、B淋巴细胞刺激因子受体(BAFFR)、IκB激酶-α(IKKα)、NF-κB2(p52)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠颌下腺组织BAFF、IKKα、p52 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组小鼠血清趋化因子CXC配体13(CXCL13)表达水平;采用流式细胞术检测各组小鼠血清B细胞亚群的表达。结果:模型组小鼠颌下腺组织BAFF、BAFFR、IKKα、p52、Bcl-2蛋白相对表达量,BAFF、IKKα、p52 mRNA表达水平均明显高于正常组(P<0.01);硫酸羟氯喹组与梅花生津饮中、高剂量组上述指标均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);梅花生津饮低剂量组小鼠颌下腺组织p52、Bcl-2蛋白相对表达量,IKKα、p52 mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.01,P<0.05);梅花生津饮中、高剂量对上述指标的改善作用与硫酸羟氯喹相当或明显优于硫酸羟氯喹(P<0.05,P<0.01)。模型组小鼠血清CXCL13含量明显高于正常组(P<0.01);硫酸羟氯喹组与梅花生津饮中、高剂量组小鼠血清CXCL13含量明显均明显低于模型组(P<0.01);梅花生津饮中、高剂量对上述指标的改善作用均明显优于硫酸羟氯喹(P<0.05,P<0.01)。模型组小鼠血清CD19^(+)、CD27^(+)CD19^(+)、CD185^(+)CD19^(+)百分比均明显高于正常组(P<0.01);硫酸羟氯喹组与梅花生津饮中、高剂量组上述指标均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),梅花生津饮低剂量组小鼠血清CD19^(+)、CD27^(+)CD19^(+)百分比均明显低于模型组(P<0.05);梅花生津饮中、高剂量对上述指标的改善作用与硫酸羟氯喹相当。梅花生津饮对上述各指标的改善作用均表现出一定的剂量依赖性。结论:梅花生津饮可调节CXCL13/CXCR5轴,降低对B细胞的趋化作用,影响总B细胞及记忆B细胞的比例,其可能通过BAFF介导的NF-κB非经典信号通路对干燥综合征模型小鼠发挥治疗作用。

P300通过Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路抑制脊柱侧凸大鼠的椎间盘退变

目的探讨组蛋白乙酰化转移酶P300对脊柱侧凸大鼠的椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)退变的影响和潜在调控机制。方法培养椎间盘NPCs,将NPCs分为4组:无处理组(对照组)、10μg/L白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导NPCs退变组(IL-1β组)、10μg/L IL-1β联合15 mg/L P300处理组(IL-1β+P300组)和15 mg/L P300单独处理组(P300组)。CCK-8法检测细胞增殖活力。酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。流式细胞术检测细胞凋亡。蛋白质印迹法检测细胞中性别决定区Y框蛋白9(sex de-termining region Y-box 9,SOX9)、胶原蛋白Ⅱ(collagen typeⅡ,COL-Ⅱ)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、金属蛋白酶ADAMTS(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs)-5、核因子κB-α抑制蛋白(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)、磷酸化的NF-κB P65(p-P65)以及核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达。另外,将40只成年SPF级雌性SD大鼠分为假手术组、脊柱侧凸组、脊柱侧凸+P300组、脊柱侧凸+P300+Nrf2-IN-3组。其中脊柱侧凸组用手术去除大鼠的双上肢及尾部。脊柱侧凸+P300组建模后静脉注射P300[15 mg/(kg·d),30 d]。脊柱侧凸+P300+Nrf2-IN-3组建模后静脉注射P300[15 mg/(kg·d),30 d]和Nrf2的抑制剂Nrf2-IN-3[23.5 mg/(kg·d),30 d]。30 d后取T12~L1段椎间盘髓核组织,用蛋白质印迹法检测组织中SOX9、COL-Ⅱ、MMP-13、ADAMTS-5的表达。结果与对照组比较,IL-1β组的细胞活力降低,但细胞凋亡增加,TNF-α、IL-6、MMP-13、ADAMTS-5、p-P65、p-IκBα的表达水平上调,SOX9、COL-Ⅱ、IκBα、Nrf2、HO-1的表达水平下调(P均<0.05)。而与IL-1β组比较,IL-1β+P300组的细胞活力增加,细胞凋亡减少,TNF-α、IL-6、MMP-13、ADAMTS-5、p-P65、p-IκBα的表达水平下调,SOX9、COL-Ⅱ、IκBα、Nrf2、HO-1的表达水平上调(P均<0.05)。与假手术组比较,脊柱侧凸组的SOX9和COL-Ⅱ表达水平减少,而MMP-13和ADAMTS-5的表达增加(P均<0.05),与脊柱侧凸组比较,脊柱侧凸+P300组的SOX9和COL-Ⅱ表达水平增加,而MMP-13和ADAMTS-5的表达减少(P均<0.05)。与脊柱侧凸+P300组比较,脊柱侧凸+P300+Nrf2-IN-3组中的SOX9和COL-Ⅱ表达水平减少,而MMP-13和ADAMTS-5的表达增加(P均<0.05)。结论P300通过调控Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路抑制脊柱侧凸大鼠的椎间盘退变。

Rhamnazin通过调控NF-κB/MAPKs信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞炎性反应

目的建立LPS诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究Rhamnazin的抗炎活性及其作用机制。方法CCK-8法测定Rhamnazin对单核巨噬细胞活力的影响,ELISA法测定细胞上清液中小鼠白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量及其mRNA表达水平,Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达水平。结果Rhamnazin可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子的表达水平;抑制NF-κB、p38、ERK和JNK蛋白磷酸化水平。结论Rhamnazin可能通过抑制TLR4/IκB/NF-κB信号通路,抑制巨噬细胞LPS诱导的炎性反应中IL-6、IL-1β和TNF-α等炎症因子的释放,并通过抑制NO释放、XOD活性和清除DPPH自由基发挥抗氧化活性和抗炎活性。

萝卜硫素通过调节ALOX5/NF-κB信号通路调控巨噬细胞糖酵解抑制糖尿病肾病进展

目的探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高葡萄糖(HG)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)诱导体外DN模型。将HK-2细胞分为如下组:正常糖(NG)组、HG组、HG+SFN(3 mmol/L)组、HG+ALOX5组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5组、HG处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组。CCK-8检测细胞活力,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞中葡萄糖和乳酸水平;Western blot检测各组细胞中ALOX5、NF-κB以及糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达;使用链脲佐菌素(STZ)构建DN小鼠模型,DN小鼠给与SFN(0.5 mg/kg)治疗;检测小鼠各项生化指标,HE染色检测肾组织病理变化;Western blot检测小鼠肾脏巨噬细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果生物信息学分析结果显示ALOX5是SFN治疗DN的靶基因。与HG组相比,SFN处理增强HK-2细胞活力并抑制细胞凋亡(P<0.05);同时,SFN处理抑制HG诱导的巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达,减弱巨噬细胞介导的HK-2细胞损伤(P<0.05);Western blot结果表明SFN抑制ALOX5和NF-κB的表达(P<0.05);小鼠实验结果显示,SFN治疗改善DN小鼠肾功能和肾组织病理学改变,抑制肾组织中巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达(P<0.05)。结论SFN通过抑制ALOX5/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞糖酵解从而改善DN进展。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨水蛭对大鼠肾纤维化的影响

目的 观察水蛭干预肾纤维化大鼠的疗效,并通过TLR4/NF-κB信号通路探讨其对炎症状态的干预机制。方法 将雄性SD大鼠50只,按随机数字表法分为五组:正常组、模型组、阳性对照组和水蛭低、高剂量组。以单侧输尿管梗阻建立肾纤维化模型。干预21天后,生化检测血肌酐、尿素氮,ELISA检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量水平,HE、Masson染色光镜下观察大鼠肾脏病理改变,Western blot检测肾组织内TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组血Scr、BUN显著升高(P<0.01),血IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),大鼠肾脏组织发生明显病理改变,大鼠肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组、水蛭低、高剂量组血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肾脏组织病理显著改善,肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平均明显降低(P<0.05)。结论 水蛭能有效改善肾纤维化大鼠的肾功能,其机制可能是抑制TLR4/NF-κB信号通路从而抑制炎症反应发生,达到抗肾纤维化的目的。

小檗碱通过NF-κB/iNOS-COX-2信号通路对睡眠剥夺大鼠认知功能的影响

目的探究小檗碱是否能够通过调控核因子(NF)-κB/诱导型一氧化氮合酶/环氧合酶(iNOS-COX)-2信号通路对睡眠剥夺(SD)大鼠认知功能产生影响。方法90只大鼠随机分为对照组、睡眠剥夺(SD)组、小檗碱低剂量组[小檗碱-L组,30 mg/(kg·d)]、小檗碱中剂量组[小檗碱-M组,60 mg/(kg·d)]、小檗碱高剂量组[小檗碱-H组,120 mg/(kg·d)]、艾司唑仑组[0.1 mg/(kg·d)],每组各15只,药物处理7 d后通过平台水环境法进行大鼠SD模型构建。通过Morris水迷宫实验和Y迷宫实验检测逃避潜伏期和行为正确率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组海马组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17和血清中S100B、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达水平;试剂盒检测海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;Western印迹检测海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白表达水平。结果与对照组比较,SD组逃避潜伏期,海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平,血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平明显升高,行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显降低(均P<0.05)。与SD组比较,小檗碱-L、M、H组和艾司唑仑组逃避潜伏期,海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平,血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平均明显降低,行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显升高(均P<0.05)。小檗碱-H组与艾司唑仑组比较上述指标无明显差异(P>0.05)。结论小檗碱能够对SD大鼠认知功能产生保护作用,其机制可能与调控NF-κB/iNOS-COX-2信号通路,并减轻炎症和氧化应激损伤有关。

温针灸对兔膝骨性关节炎模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路诱导下滑膜修复作用机制的实验研究

目的通过观察温针灸对兔右膝骨性关节炎模型关节软骨滑膜组织中TLR4、NF-κB表达量的影响,探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的机制。方法随机将40只兔分为空白组、模型组、双氯芬酸钠组、温针灸组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制作膝骨性关节炎模型,于造模成功后第3 d开始进行干预治疗。空白组不做任何处理,常规饲养;模型组不治疗,每天以石膏固定1次,时间15 min。温针灸组给予患侧鹤顶、后三里、内外膝眼、阳陵泉5个穴位行温针灸治疗,15 min/1次,1次/d。双氯芬酸钠组将药品研末、溶解在纯净水中,并以15 mg/kg体重的浓度灌胃。6 d为1个疗程,观察2个疗程,治疗结束后取材。通过HE染色法观察各组膝关节软骨的病理变化,并进行Mankin′s评分;采用ELISA法检测各组兔膝关节滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达水平。结果与空白组兔比较,各组兔膝关节Mankin′s评分、NF-κB、TLR4的含量均增高(P<0.05),与模型组兔相比,温针灸组和双氯芬酸钠组兔膝关节Mankin′s评分和NF-κB、TLR4的含量均有所下降(P<0.05)。结论温针灸可改善兔膝关节软骨退行性变,减轻炎症反应,其机制可能与改善兔膝关节软骨形态,降低滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达量相关。

基于NF-κB经典信号通路研究黄芩素对高糖诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的:从NF-κB经典信号通路探讨黄芩素对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制。方法:5.5 mmol/L浓度的葡萄糖设为正常糖对照组,45 mmol/L浓度的葡萄糖设为高糖组,NF-κB特异抑制剂PDTC(100μmol/L)作为阳性对照组,观察不同剂量黄芩素(25~100μmol/L)对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活及其下游炎症因子的影响。Western blot法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκBα、p65、p-p65、IKKα)及其下游炎症分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达。结果:与正常糖对照组比较,高糖组能显著下调IκBa蛋白表达,上调p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达(P<0.01);与高糖组比较,黄芩素中、高剂量组呈剂量依赖性地显著抑制IκBα蛋白表达下调,p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01);与高糖组比较,NF-κB特异抑制剂PDTC组能显著抑制IκBα蛋白表达下调,及p-p65/p65比值和MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩素可以通过抑制高糖诱导的HK-2细胞NF-κB信号通路关键蛋白(IKKα/IκBα/p65)的激活,下调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,从而减轻肾脏细胞炎症。

基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制

目的基于MAPK/NF-κB信号通路探讨调气止咳方(麻黄、苦杏仁、浙贝母、黄芩、瓜蒌子等)对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症的影响及机制。方法采用卵清蛋白致敏复制咳嗽变异性哮喘大鼠模型。将SD大鼠随机分组为空白组、模型组、地塞米松组(0.5 mg·kg^(-1))、孟鲁司特组(1.0 mg·kg^(-1))及调气止咳方低、中、高剂量组(9.6、19.2、38.4 g·kg^(-1)),每组10只;灌胃给药,每日1次,连续14 d。观察大鼠一般状况并记录雾化后2 min内大鼠的咳嗽次数;采用HE染色、Masson染色法观察大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western Blot法检测肺组织p38 MAPK、p-p38、NF-κB p65、p-p65蛋白表达水平;RT-qPCR法检测肺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠的咳嗽次数显著增加(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著升高(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01);肺组织中p-p38、p-p65、p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达均显著上调(P<0.01),p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的咳嗽次数显著减少(P<0.01),肺损伤病理评分及胶原纤维面积比显著降低(P<0.01),血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肺组织中p-p38、p-p65蛋白表达及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01);调气止咳方高剂量组大鼠肺组织中p-p38/p38、p-p65/p65蛋白表达比值均显著下调(P<0.01)。与地塞米松组和孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的咳嗽次数明显减少(P<0.05);与地塞米松组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显降低(P<0.01);与孟鲁司特组比较,调气止咳方高剂量组大鼠的血清IL-1β、TNF-α水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论调气止咳方能够改善卵清蛋白诱导的咳嗽变异性哮喘大鼠的咳嗽症状,减轻气道炎症细胞浸润及气道重塑,降低炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,其机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。

针刺对干眼兔角膜形态学及角膜组织NF-κB信号通路的影响

目的 探讨针刺对干眼兔角膜形态学及角膜组织NF-κB信号通路的影响,分析针刺对干眼的作用机制。方法 取雌雄不拘的健康新西兰兔24只,随机分为空白组、模型组、针刺组、假针刺组,每组6只。空白组为正常对照组,不加任何处理;其余3组动物每天800、 1100、1400和1800时于皮下注射氢溴酸东莨菪碱2.0 mg·kg-1,连续35 d直至实验结束。假针刺组:于造模后第22天给予假针刺治疗(睛明BL1、攒竹BL2、丝竹空SJ23、太阳穴EX-HN5、瞳子髎GB1),钝针头点刺穴位,不刺进穴位,每天1次,连续14 d。针刺组:于造模成功后第22天给予针刺治疗,穴位同假针刺组。造模后第0、21、28、35天分别进行角膜荧光素染色,第35天进行角膜共焦显微镜检查,之后处死动物,在光学显微镜、透射电子显微镜下观察角膜形态学变化,采用Western blot检测角膜组织NF-κB蛋白的表达。结果 与模型组相比,造模后第28、35天,针刺组、空白组兔角膜荧光素染色评分均减小,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后第35天共焦显微镜检查结果显示,模型组和假针刺组与其他组相比,兔角膜基质层出现大量球状免疫细胞和边界不清大小不规律的活化基质层细胞,可见具有不规则细胞间间隙的区域,存在炎症;针刺组基质层细胞形态得到改善,细胞呈轻微激活状态,角膜神经形态未见明显异常。造模后第35天光学显微镜检查结果显示,模型组和假针刺组兔角膜组织表面可见角化过度的扁平上皮细胞,淋巴细胞浸润,局灶上皮细胞层数增多,表面上皮细胞脱落;针刺组角膜上皮有接近4~6层上皮细胞,上皮脱落减少,与模型组相比,淋巴细胞浸润减少。造模后第35天透射电子显微镜检查结果显示,模型组和假针刺组兔角膜上皮细胞出现异常的微绒毛结构和上皮细胞缺失,细胞间隙增宽,粗面内质网严重扩张,桥粒解体伴随线粒体肿胀;针刺组上皮细胞微绒毛结构稀疏且短,仍见局部缺失,粗面内质网轻度扩张,线粒体未见明显肿胀。造模后第35天Western blot检测结果显示,与空白组相比,模型组、假针刺组p-NF-κB p65表达均上调(均为P<0.05);与模型组、假针刺组相比,针刺组p-NF-κB p65表达均下调(均为P<0.05)。结论 针刺可以抑制NF-κB信号通路从而发挥抗炎作用,改善兔干眼模型角膜炎症和损伤。

金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌感染小鼠胃黏膜损伤的研究

目的:探讨金合欢素调节NF-κB信号通路对幽门螺旋菌(Hp)感染小鼠胃黏膜损伤的影响及机制。方法:C57BL/6小鼠以109 CFU/mL Hp(0.3mL)灌胃,并将建模成功小鼠随机分为Hp组、金合欢素低(金合欢素-L,30mg/kg)、高剂量(金合欢素-H,75mg/kg)组、阳性对照[奥美拉唑(400μg/kg)、克拉霉素(7.15mg/kg)及阿莫西林(14.25mg/kg)]组以及金合欢素-H+Prostratin(75mg/kg金合欢素+0.5mg/kg Prostratin)组,并以灌胃0.3mL生理盐水的小鼠为对照组,随后检测血清中胃肠激素[胃动素(MTL),胃饥饿素(Ghrelin),5-色羟胺(5-HT)]指标;分离胃组织,检测其病理学变化、评分,并检测组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白(ZO-1)mRNA表达、细胞凋亡变化及凋亡蛋白Bax、Bcl-2、p-NF-kB p65、NF-kB p65表达。结果:与对照组相比,Hp组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05);与Hp组相比,金合欢素-L、金合欢素-H组、阳性对照组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著增加,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著降低,不同金合欢素组间有差异(P<0.05);与金合欢素-H组相比,金合欢素-H+Prostratin组Ghrelin水平、IL-10水平、Occludin、ZO-1 mRNA表达、Bcl-2表达显著降低,MTL、5-HT水平、损伤评分、IL-1β、TNF-α水平、细胞凋亡率、Bax、p-NF-kB p65/NF-kB p65表达显著增加(P<0.05)。结论:金合欢素可通过NF-κB信号通路改善Hp感染小鼠胃黏膜损伤。

甲基莲心碱通过调控NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤

【目的】探讨甲基莲心碱对脓毒症大鼠急性肺损伤的治疗作用及机制。【方法】采用盲肠结扎穿刺(GLP)法制备脓毒症大鼠模型,造模成功后,将大鼠分为模型组,甲基莲心碱低、高剂量组和甲基莲心碱高剂量+PMA[核转录因子κB(NF-κB)激活剂佛波酯]组,同时设置假手术组,每组15只。术后6 h,给予相应干预,连续2 d。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学改变,并进行损伤病理评分;检测肺组织湿干质量比;血气分析仪检测动脉血氧分压(PaO_(2))和动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western Blot法检测肺组织中NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65(Ser536)、环氧合酶2(COX-2)蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠肺组织损伤严重,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著升高(P<0.01),PaO_(2)水平显著降低(P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,甲基莲心碱低、高剂量组大鼠肺组织损伤明显改善,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著降低(P<0.05或P<0.01),PaO_(2)水平显著升高(P<0.05或P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。然而,PMA干预后,甲基莲心碱对脓毒症大鼠肺组织损伤的改善作用被明显逆转(P<0.01)。【结论】甲基莲心碱可改善大鼠脓毒症急性肺损伤及肺功能,其作用可能与抑制NF-κB信号通路激活,进而减少体内炎症因子释放有关。

藏红花素通过IRF7/NF-κB信号通路对垂体腺瘤的抑制作用

目的通过临床样本及垂体腺瘤HP75细胞的相关分子生物学实验探讨藏红花素(Crocin)在垂体腺瘤(PA)中的作用及其机制。方法收集2022年6月至2023年5月昆明医科大学第一附属医院神经外二科及耳鼻咽喉颅底外科16例PA样本,3例正常对照垂体组织样本来自于昆明医科大学法医学院人体解剖。通过对临床样本检测IRF7 mRNA表达量,敲低HP75细胞IRF7表达检测增殖、迁移、侵袭及凋亡能力;进一步检测HP75细胞中IRF7调控NF-κB表达,以及藏红花素调控PA细胞的生长及其对IRF7/NF-κB信号通路调控作用。结果RT-qPCR检测及免疫组化显示,与正常对照组相比,PA中IRF7 mRNA的表达量增加(P<0.001);si-IRF7组的IRF7蛋白表达量降低(P<0.001);CCK-8、Transwell及流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,敲低IRF7降低HP75细胞的细胞活力(P<0.001),抑制HP75细胞的迁移和侵袭(P<0.001),促进HP75细胞凋亡(P<0.001)。此外,敲低IRF7能抑制p-NF-κB p65/NF-κB p65的表达(P<0.001),抑制p-NF-κB p65/NF-κB p65的表达(P<0.001);而过表达IRF7能部分逆转Crocin的作用(P<0.001),p-NF-κB p65/NF-κB p65的表达(P<0.01);最后,HP75细胞的生物学行为检测结果显示,与Crocin组相比,过表达IRF7能提高HP75细胞的细胞活力,同时促进其迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.001)。结论Crocin处理能抑制PA细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,缓解PA的发展进程。在机制上,IRF7在PA中高表达,敲低IRF7能抑制PA的恶性生长;Crocin抑制PA细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡的作用可通过抑制IRF7/NF-κB信号通路实现。

麝香酮调控BDNF/NF-κB信号通路对多发性抽动症大鼠行为学和神经炎症的影响

目的研究麝香酮对多发性抽动症(Tourette syndrome,TS)大鼠行为学和神经炎症的影响,并分析相关作用机制。方法60只大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(TS组)、麝香酮低剂量组(L-Mus组)、麝香酮高剂量组(H-Mus组)、阳性药物组(泰必利组),每组12只。Control组腹腔注射生理盐水,其余各组大鼠腹腔注射3,3-亚氨基二丙腈(IDPN)建立TS大鼠模型。采用双盲法检测大鼠行为学,ELISA法检测5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法和免疫组织化学染色法检测相关蛋白表达。结果与Control组比较,TS组大鼠运动行为学评分和刻板行为学评分升高,血清和纹状体中IL-6、IL-1β、TNF-α水平均升高,纹状体中5-HT、DA水平均降低,脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达量降低,磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)和磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白表达量均增加(均P<0.05);与TS组比较,L-Mus组、H-Mus组和泰必利组大鼠上述指标均显著改善,且H-Mus组和泰必利组大鼠各指标改善程度均显著优于L-Mus组(均P<0.05)。结论麝香酮能够改善TS大鼠行为学和神经炎症,其作用机制可能与调控BDNF/NF-κB信号通路有关。