建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制

目的摸索相关参数建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制。方法1.建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型的方法:采用随机数字表法将雄性大鼠分为5组,即空白对照组,高原低氧6h组、24h组、48h组、72h组,适应性喂养7 d后进低压氧舱(模拟海拔7000 m),以肺组织纹理模糊、肺泡壁变厚、肺泡间隔增宽判断造模成功。2.探讨高原低氧肺损伤机制的方法:分别比较各组大鼠动脉血血气分析(ABG)结果、肺组织血管紧张素II(Ang II)含量、肺组织内皮素1(ET-1)含量和肺组织血管紧张素转化酶(ACE)m RNA的表达情况及肺组织超微结构,并作相关性分析。结果1.各组雄性大鼠ABG相关指标的变化:与对照组比较,高原低氧6 h、24 h、48 h、72 h组氧分压(PaO_(2))、动脉血氧饱合度(SaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))和酸碱度(p H)值均下降,在一定时间范围内缺氧时间越长下降越明显(P<0.05)。2.各组雄性大鼠肺组织形态学的变化:与对照组比较,光镜下可见高原低氧各组出现不同程度的肺纹理模糊、肺泡壁增厚、肺泡间隔增宽;随着缺氧时间延长,肺组织损伤逐渐加重。3.各组雄性大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量变化:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量明显升高(P<0.01),在一定时间范围内随缺氧时间延长而增加,72 h组达到高峰。4.各组雄性大鼠肺组织ACE m RNA表达比较:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织ACE m RNA表达均上调,6h组升高显著,72h组达到峰值(P<0.01)。结论利用低压氧舱模拟海拔7000 m环境,可以有效建立大鼠肺组织损伤模型;高原低氧肺损伤机制可能与ET-1、AngⅡ及ACE m RNA的表达水平上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)失衡有关。

大鼠急性血瘀证模型造模方法的网状Meta分析

目的:采用网状Meta分析评价不同急性血瘀证模型造模方法的效果,为中医实验研究急性血瘀证动物模型的制备提供循证依据。方法:检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(CSPD)、中文科技期刊数据库(CCD)中有关急性血瘀证模型的建模方法,应用Stata软件进行网状Meta分析。结果:最终纳入32项研究,共纳入9种造模方案。各项指标最优前3位概率排序分别为:1)全血黏度:1 S^(-)1切变率右旋糖酐>高脂>氢化可的松+肾上腺素,10 S^(-)1切变率冰水浴>肾上腺素>高脂+力竭游泳,30 S^(-)1切变率多因素刺激>右旋糖酐>肾上腺素,60 S^(-)1切变率多因素刺激>右旋糖酐>肾上腺素,150 S^(-)1切变率肾上腺素>冰水浴>高脂+力竭游泳,200 S^(-)1切变率右旋糖酐>氢化可的松+肾上腺素>角叉莱胶+内毒素;2)血浆黏度:右旋糖酐>多因素刺激>肾上腺素;3)红细胞聚集指数:冰水浴>多因素刺激>高脂+力竭游泳。受纳入研究质量和数量的限制,所得结论仍待进一步验证。结论:右旋糖酐、冰水浴、多因素刺激、肾上腺素造模效果更显著。

高频超声在构建SD大鼠皮下移植性乳腺癌模型中的应用

目的:应用MADB-106大鼠乳腺癌细胞悬液皮下移植法建立SD大鼠乳腺癌移植性肿瘤动物模型,并使用高频超声监测肿瘤生长情况。方法:选取7~8周龄雌性SD乳鼠16只,将处于对数生长期的MADB-106大鼠乳腺癌细胞悬液于大鼠腹股沟皮下接种,应用高频超声观察成瘤率、肿块大小、血供情况及其它声像图特征。结果:SD大鼠接种成功率为100%,死亡2只,剩余14只生长良好;超声检查肿块为类圆形,内部低回声且稍不均匀,边界尚清,后方回声衰减,彩色多普勒扫查肿块内部及周边可见较丰富血流信号;3周后切除瘤体组织,大体观肿块成灰白色,多呈椭圆形,部分边缘呈分叶状改变,肿瘤血管较丰富,镜下可见肿瘤细胞大小形状各异,核大深染,异型性明显。结论:通过MADB-106大鼠乳腺癌细胞接种于雌性SD大鼠腹股沟皮下,成功建立了大鼠乳腺癌移植性肿瘤动物模型。高频超声技术可以在SD大鼠乳腺癌皮下成瘤过程中对肿物的大小、形态、边界、内部回声及血流等生物学情况进行动态检测,是观察和评价瘤体动态变化过程的重要技术手段。

大鼠急性梗阻性化脓性胆管炎模型的建立与评估

目的建立一种稳定的大鼠急性梗阻性化脓性胆管炎模型,检测其病理生理指标,为急性胆管炎、胆汁淤积等疾病的研究提供稳定可靠的标准化动物模型。方法选用SPF级雄性SD大鼠,采用胆总管下段注射类毒素及胆总管结扎方式进行模型构建,评估大鼠造模前后的体重变化、死亡情况、肝功能主要指标变化及肝组织病理改变情况。结果造模后模型组大鼠体重明显降低;假手术组大鼠无死亡,肝功能无异常;模型组大鼠死亡3只,模型组死亡率12%,肝功能主要指标及肝病理呈现出明显的胆汁淤积及肝功能损伤性改变。结论本研究成功建立了大鼠急性梗阻性化脓性胆管炎模型,该模型具有操作简便、损伤小、死亡率低、造模成功率高等优势,可为多种常见疾病的机制研究和药物研发提供标准化的实验动物模型。

一种对激素具有反应性的大鼠阴道类器官模型建立及鉴定

目的:构建一种生理相关的、对激素具有反应性的大鼠阴道类器官模型。方法:取大鼠阴道组织,通过酶解、消化等方法分离获得原代大鼠阴道上皮细胞,包埋于基质胶中并使用改良类器官培养基进行3D培养。HE染色观察类器官形态特征,免疫荧光对阴道上皮特异性角蛋白和增殖相关蛋白等进一步进行表征。雌、孕激素处理验证阴道类器官对激素的反应性。结果:大鼠阴道类器官呈直径约100μm的实心球状。HE染色显示其由多层上皮细胞构成,免疫荧光染色显示其表达的Krt5/8、Krt15、Ki67、TP63等阴道上皮标志物,与原始阴道上皮组织一致。大鼠阴道类器官对雌激素和孕激素产生应答反应,雌激素处理后,阴道上皮终末分化标志物Krt6b、Krt13和增殖标志物Ki67等基因表达水平升高。结论:使用基质胶包埋,类器官培养基浸润培养的方法,成功构建一种对激素具有反应性的大鼠阴道类器官模型。

链脲佐菌素诱导糖尿病脑病大鼠模型的构建及评价

背景:目前研究较成熟的糖尿病脑病模型主要有链脲佐菌素诱导模型、高糖高脂饮食诱导模型和自发性动物模型。建立简便易行、周期短、安全有效的糖尿病脑病模型对其发病机制的深入探讨和治疗药物的筛选有重要的作用。目的:进一步验证链脲佐菌素诱导糖尿病脑病大鼠模型的方法并对其进行评价。方法:将20只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=10),模型组大鼠左下腹腔一次性注射45 mg/kg链脲佐菌素建立糖尿病实验动物模型,对照组大鼠用等量的柠檬酸缓冲液代替注射。实验期间监测大鼠体质量、饮食量、饮水量和血糖,8周后检测葡萄糖耐量和氧化应激水平,并比较脑组织病理变化及凋亡蛋白的表达情况。结果与结论:①与对照组相比,模型组大鼠饮食量、饮水量、脑指数、血糖和血糖曲线下面积显著升高、体质量明显下降(P<0.01);②脑组织病理学显示,模型组大鼠存活神经细胞数量明显减少(P<0.01),神经细胞病理损伤明显高于对照组;③模型组大鼠较对照组血清超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽活力均明显降低(P<0.01),氧化活性丙二醛的浓度明显升高(P<0.05);④脑组织中凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3表达水平增加,Bcl-2表达水平降低(P<0.01);⑤结果说明,注射45 mg/kg链脲佐菌素8周后可以使糖尿病大鼠脑组织有明显的病理损伤,成功构建糖尿病脑病大鼠模型。

两种常用压力性损伤大鼠模型的建立方法与效果评价

目的通过比较两种不同的压力性损伤大鼠模型的建立方法,探索更合适的压力性损伤动物模型制备方法。方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=6)、模型A组(n=6)和模型B组(n=6)。对照组对模拟造模部位脱毛后进行碘伏处理。模型A组采用单纯深部组织异物植入法进行纵向加压;模型B组使用磁铁加压法进行横向加压,记录制备各组大鼠产生压力性损伤模型的全程时间及各分期时间,观察大鼠的一般情况,并进行成模率、死亡率、感染率的比较。结果肉眼观察到模型A组和模型B组均逐渐出现受压部位红肿、溃烂,出现渗血、渗液并伴有坏死现象。模型A组与模型B组产生压力性损伤全程时间比较:两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。模型A组与模型B组产生压力性损伤各期时间比较:Ⅰ期两组之间差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05);Ⅳ期两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠精神、运动评分与模型A组、模型B组比较有显著性差异(P<0.05)。模型A组大鼠与模型B组大鼠一般状态有明显区别,均出现毛色黯淡、活跃度下降的现象。模型A组大鼠与模型B组成模率为100%。模型A组死亡率、感染率高于模型B组,分别为33.34%、16.70%。结论两种方式均可成功制备压力性损伤Ⅳ期模型,二者既有共性也有各自特点,磁铁加压法用时短,大鼠一般状态良好,死亡率和感染率低,适合短时间内干预性研究;单纯深部组织异物植入法用时长,需要大鼠有一定耐受性,感染率高,死亡率高,可运用于长期的观察类压力性损伤大鼠的研究。

三种心力衰竭大鼠模型的病理差异及中医证候评价

目的对多柔比星(doxorubicin,DOX)、高血压和异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心力衰竭(以下简称“心衰”)大鼠模型在造模过程、病理特点等方面进行比较,并对其中医证候进行评价,以助研究者选择适当的模型。方法30只雄性Dahl盐敏感性大鼠为高血压心衰模型组(8%NaCl高盐饲料喂养,连续喂养20周);60只雄性SD大鼠随机均分为DOX心衰模型组(DOX1.5 mg/kg,每周2次,腹腔注射,共7周)和ISO心衰模型组[ISO 5 mg/(kg·d),连续7 d,腹腔注射,再继续饲养3周];另取10只雄性SD大鼠作为空白对照组。对大鼠心脏、肾脏、肝脏进行HE染色,对心肌细胞进行Masson染色;用ELISA法检测大鼠血清N末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)水平;用超声心动图评估大鼠的心脏功能;结合自然状态和一般体征探讨3种心衰大鼠模型的中医证型。结果与空白对照组比较,DOX心衰模型组大鼠活动量减少、体温降低、水肿明显;高血压心衰模型组大鼠精神不振、尿量减少并且水肿;ISO心衰模型组大鼠活动减少、体温下降、大便稀软;DOX心衰模型组和高血压心衰模型组的肾脏均有较严重的病理损伤,ISO心衰模型组仅有心脏损伤;3种心衰模型组血清NT-proBNP均增加(P<0.05)、左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)均降低(P<0.05)。DOX心衰模型组和ISO心衰模型组中医证候为阳虚证,高血压心衰模型组中医证候为气阴两虚证。结论根据大鼠的宏观表现和微观指标,3种模型病理有较大差异,应慎重选择;DOX和ISO心衰模型可能为阳虚证,高血压心衰模型可能为气阴两虚证。

改良Feeney自由落体法建立大鼠创伤性脑损伤模型

背景:目前关于Feeney自由落体创伤性脑损伤模型,探讨减轻开颅过程中持续磨骨损伤因素的文献较少。目的:通过改变开颅骨窗方式改良创伤性脑损伤大鼠模型。方法:将36只SD大鼠随机平均分成假手术组、模型组和改良模型组。改良模型组造模过程中改良了开骨窗的方式,用小钻头磨骨钻低速2 m/s,在打击的损伤区域边缘打6-8个小孔,每圆孔直径为0.3-0.5 mm,感到空腔而不触及脑实质后立即抽出。改良模型组和假手术组采用改良后的方法开骨窗,模型组按常规开骨窗方法,实施的打击参数相同改良模型组;假手术组不实施打击。造模后第1天对大鼠进行mNSS评分;造模后第1,7天扫描T2WI磁共振成像,测量T2值;造模后第7天,苏木精-伊红染色病理切片观察脑组织形态学,并检测血液黏度和炎症因子白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:①造模后第1天,模型组、改良模型组大鼠mNSS评分均高于假手术组(P<0.0001),改良模型组评分低于模型组(P<0.0001);②造模后第1,7天,模型组、改良模型组T2值均高于假手术组(P<0.05),改良模型组T2值低于模型组(P<0.05);③造模后第7天,模型组和改良模型组的血液黏度值、白细胞介素6、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平均高于假手术组(P<0.05),改良模型组白细胞介素6水平低于模型组(P<0.05);④基于Feeney自由落体法的创伤性脑损伤大鼠改良模型较好地控制了创伤性脑损伤大鼠造模中开颅骨的损伤因素。

不同高脂饲料配方对建立非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响

目的:比较3种不同配方高脂饲料构建非酒精性脂肪肝大鼠模型的差异,提高高脂饲料建立非酒精性脂肪肝大鼠模型的成功率,为非酒精性脂肪肝病的研究提供稳定可靠的动物模型。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分为普通饲料对照组、高脂饲料1组(HFD1组)、高脂饲料2组(HFD2组)、高脂饲料3组(HFD3组)。各组大鼠分别给予相应饲料8周。造模期间记录大鼠一般情况、体质量和摄食量。喂养8周后,采用腹部超声、计算机断层扫描(CT)、核磁共振成像(MRI)对大鼠肝脏进行检查。取血和肝脏,检测肝功能指标(丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶)、血脂指标(甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇)和炎症指标(IL-1β、IL-6、TNF-α)的变化。肉眼观察肝脏大体形态,计算其肝指数和Lee’s指数。比较上述指标在各组间的差异,综合评估不同配方高脂饲料对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响。结果:与对照组大鼠相比,HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠精神变差、活动减少、脱毛现象加重、摄食量减少、体质量明显升高,肝指数、Lee’s指数显著提高,肝脏体积增大,边缘较钝,可见脂肪变性和沉积,且以HFD3组大鼠变化最为明显;HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠血清谷丙转氨酶、天门冬氨酸氨基转移酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高,高密度脂蛋白胆固醇显著降低,且HFD3组更为明显;HFD1组、HFD2组、HFD3组大鼠肝脏肿大,实质回声增强,肝内管状结构显示欠清,肝和脾的CT值比值明显降低,同/反相位图上肝脏实质信号差别明显,且HFD3组对于大鼠影像学变化影响更大。结论:三种高脂饲料喂养SD大鼠8周后,均可建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,但HFD3组诱导非酒精性脂肪肝大鼠模型优于其他两组,病变相对严重,预计维持时间也更长,更适于非酒精性脂肪肝病的机制研究和降脂药物的筛选。

电针对快速老化模型小鼠骨骼肌线粒体动力学的影响

目的观察电针对快速老化模型(SAMP8)小鼠运动功能及骨骼肌线粒体动力学的影响,从线粒体动力学角度探讨电针改善阿尔茨海默病(AD)运动功能障碍的作用机制。方法18只SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,每组9只,另9只同龄抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组。电针组选取“百会”“大椎”“肾俞”,每日电针20 min,8 d为1个疗程,间隔2 d,共3个疗程,模型组和对照组不予干预。抓力测试、悬挂实验、后肢伸展实验和Morris水迷宫实验检测小鼠运动功能,HE染色观察腓肠肌组织形态,比色法检测腓肠肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量,实时荧光定量PCR检测腓肠肌组织视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)mRNA表达,Western blot检测腓肠肌组织OPA1、MFN2和DRP1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著降低(P<0.01);腓肠肌纤维排列混乱、间隙变宽、细胞核分布不均匀,腓肠肌组织ATP含量显著降低(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著升高(P<0.01);腓肠肌纤维排列较整齐、间隙变窄、细胞核分布较均匀,腓肠肌组织ATP含量显著升高(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论电针可改善SAMP8小鼠骨骼肌形态结构和运动功能障碍,其机制可能与调节骨骼肌线粒体动力学失衡状态,提高骨骼肌ATP含量有关。

部分胆管结扎致胆汁淤积小鼠模型的构建方法学研究

目的 观察不同结扎位点和禁食方法对部分胆管结扎(partial bile duct ligation, pBDL)致胆汁淤积C57BL/6J小鼠模型的影响,研究成模率高、症状典型、稳定性好的pBDL造模方法。方法 分别采用选择性结扎左肝胆管(L-pBDL法)和左侧与正中胆管汇合处(ML-pBDL法)进行造模,观察不同pBDL结扎法对C57BL/6J小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、总胆红素、总胆汁酸和肝组织病理学的影响。同时,通过术前分别禁食12 h和禁食16 h、术后均禁食禁水4 h,观察不同禁食方法对ML-pBDL模型体症和肝损伤的影响。结果 (1)ML-pBDL组黄疸出现率52.94%、术后3周内存活率64.71%,而L-pBDL组黄疸出现率11.76%、术后3周内存活率82.35%;与假手术组比较,L-pBDL组和ML-pBDL组血清肝功能指标均显著升高(P<0.01),且ML-pBDL组ALP活性明显高于L-pBDL组(P<0.05);相对于L-pBDL组,ML-pBDL组术后3周的肝纤维化更严重(P<0.01);(2)禁食16 h组黄疸出现率93.33%、术后3周内存活率73.77%,而禁食12 h组黄疸出现率42.86%、术后3周内存活率71.42%;与假手术组比较,禁食16 h组和禁食12 h组ALP活性、谷草转氨酶/谷草转氨酶比值、总胆汁酸水平与胶原纤维面积占比均显著升高(P<0.05)。禁食16 h组各观察指标均高于禁食12 h组,但无显著性差异(P>0.05),禁食12 h和禁食16 h组均出现明显的胆管增生与肝纤维化(P<0.01),且禁食16 h组纤维化更严重(P<0.01)。结论 L-pBDL和ML-pBDL结扎法均可建立小鼠胆汁淤积模型,但L-pBDL模型症状仅表现为一过性的损伤特征,而ML-pBDL模型的肝病变典型、症状稳定,且适当延长术前禁食时间可提高ML-pBDL模型的成模率和稳定性,且病理症状更典型。

基于模型评价对慢性阻塞性肺疾病大鼠造模时间的优化

目的探索结合目前采用香烟烟熏(CS)联合气道滴注脂多糖(LPS)的方法构建慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型的报道,探讨评价COPD大鼠模型的关键指标并优化造模时间。方法采用CS联合气道滴注LPS的方法复制COPD大鼠模型,根据香烟烟熏时长将大鼠分为:空白4周组、空白8周组、空白12周组、模型4周组、模型8周组及模型12周组。观察记录大鼠一般情况及体重变化情况;采用小动物肺功能仪检测大鼠肺功能;采用酶联免疫吸附测定检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果造模结束后,空白4周组、空白8周组和空白12周组大鼠体重分别明显高于模型4周组、模型8周组、模型12周组(P<0.05)。模型4周组大鼠病理结果显示炎症细胞浸润;模型8周组大鼠病理结果显示炎症细胞浸润,部分肺泡隔断裂,肺泡融合;模型12周组大鼠病理结果显示炎症细胞浸润,大量肺泡隔断裂,肺泡融合。模型8周组大鼠FEV0.3/FVC%较空白8周组和显著降低(P<0.05);模型12周组FEV0.1/FVC%、FEV0.3/FVC%较空白12周组大鼠显著降低(P<0.05)。空白4周组和模型4周组大鼠的0.1秒用力呼气容积(FEV0.1)/用力肺活量(FVC)、0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)/FVC之间差异均无统计学意义(P>0.05)。模型4周组、8周组、12周组TNF-α和IL-6较分别较空白4周组、8周组、12周组升高(P<0.05)。结论在评价COPD大鼠模型时,肺功能是关键性指标,单一的炎症指标并非造模成功的标志。CS暴露12周联合气道滴注LPS的方法可以建立更符合临床特征的COPD大鼠模型。

大小鼠帕金森病行为学评价方法概述及常用动物模型特点分析

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是第二大中老年常见的神经退行性疾病,患病周期长、治疗过程复杂,是当今社会的一个巨大挑战。PD动物模型的行为学变化可以直观地反映出实验动物的成模情况与药物干预后的变化情况。因此选择规范的动物模型以及相适宜的行为学检测方法是进行PD机制研究、抗PD药物研发的基础。本文对国内外关于大小鼠的帕金森行为学实验方法进行归纳,对常用帕金森行为学实验的实验设备、实验方法、评价指标、注意事项进行了系统性总结,同时对目前常用的帕金森模型进行了概述,对模型的造模机制、与帕金森临床特征的吻合情况、优缺点进行了分析,以期为研究者根据研究目的选择适宜的帕金森模型与行为学检测方法。

醒神解郁汤对卒中后抑郁大鼠模型IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)影响的实验研究

目的研究醒神解郁汤对卒中后抑郁(PSD)大鼠炎症因子白介素(IL)-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平的影响,探究其治疗PSD的可能机制。方法从50只雄性SD大鼠中随机抽取8只大鼠为假手术组,其余大鼠建立PSD模型。将造模成功并符合神经学评分标准的大鼠随机分为PSD组、醒神解郁汤低剂量组、醒神解郁汤高剂量组及舍曲林组,每组8只。醒神解郁汤低、高剂量组与舍曲林组在PSD模型建立后分别给予醒神解郁汤低剂量(18.72 g·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量(37.44 g·kg^(-1)·d^(-1))与舍曲林(5.142 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,假手术组、PSD组在相同时间段以等体积质量分数为0.9%的氯化钠溶液灌胃,每天1次,连续14 d。治疗前后记录大鼠体质量、强迫游泳静止不动时间,测定糖水消耗水平,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平,采用Western blot法检测大鼠患侧海马体IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)蛋白含量。结果与假手术组比较,PSD组大鼠体质量明显减少,强迫游泳静止不动时间增长,糖水消耗量下降,血清及患侧海马体IL-33水平明显降低,IL^(-18)及IL^(-1β)水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与PSD组比较,醒神解郁汤低剂量组、高剂量组大鼠体质量明显增加,强迫游泳静止不动时间缩短,糖水消耗量上升,血清及患侧海马体IL-33水平显著升高,IL^(-18)及IL^(-1β)水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论醒神解郁汤可通过调节炎症因子IL-33、IL^(-18)、IL^(-1β)水平,改善PSD模型大鼠神经功能状态及抑郁样行为。

洗心汤对快速老化模型小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达的影响

目的观察洗心汤对快速老化模型(SAMP8)小鼠血脑屏障通透性及海马组织P-糖蛋白(P-gp)、大麻素受体1(CB1)和大麻素受体2(CB2)蛋白表达的影响,探讨洗心汤治疗阿尔茨海默病(AD)的可能机制。方法60只SAMP8小鼠随机分为模型组、益生菌组和洗心汤高、中、低剂量组,每组12只,另12只抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组,各给药组分别予相应药物灌胃10周,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,伊文思蓝法检测小鼠血脑屏障通透性,ELISA检测血清基质金属蛋白酶9(MMP9)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB含量,Western blot检测海马组织P-gp、CB1、CB2蛋白表达,免疫荧光染色检测海马组织P-gp表达。结果与对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,脑组织伊文思蓝渗出量明显增加,血清MMP9、TNF-α和NF-κB含量明显增加,海马组织P-gp、CB2蛋白表达明显降低,CB1蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,洗心汤高剂量组小鼠学习记忆能力明显提高,脑组织伊文思蓝渗出量明显减少,血清MMP9、TNF-α和NF-κB含量明显降低,P-gp、CB2蛋白表达明显升高,CB1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论洗心汤可改善AD模型小鼠学习记忆能力,其机制与调节血脑屏障通透性及相关蛋白表达,抑制神经炎症有关。

抽动障碍肝阳上亢证病证结合大鼠模型的对比研究

目的构建亚氨基二丙腈(iminodiProPion-itri,IDPN)、2,5-二甲氧-4-碘苯-2-氨基丙烷(5-dimethoxy-4-uodoPhenyl-2-aminoProPan,DOI)、阿扑吗啡(aPomorPhine,APO)3种抽动障碍(tic disorder,TD)大鼠模型对其行为特征、激惹状态及相关递质变化进行比较;选择表观效度及结构效度良好的TD模型分别加载不同应激刺激,构建、评价及筛选最优TD肝阳上亢证病证结合大鼠模型。方法120只SD大鼠随机分为6组:对照组正常饲喂,不做特殊处理;IDPN组腹腔注射IDPN溶液持续1周;DOI组、APO组分别腹腔注射DOI溶液、APO溶液持续2周;APO复合束缚悬吊应激(restraint and suspension stress,RSS)模型组(APO+RSS组)腹腔注射APO溶液2周同时复合慢性束缚悬吊应激持续3周;APO复合声电刺激应激(acoustic and electrical stimulation stress,AESS)模型组(APO+AESS组)腹腔注射APO溶液2周同时复合声电刺激应激持续3周。通过行为学实验评估大鼠刻板运动、自发活动及情绪障碍;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定纹状体中多巴胺(dopamine,DA)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、谷氨酸(glutamate,GLU)、五羟色胺(serotonin,5-HT)水平变化,血清中血管紧张素II(Angiotensin II,AngⅡ)、精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)水平变化。结果APO、DOI、IDPN诱导造模结果显示,与对照组比较,3种造模方式均可成功诱导大鼠的自发活动、刻板运动、认知及情绪障碍。IDPN组表现为更明显的刻板运动、认知障碍及焦虑抑郁倾向,与对照组相比DA、GLU水平降低(P<0.05),5-HT水平升高(P<0.05);APO组表现为更明显的自发活动及兴奋、易激惹状态、探索及攻击行为增多,与对照组相比DA、GLU水平升高(P<0.05),AngⅡ水平显著升高(P<0.01);DOI组大鼠行为学表现与APO组相似,但自发活动、刻板运动程度较APO组差;与对照组相比DOI组5-HT水平显著降低(P<0.01)。APO加载复合模型比较结果显示,APO+RSS组大鼠自发活动、刻板运动、探索行为较APO组增加;APO+AESS组表现为更明显的认知障碍。APO+RSS组大鼠纹状体DA、GLU水平、血清AngⅡ较APO组、APO+AESS组增加(P<0.05)。结论APO诱导TD模型表观效度及结构效度良好,并在一定程度上具备中医肝阳上亢证特点;APO复合束缚悬吊应激刺激模型激活RAS系统加重肝阳上亢症状并有利于维持TD模型稳定,是较为理想的TD肝阳上亢证病证结合动物模型。

Ⅱ型糖尿病模型小鼠粪便微生物多样性分析

【目的】揭示粪便微生物对Ⅱ型糖尿病的作用以及影响。【方法】以SPF级BKS-DB雄性小鼠为T2DM模型,通过测定对照组(CN组)和模型组(T2DM组)粪便微生物16SrRNA基因分析其群落结构与组成。【结果】门水平上,发现T2DM模型组小鼠粪便中蝴蝶菌门、弯曲杆菌门菌群丰度显著高于CN组。属水平中,T2DM组发现16个特有菌属,其中丰度占比最大的是库特氏菌属。在差异显著的前10个菌属中,9个菌属T2DM组菌群丰度显著高于CN组(P<0.05),仅有1个菌群丰度显著低于CN组。通过LEfSe分析,发现厌氧菌属、棒状杆菌属在T2DM模型组出现富集,而这两种菌属都存在于免疫力低下的人群中,与糖尿病呈正相关存在。【结论】在T2DM模型小鼠的粪便中,蝴蝶菌门、拟杆菌属等菌群出现高表达现象,同时,厌氧菌属、棒状杆菌属也出现了失衡,这可能导致了机体免疫力降低,正向影响糖尿病的发生。

急性乙二醇中毒大鼠模型的构建及对多脏器损伤的比较

目的采用灌胃法构建SD大鼠急性乙二醇(EG)中毒模型并对比分析脑、心以及肾脏损伤情况,为相关动物实验以及临床早期识别与干预提供更多参考。方法采用随机数字表法将30只SPF级SD雄性大鼠分成3组,空白对照组(NC组)10只,按12 mL·kg^(-1)灌胃生理盐水;低剂量乙二醇灌胃组(EG-L组)与高剂量乙二醇灌胃组(EG-H组)各10只,分别按12 mL·kg^(-1)剂量灌胃60%、80%乙二醇溶液。观察48 h内各组大鼠存活和死亡情况;并于造模后48 h行腹主动脉取血、处死,收集脑、心、肾等相关器官,HE染色观察脑、心、肾组织的病理变化,Pizzolato染色观察脑、肾组织中草酸钙结晶;通过平衡能力评分判断行为学改变情况;应用穿戴式心电传感器及尿量监测观察心率及尿量改变;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中S100钙结合蛋白β(S100-β)、肌钙蛋白I(cTnI)、肾损伤分子-1(KIM-1)水平;可见光分光光度法检测各组大鼠血液中草酸水平。结果NC组、EG-L与EG-H组48 h累积生存率分别为100%、90%、70%。与NC组相比,EG灌胃两组大鼠脑、肾脏组织病理学改变明显,大鼠脑血管以及肾小管中可观察到明显草酸钙结晶沉积(P值均<0.05),且EG-H组大鼠脑血管以及肾小管中沉积量更加明显(P<0.05)。EG灌胃两组平衡能力相较NC组下降(P<0.05),其中EG-H组下降更明显(P<0.05)。与NC组相比,EG-L、EG-H组大鼠心率分别在灌胃后的第12 h、18 h、24 h、30 h加快(P值均<0.05),在30~36 h、36~42 h、42~48 h尿量均减少(P值均<0.05),而EG-H组大鼠在36~42 h、42~48 h尿量减少更显著(P<0.05)。与NC组相比,EG-L、EG-H组大鼠血清S100-β、KIM-1水平均升高(P值均<0.05),与EG-L组相比,EG-H组S100-β、KIM-1水平更高(P值均<0.05)。EG中毒的两组大鼠体内草酸含量相对于NC组均增多(P值均<0.05),且EG-H组大鼠体内草酸含量更高(P<0.05)。结论按12 mL·kg^(-1)剂量灌胃80%浓度乙二醇溶液可更好地构建EG中毒大鼠模型,EG中毒会导致大鼠多脏器损伤,中毒后的表现呈时间阶段性发生与发展。

遗传多样性高血压小鼠模型的建立与基因转录调控分析

目的探讨13个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾病理变化以及相关致病通路。方法将13个品系的遗传多样性小鼠分别与Cckbr-/-小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的Cckbr+/+、Cckbr+/-、Cckbr-/-3种基因型的小鼠。利用BP-2000无创血压分析系统测量小鼠血压,利用Western Blot检测小鼠肾CCKBR蛋白表达变化,利用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化(IHC)检测小鼠肾组织病理学变化,利用转录组测序(RNA-Seq)分析筛选原发性高血压致病相关通路。结果3个特定小鼠品系(A/J、LOT、FIM)中,收缩压(systolic blood pressure,SBP)Cckbr-/-组较Cckbr+/+组具有显著性差异(P<0.05)。HE染色及IHC发现高血压对小鼠造成了一定程度的肾损伤。通过GO与Pathway富集分析,发现差异表达基因富集在新陈代谢与昼夜节律调节等方面。结论遗传多样性高血压小鼠在血压表型、病理特征及基因表达等方面呈现显著性差异,有效模拟了人群的遗传异质性对疾病表型的影响。