SUA41蛋白表达和纯化及其多克隆抗体制备

旨在制备特异性SUA41多克隆抗体,为深入研究其在植物生长发育中的功能提供有力的分子生物学和生物化学的工具。PCR扩增拟南芥SUA41基因中编码280个氨基酸(401-680位氨基酸)的特异片段,经过GATEWAY的DNA重组技术构建了原核表达载体pDEST17-SUA41,用热休克法转化到E.coliBL21(DE3)star感受态细胞,以异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出6×His-SUA41融合蛋白,用8 mol/L尿素缓冲液溶解包涵体并且经过水逐级去除尿素获得提纯的融合蛋白,并利用Western blotting鉴定确认。融合蛋白经Ni金属螯合柱亲和层析得以纯化,用SDS-PAGE进一步纯化。纯化的融合蛋白经过SDS-PAGE后切胶回收,免疫小白兔,制备多抗血清,然后用Western blotting进行检测,鉴定血清特异性和效价。结果显示,融合蛋白6×His-SUA41免疫兔,产生特异性的SUA41兔抗血清,可以检测到细菌和拟南芥组织中SUA41蛋白。用水提纯变性剂尿素溶解的包涵体蛋白具有可行性。制备的特异性SUA41兔抗血清效价高,能够有效地识别大肠杆菌表达的和拟南芥的SUA41蛋白。在有合适的对照情况下,该兔抗血清可以用于分析植物中SUA41蛋白的功能。

环境条件对sua41突变体表型的影响

突变体表型分析是基因功能研究的重要组成部分,通过对突变体的分析可以预见突变序列的未知功能。本文研究了sua41突变体的表型特征和可塑性变化。结果表明,与Col-0相对照,sua41的莲座叶和茎生叶片较小,植株的茎细小,花序轴顶端的花蕾较少,在果枝上有聚合果现象;sua41突变体的早花表型与光照强度和光质无关;不同光照条件下sua41根长与野生型相比有差异;不同光质条件下sua41下胚轴长度比野生型的稍长;低温条件下sua41突变体根长比野生型的短,下胚轴长度比野生型的稍微长些。说明,SUA41基因除了调节开花时间之外,还调节茎、叶、上胚轴和根的生长以及花芽的形成。SUA41基因是一个多功能的基因。