鼠伤寒沙门菌stn基因突变株的构建与毒力检测

作者构建了鼠伤寒沙门菌肠毒素 (stn)基因插入失活型与缺失型突变的重组自杀载体质粒 ,通过重组自杀质粒中的突变stn基因与鼠伤寒沙门菌株 2 0 0 0染色体上野生型stn基因发生同源交换 ,筛选获得stn基因突变的同源突变菌株。在小鼠体内检测菌株stn基因产物生物活性的结果表明 ,突变菌株诱发小鼠肠液分泌的能力较野生菌株明显减弱 ,而小鼠口服突变菌株的半致死剂量较野生株明显增高 ,提示stn基因是鼠伤寒沙门菌致病机制中一个较为重要的毒力因子。

氯霉素处理对拟南芥STN7和STN8基因表达的影响

本实验运用多肽抗体、磷酸化抗体和半定量RT-PCR技术,研究了叶绿体蛋白合成抑制剂——氯霉素(CAP)处理对拟南芥叶片在生长光强下LHCⅡ蛋白与PSⅡ核心蛋白的磷酸化、STN7和STN8基因在mRNA水平和蛋白水平的变化.结果显示:与对照相比,CAP处理叶片在生长光强下STN7基因表达的mRNA水平减少,类囊体膜上酶蛋白含量较低,LHCⅡ蛋白磷酸化水平也较低;而STN8基因表达的mRNA水平增加,类囊体膜上酶蛋白含量增加了1倍,与PSⅡ核心蛋白中D1、D2和CP43的磷酸化水平较高相吻合.研究表明,氯霉素抑制叶绿体蛋白合成后并影响核基因STN7和STN8的表达.

可视化跨越式滚环等温扩增技术检测食品中沙门氏菌

建立一种新型的核酸体外等温扩增方法--可视化跨越式滚环等温扩增技术(SRCA)检测沙门氏菌。根据沙门氏菌stn基因序列设计引物,进行特异性验证。测定该技术的灵敏度以及人工污染鸡肉样品的检出限。通过检测多种实际食品样品,评价SRCA方法的敏感性、特异性和符合率。研究结果表明:所有沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌呈阴性结果,说明引物特异性良好。SRCA方法检测沙门氏菌DNA的灵敏度为5.6×10^0 fg/μL,检出限为3.8×10^1 CFU/mL;PCR方法的灵敏度为5.6×10^2 fg/μL,检出限为3.8×10^3 CFU/mL。该方法检测30个实际样品的检出率为13.33%,并与GB 4789.4-2016方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%,96.30%和96.67%。结论:可视化跨越式滚环等温扩增技术具有操作简便,特异性强,灵敏度高,检出限低,检测成本低,对试验设备要求低等优点,适用于基层单位对食品中沙门氏菌的快速检测。

鼠伤寒沙门菌肠毒素基因功能与毒力作用的研究

目的 研究确定肠毒素基因 (enterotoxingene ,stn)在鼠伤寒沙门菌致病机理中的功能和毒力作用。方法 以鼠伤寒沙门菌株 2 0 0 0为研究对象 ,在克隆的stn基因SfiⅠ位点拼接入Km抗性标记基因以形成stn基因的插入失活 ,以此构建带有突变stn基因的重组自杀载体质粒 ,使重组自杀载体质粒与菌株 2 0 0 0染色体的同源基因发生交换 ,以突变stn基因置换其野生型拷贝 ,造成菌株 2 0 0 0stn基因位点的专一突变 ,筛选获得同源突变菌株。利用stn基因、Km抗性基因和自杀载体作探针进行菌株染色体Southernblot杂交 ,检测菌株对小鼠肠腔结扎攻毒实验和小鼠口服菌株半致死量的指标。结果 菌株 2 0 0 0染色体上野生型stn基因已被突变stn基因取代 ,同源突变菌株造成小鼠肠腔分泌能力比野生菌株明显减弱 (P <0 0 1) ,小鼠口服突变菌株的致死剂量较野生菌株明显增高 (P <0 0 1)。结论 stn基因产物能够诱发小鼠肠腔液体分泌反应 。