转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响（英文）

背景:目前已有研究报道转化生长因子β超家族对各类干细胞成骨矿化的作用,但转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用仍有待研究。目的:观察转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞增殖和矿化能力的影响。方法:采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养,测定细胞集落克隆形成率,流式细胞术鉴定细胞表面标记物CD146,细胞爬片行Vimentin和STRO1免疫化学染色进行人乳牙牙髓干细胞鉴定;对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞给予肝素和质量浓度1,5,25μg/L的转化生长因子β3进行干预。MTS法测细胞生长曲线;茜素红染色;碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论:实验所得细胞集落克隆形成率高,细胞表面标记物CD146呈阳性,Vimentin和STRO1免疫化学呈强阳性,鉴定获得人乳牙牙髓干细胞。MTS结果显示,给予转化生长因子β3刺激人乳牙牙髓干细胞后并无明显的促增殖的作用。碱性磷酸酶活性检测结果显示,转化生长因子β3-肝素联合作用可随着浓度的增加而增强人乳牙牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性,其中质量浓度分别为5,25μg/L转化生长因子β3和肝素联合作用组与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比显著性升高(P<0.01)。转化生长因子β3-肝素联合作用组的茜素红染色均呈阳性,其中以5μg/L转化生长因子β3-肝素联合作用组染色最强。结果证实,转化生长因子β3与肝素联合作用可促进人乳牙牙髓干细胞矿化能力。

miRNA-222靶向Smad2/7对牙周膜干细胞向成骨分化的影响

目的:探讨miRNA-222靶向Smad2/7对牙周膜干细胞向成骨分化的影响。方法:采用流式细胞术鉴定人牙周膜干细胞表面标志物,采用油红O染色、茜素红染色和阿尔新蓝染色法验证成脂、成骨和软骨分化能力,同时验证miRNA-222、sh-Smad2和sh-Smad7对成骨分化的影响,RT-PCR检测miRNA-222在成骨分化中的表达,采用Western blot检测miRNA-222对ALP、Runx2、OCN、Smad2和Smad7蛋白的影响。结果:牙周膜干细胞表面呈阳性表达的有STRO1和CD146,阳性率分别为98.63%和99.16%。RT-PCR检测结果显示,在成骨分化过程中,人牙周膜干细胞中miRNA-222表达明显降低。茜素红染色结果显示,与空白组相比,miRNA-222模拟组中的红褐色矿化结节的数量明显降低(P<0.05),miRNA-222抑制组中的红褐色矿化结节的数量显著增多(P<0.05);与sh-NC相比,sh-Smad2组和sh-Smad7组红褐色矿化结节的数量显著减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与空白组相比,miRNA-222模拟组的ALP、Runx2、OCN蛋白表达明显降低(P<0.05),与miRNA-222模拟组相比,miRNA-222抑制组的ALP、Runx2、OCN蛋白表达显著升高(P<0.05);与空白组相比,miRNA-222模拟组的Smad2和Smad7蛋白表达明显降低(P<0.05),与miRNA-222模拟组相比,miRNA-222抑制组的Smad2和Smad7蛋白表达显著升高(P<0.001)。结论:过表达miRNA-222可以减少Smad2和Smad7表达,从而抑制人牙周膜干细胞的成骨分化。