2型糖尿病肾病患者肾组织中STOML2的表达及作用

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)患者肾组织中STOML2的表达及作用。方法免疫组化检测临床2型糖尿病肾病患者肾组织STOML2的表达及定位,采用慢病毒转染方法建立稳定过表达STOML2的HK-2细胞系,并应用Western blot检测肾小管上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、Fibronectin和STOML2的表达。结果 STOML2在DN患者肾组织的肾小管上皮细胞胞浆中表达明显升高。在高糖刺激HK-2细胞建立的EMT模型中,STOML2呈时间依赖表达上调。STOML2稳定高表达时,E-cadherin表达下调,而Fibronectin明显上调,即能促进肾小管上皮细胞发生EMT。结论 STOML2可能通过促进肾小管上皮细胞向间充质细胞分化,进而参与糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展。

敲低STOML2基因对前列腺癌细胞PC3增殖和迁移以及线粒体膜电位的影响

目的研究发现头颈鳞癌、甲状腺乳头状癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中Stomatin样蛋白2(STOML2)基因高表达。通过慢病毒技术敲低PC3细胞STOML2基因,观测其对列腺癌细胞增殖、迁移和线粒体膜电位及Erk和Akt通路的影响。方法用PEI法转染HEK293T细胞制作能敲低STOML2基因(shDNA-STOML2)及其随机序列对照(SHCON)的慢病毒,将其分别感染前列腺癌细胞PC3。以未转染前列腺癌细胞PC3为空白对照组,以转染随机序列为阴性对照组,以转染shDNA-STOML2慢病毒载体为敲低组。用免疫荧光显微镜和Western blot检测感染效率和STOML2蛋白表达水平。MTT实验、细胞划痕愈合实验检测对PC3细胞增殖和迁移的影响。流式细胞术及Western blot检测敲低STOML2基因后对PC3细胞线粒体膜电位以及Erk、Akt通路的影响。结果成功构建了shDNA-STOML2和随机序列SHCON两种慢病毒质粒。包装的慢病毒感染PC3细胞感染效率约100%,阴性对照组较敲低组的STOML2/β-actin相对表达水平明显升高(P<0.01),提示模型制作成功。与阴性对照组相比,敲低组在24、48、72 h的细胞活力(1.313±0.028、1.434±0.023、1.558±0.063)较阴性对照组(1.252±0.049、1.306±0.028、1.373±0.032)增加(P<0.05),24、48 h细胞体外迁移能力下降(P<0.05)。提示敲低STOML2基因可以让细胞增殖加速,但迁移能力降低。与阴性对照组相比,细胞线粒体膜电位升高(P<0.05);P-erk蛋白降低;Akt表达虽然降低,但P-Akt的增加(P<0.05)。结论敲低STOML2基因可以使PC3细胞增殖速度加快、体外迁移能力降低,可能与其增加PC3细胞膜电位、Akt通路被激活和Erk通路降低有关。STOML2基因可能在前列腺癌发生和转移过程中起着双重角色。

消化系统多种癌变组织中3种蛋白质的表达谱

在口腔、食管和结直肠癌病灶中,TATA序列结合蛋白相关因子1(TATA-box binding protein associated factor 1 like,TAF1L)、stomatin家族蛋白1(stomatin-like protein 1,STOML1)和stomatin家族蛋白2(stomatin-like protein 2,STOML2)存在异常表达.为探究它们在消化系统癌变过程中的作用机理,利用6种消化道肿瘤(食道、胃、结肠、直肠、肝脏和胰腺)及癌旁组织的微陈列芯片,通过多重免疫组织化学染色,比对分析TAF1L、STOML1和STOML2这3种蛋白质在癌与癌旁组织的差异表达及与癌变的关联.结果发现,STOML2在食道、胃、结肠、直肠、肝脏和胰腺这6种消化系统癌组织中均呈显著性高表达(P<0.001),而同一家族成员STOML1则仅在食管癌和肝癌组织中表达明显增高(P<0.005).另外,除胰腺癌灶外,TAF1L在其余5种消化系统癌组织中也呈现高表达(P<0.005).同时,TAF1L、STOML1和STOML2这3种蛋白质均与上皮间充质转化的关键蛋白质MMP9有共定位现象.由此表明,3种蛋白质TAF1L、STOML1和STOML2在多种癌组织中可能具有广泛的促癌作用.由于3种蛋白质在多种癌组织的表达水平不同,说明它们各自存在着组织特异性,且具有不同的功能使命,需进一步研究TAF1L、STOML1和STOML2这3种蛋白质在消化系统恶性肿瘤发生发展过程中各自的分子病理学潜能,如能将它们打造成用于精准诊疗和预后判断的新型分子标志物,此研究结果将有重要的临床意义.