拟南芥STN7和STN8蛋白激酶的结构预测和功能分析

STN7和STN8蛋白激酶分别参与了LHCⅡ蛋白和PSⅡ核心蛋白的磷酸化。作者用折叠识别的方法建立了拟南芥蛋白激酶STN7和STN8核心结构域的三维结构,同时结合其他生物信息学方法对STN7和STN8蛋白的结构和作用机制进行了探讨,选择特异位点合成多肽,并制备抗体。结果表明STN7和STN8蛋白激酶活性区域的电荷和形状互补性决定了两者作用底物蛋白的差异,蛋白印迹结果显示分别制备得到了STN7特异抗体和STN8特异抗体,证实结构预测的正确。

氯霉素处理对拟南芥STN7和STN8基因表达的影响

本实验运用多肽抗体、磷酸化抗体和半定量RT-PCR技术,研究了叶绿体蛋白合成抑制剂——氯霉素(CAP)处理对拟南芥叶片在生长光强下LHCⅡ蛋白与PSⅡ核心蛋白的磷酸化、STN7和STN8基因在mRNA水平和蛋白水平的变化.结果显示:与对照相比,CAP处理叶片在生长光强下STN7基因表达的mRNA水平减少,类囊体膜上酶蛋白含量较低,LHCⅡ蛋白磷酸化水平也较低;而STN8基因表达的mRNA水平增加,类囊体膜上酶蛋白含量增加了1倍,与PSⅡ核心蛋白中D1、D2和CP43的磷酸化水平较高相吻合.研究表明,氯霉素抑制叶绿体蛋白合成后并影响核基因STN7和STN8的表达.

水稻STN8激酶基因反义表达载体的构建及遗传转化

采用RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)技术从水稻中克隆获得光系统Ⅱ(photosnythesis systemⅡ,PSⅡ)蛋白激酶STN8基因片段.利用反义抑制技术,将STN8部分序列片段反向插入到植物表达载体pHB中,构建了植物反义表达载体pHBantis tn8.将重组载体转化农杆菌EHA105感受态细胞中,利用农杆菌介导法将其转入水稻.提取转基因植株基因组DNA,通过PCR检测转基因水稻中潮霉素基因的表达,初步筛选获得了阳性植株.转基因阳性苗的获得为进一步研究水稻PSⅡ蛋白激酶STN8的功能奠定了基础.