STT3A和STT3B在上皮性卵巢癌中的表达及与预后的关系

目的探究上皮性卵巢癌(EOC)组织中STT3A和STT3B的表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法选择接受手术治疗的88例EOC患者癌组织为实验组,22例非EOC患者(子宫或卵巢良性肿瘤)的正常输卵管上皮及其正常卵巢组织为对照组。收集患者的临床资料并进行随访。采用免疫组织化学染色方法检测STT3A和STT3B的表达,分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果STT3A和STT3B在EOC组织中的表达水平显著高于对照组(P<0.05),且STT3A表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。STT3B的表达水平与FIGO分期、血清CA125水平、淋巴脉管间隙浸润、肿瘤分化程度、淋巴结转移具有显著的相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,STT3A和STT3B高表达与EOC患者的不良预后相关(P<0.05)。多因素Cox回归分析发现,STT3A和STT3B高表达是EOC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。Western blot结果显示STT3A和STT3B在卵巢癌细胞系中高表达(P<0.05)。结论STT3A和STT3B在EOC癌组织中高表达,且其表达水平与患者不良预后有关,可能是判断EOC患者预后的潜在标志物。

β-catenin、STT3A和PD-L1在胃癌组织中的表达及与病理特征和预后的相关性

目的:探讨β-catenin、STT3A及PD-L1相关蛋白在胃癌组织中的表达相关性及其与病理特征和预后相关性。方法:选取2020年02月至2021年10月63例胃癌组织及癌旁组织蜡块标本,通过免疫组化检测胃癌及癌旁组织中β-catenin、STT3A及PD-L1相关蛋白的表达情况,探讨其与临床病理参数之间的关系,并分析β-catenin、STT3A及PD-L1三者之间的相关性。通过Western blot检测胃癌细胞中的β-catenin、STT3A及PD-L1蛋白的表达情况,探讨稳定PD-L1表达糖基化修饰的可能影响因素,为胃癌免疫检查点抑制剂疗法提供新思路。结果:胃癌组织中β-catenin、STT3A阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),与肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、临床TNM分期有关(P<0.05),但与年龄、性别均无显著相关性(P>0.05)。胃癌组织中PD-L1阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),与肿瘤分化程度、临床TNM分期有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。在胃癌组织中,β-catenin与STT3A、PD-L1的表达呈正相关(P<0.05),PD-L1与STT3A的表达呈正相关(P<0.05)。结论:胃癌组织中β-catenin、STT3A、PD-L1三种蛋白的表达均高于癌旁组织,且与肿瘤分化程度、临床TNM分期有关,因此三种蛋白可能与肿瘤的预后相关。此外,β-catenin、STT3A、PD-L1三者之间的的表达呈相关性,结果表明胃癌组织中可能存在β-catenin调控STT3A从而调节PD-L1的糖基化过程,从而影响PD-L1稳定性的表达。

胃癌组织中IL-6、STT3A和PD-L1的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中白介素6(IL-6)、STT3A和程序性死亡受体配体1(PD-L1)的表达及临床意义。方法收集2017年1月至2019年12月90例胃癌及相应癌旁组织石蜡标本,采用免疫组织化学法检测上述组织中IL-6、STT3A和PD-L1的表达,分析三者在胃癌组织中表达的相关性及与胃癌临床病理特征的关系,并分析三者表达与胃癌预后的关系。结果胃癌组织中IL-6、STT3A和PD-L1的阳性表达率分别为86.7%(78/90)、88.9%(80/90)和74.4%(67/90),在癌旁组织中三者的阳性表达率分别为15.6%(14/90)、20.0%(18/90)和7.8%(7/90),差异均有统计学意义(P<0.001)。胃癌组织中IL-6、STT3A和PD-L1的表达与淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、分化程度和Lauren分型无关(P>0.05)。在胃癌组织中,IL-6与STT3A的表达呈正相关(r=0.236,P=0.025),IL-6与PD-L1的表达呈正相关(r=0.268,P=0.011),STT3A与PD-L1的表达呈正相关(r=0.353,P=0.001)。全组中位OS为24.0(95%CI∶20.773~27.227)个月。IL-6阴性表达者的中位OS未达,长于阳性表达者的22.0(95%CI∶18.943~25.057)个月,差异有统计学意义(P=0.042);STT3A阴性表达者的中位OS未达,长于阳性表达者的22.0(95%CI∶18.591~25.409)个月,差异有统计学意义(P=0.047);PD-L1阴性表达者的中位OS未达,长于阳性表达者的21.0个月(95%CI∶17.136~24.864),差异有统计学意义(P=0.025)。结论 IL-6、STT3A和PD-L1在胃癌组织中的阳性表达率升高,与淋巴结转移和TNM分期有关,且阳性表达者的OS较短。三者对胃癌的发生、发展可能有协同促进作用。

杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测

目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法转化到酵母菌株Y187中,并通过表型筛选检测诱饵蛋白有无毒性和自激活作用。结果:成功获得了stt3a可溶端的基因片段,其表达的蛋白对酵母菌株Y187无毒害,报告基因-半乳糖苷酶活性没有被诱导。结论:酵母双杂交GAL4系统可以被用来研究杜氏盐藻中与stt3a相互作用的蛋白。

杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a功能结构域的克隆与表达分析

为了研究STT3a基因在杜氏盐藻耐盐及鞭毛再生方面的作用,根据衣藻、拟南芥等STT3a蛋白的氨基酸高度保守序列VCVFTA、DVDYVL设计一对简并引物,采用RT-PCR及3'RACE的方法扩增杜氏盐藻STT3a蛋白功能结构域的cDNA序列。序列分析显示克隆的cDNA全长1650bp,具有一定保守性,与衣藻、拟南芥和人的相似性分别为48%、50%和46%。实时荧光定量PCR结果显示杜氏盐藻STT3amRNA水平随着盐浓度的升高而逐渐增加,其水平在3.5mol/LNaCl浓度时比在1.5mol/LNaCl浓度时升高了11倍(P<0.01)。另外,与没有脱鞭毛的杜氏盐藻相比,STT3amRNA在鞭毛再生过程中持续高表达。本研究显示杜氏盐藻STT3a基因的高表达可以增强其盐适应和鞭毛再生能力。

松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的克隆与表达分析

为阐明松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的结构特点和在不同虫态、成虫的不同部位以及幼虫组织中的表达情况,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆松墨天牛STT3B基因cDNA,命名为MaSTT3B,其Gen Bank登录号为KT362368。序列分析显示其长度为2 552 bp,其中开放阅读框长2 322bp,编码773个氨基酸。MaSTT3B的氨基酸序列与赤拟谷盗相似性最高,为93%,在系统发育树的同一个分支上。用实时荧光定量PCR分析MaSTT3B的相对表达量,结果表明:STT3B在蛹中的表达量高于成虫;在成虫足的表达量最高;在幼虫各组织中,体壁的相对表达量最高。

过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母构建

目的通过过表达N-糖基转移酶,构建1株糖基化修饰效率更高的糖基工程酵母。方法利用尿嘧啶(URA3)营养缺陷型筛选标记,在糖基工程酵母4-32中转入醇氧化酶1(alcohol oxidase 1,AOX1)启动子控制的利士曼原虫N-糖基转移酶星状孢子素和温度敏感性酶3(staurosporine and temperature sensitivity 3,STT3)D亚基,通过SDS-PAGE、Western印迹和肽N-糖苷酶F(peptide-N-asparigineamidase F,PNGase F)酶切等方法,分析4-32-STT3D表达的抗人表皮生长因子受体2(HER2)抗体(anti-human epidermal growth factor receptor 2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)N-糖基化程度,并测定STT3D转入和诱导表达对酵母生长情况的影响。结果 SDS-PAGE结果显示,4-32-HL菌表达的抗HER2抗体除有一条相对分子质量约55×103的重链主带外,还有一条约50×103的未糖基化条带。4-32-HL-STT3D菌表达为均一的55×103条带,无50×103条带。PNGase F酶切后,上述重链呈50×103的均一条带。Western印迹证明以上所有条带均为抗体成分。以GM-CSF作为报告蛋白验证STT3D的作用,结果显示,4-32-GM-CSF菌表达的GM-CSF为22×103和20×103的两条带,而4-32-GM-CSF-STT3D表达则为均一的22×103条带。PNGase F酶切4-32-GM-CSF和4-32-GM-CSF-STT3D菌表达的GM-CSF后,GM-CSF呈18×103的均一条带。分别测定STT3D外源基因转入和诱导表达时对酵母生长情况的影响,统计学分析显示,STT3D转入不诱导对酵母生长影响不显著,STT3D诱导表达对酵母生长影响极显著。结论过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母对靶标蛋白具有更高的N-糖基化修饰效率。