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Effects of Nephrolithiasis on Serum DNase(Deoxyribonuclease Ⅰ and Ⅱ) Activity and E3 SUMO-Protein Ligase NSE2(NSMCE2) in Malaysian Individuals 被引量:1
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作者 Faridah Yusof Atheer Awad Mehde +3 位作者 Wesen Adel Mehdi Raha Ahmed Raus Hamid Ghazali Azlina Abd Rahman 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2015年第9期660-665,共6页
Objective Nephrolithiasis is one of the most common disorders of the urinary tract. The aim of this study was to examine a possible relationship between DNase Ⅰ/Ⅱ activity and E3 SUMO-protein ligase NSE2 in the sera... Objective Nephrolithiasis is one of the most common disorders of the urinary tract. The aim of this study was to examine a possible relationship between DNase Ⅰ/Ⅱ activity and E3 SUMO-protein ligase NSE2 in the sera of nephrolithiasis patients to evaluate the possibility of a new biomarker for evaluating kidney damage. Methods Sixty nephrolithiasis patients and 50 control patients were enrolled in a case-control study. Their blood urea, creatinine, protein levels and DNase Ⅰ/Ⅱ activity levels were measured by spectrometry. Serum NSMCE2 levels were measured by ELISA. Blood was collected from patients of the government health clinics in Kuantan-Pahang and fulfilled the inclusion criteria. Results The result indicated that mean levels of sera NSMCE2 have a significantly increase(P〈0.01) in patients compared to control group. Compared with control subjects, activities and specific activities of serum DNase Ⅰ and Ⅱ were significantly elevated in nephrolithiasis patients(P〈0.01). Conclusion This study suggests that an increase in serum concentrations of DNase Ⅰ/Ⅱ and E3 SUMO-protein ligase NSE2 level can be used as indicators for the diagnosis of kidney injury in patients with nephrolithiasis. 展开更多
关键词 Nephrolithiasis DNase DNase E3 sumo-protein ligase NSE2 NSMCE2
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Study the effect of kidney stones on serum xanthine oxidase, ecto-5'-nucleotidase activity and E3 SUMO-protein ligase NSE2(NSMCE2) in Malaysian individuals
2
作者 Faridah Yusof Atheer Awad Mehde +2 位作者 Wesen Adel Mehdi Hamid Ghazali Azlina Abd Rahman 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2015年第8期665-668,共4页
Objective: To verify possible relations between 5'-nucleotidase, xanthine oxidase to E3 small ubiquitin-like modifier-protein ligase non structural maintenance of chromosomes elements 2 in sera patients with kidne... Objective: To verify possible relations between 5'-nucleotidase, xanthine oxidase to E3 small ubiquitin-like modifier-protein ligase non structural maintenance of chromosomes elements 2 in sera patients with kidney stones and to evaluate the possibility of a new biomarker for the evaluation of kidney damage. Methods: A sixty patients with known kidney stones who appeared the government health clinics in Kuantan–Pahang and fifty apparently healthy were taken as control group. The 5'-nucleotidase,xanthine oxidase and other biochemical parameters were measured by colorimetric tests. The serum NSMCE2 were measured by enzyme linked immunosorbent assay.Results: The mean serum xanthine oxidase [(39.98±19.70) IU/L] and ecto-5'-nucleotidase activity(40.03±9.53 IU/L) were significantly higher than the controls' levels of(18.04 ±6.26) and(16.06 ±4.61) IU/L respectively. There were 85.00% and 83.33%, of patients with kidney stones who had abnormal ecto-5'-nucleotidase activity and uric acid respectively while xanthine oxidase activity was less sensitive 58.33%.Conclusions: The present study suggests that the increase in serum of xanthine oxidase,ecto-5'-nucleotidase activities E3 small ubiquitin-like modifier-protein ligase NSE2 concentration can be used as biomarkers for diagnosis of kidney damage in patients with kidney stone,also in developments of change DNA damage and inflammation disorders in these patients. 展开更多
关键词 Kidney stones XANTHINE OXIDASE Ecto-5’-nucleotidase E3 sumo-protein LIGASE NSE2
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Serum E3 SUMO-protein ligase NSE2 level and peroxynitrite related to oxidative stress in nephrolithiasis patients
3
作者 Atheer Awad Mehde Faridah Yusof +6 位作者 Wesen Adel Mehdi Raha Ahmed Raus Layla Othman Farhan Jwan Abdulmohsin Zainulabdeen Zaima Azira Zainal Abidin Hamid Ghazali Azlina Abd Rahman 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2017年第3期249-252,共4页
Objective: To prove probable relations between serum E3 SUMO-protein ligase NSE2(NSMCE2) concentration, peroxynitrite related to oxidative stress in nephrolithiasis patients.Methods: A total of 60 patients with nephro... Objective: To prove probable relations between serum E3 SUMO-protein ligase NSE2(NSMCE2) concentration, peroxynitrite related to oxidative stress in nephrolithiasis patients.Methods: A total of 60 patients with nephrolithiasis and 50 healthy volunteers were involved in this study. Colorimetric method was used to detect blood urea, creatinine, uric acid, protein, albumin, total antioxidant status, total oxidant status, peroxynitrite, nitric oxide and oxidative stress index. Glutathione, NSMCE2 and superoxide dismutase were measured by ELISA.Results: A significant increase in level of peroxynitrite, total oxidant status, NSMCE2 and oxidative stress index in patients was observed, while total antioxidant status and glutathione were significantly decreased.Conclusions: The study concluded that serum NSMCE2 significantly correlated with peroxynitrite and oxidative stress in patients with nephrolithiasis. 展开更多
关键词 NEPHROLITHIASIS PEROXYNITRITE Nitric oxide E3 sumo-protein ligase NSE2 Total oxidant status
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重组链球菌蛋白G的SUMO融合表达策略和活性表征
4
作者 郑雪松 陈莹 +3 位作者 胡学钻 孙建伟 闫彩霞 张小飞 《生物化工》 CAS 2023年第6期113-116,共4页
目的:链球菌蛋白G(Streptococcus Protein G,SPG)是一种能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质,广泛用于重组蛋白和抗体的纯化,目前市场产品主要为His-SPG,本研究拟采用类泛素蛋白修饰分子(Small Ubiquitin-Like Modifier,SUMO)融合表... 目的:链球菌蛋白G(Streptococcus Protein G,SPG)是一种能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质,广泛用于重组蛋白和抗体的纯化,目前市场产品主要为His-SPG,本研究拟采用类泛素蛋白修饰分子(Small Ubiquitin-Like Modifier,SUMO)融合表达SPG,以提高SPG产量,降低纯化柱料的生产成本。方法:将SPG基因分别连接至pET28a和pSmartⅠ质粒,经大肠杆菌重组表达两种蛋白,并比较产量、纯度和活性的差异。结果:His-SUMO-SPG产量为12.5 mg/L,较His-SPG(8.4 mg/L)提高约49%;包被两种SPG于96微孔板作为固定相,检测其捕获兔多抗和鼠单抗能力,His-SUMO-SPG的检测信号(OD_(450))较His-SPG更高,具有更高载量;生物素化His-SPG对小鼠的IgG1、IgG2a、Ig2b以及兔IgG最低检测浓度分别为0.703 pmol/L、0.098 pmol/L、0.524 pmol/L和0.927 pmol/L,生物素化His-SUMO-SPG最低检测浓度分别为0.887 pmol/L、0.084 pmol/L、0.667pmol/L和0.865 pmol/L,两种SPG最低检出限接近。结论:His-SUMO-SPG和His-SPG在检测性能方面比较接近,His-SUMO-SPG结合IgG载量略高于His-SPG,且His-SUMO-SPG产量更高,SUMO融合表达蛋白G方法为工业大规模生产提供了一种有效策略。 展开更多
关键词 链球菌蛋白G sumo融合表达 大肠杆菌 活性表征
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蛋白质SUMO化修饰研究进展 被引量:13
5
作者 韦玮 张浩 +1 位作者 毛建平 叶棋浓 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期122-126,共5页
SUMO(small ubiquitin-related modifier)是类泛素蛋白家族的重要成员之一,可与多种蛋白结合发挥相应的功能,其分子结构及SUMO化反应途径都与泛素类似,但二者功能完全不同。SUMO化修饰可参与转录调节、核转运、维持基因组完整性及信号... SUMO(small ubiquitin-related modifier)是类泛素蛋白家族的重要成员之一,可与多种蛋白结合发挥相应的功能,其分子结构及SUMO化反应途径都与泛素类似,但二者功能完全不同。SUMO化修饰可参与转录调节、核转运、维持基因组完整性及信号转导等多种细胞内活动,是一种重要的多功能的蛋白质翻译后修饰方式。SUMO化修饰功能的失调可能导致某些疾病的发生。 展开更多
关键词 sumo sumo 蛋白修饰 UBC9 PIAS
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人SUMO-1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定 被引量:5
6
作者 宋振 王劼 +3 位作者 安宁 杨振 雷鸣 郭泽坤 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期125-129,共5页
目的构建人SUMO-1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人SUMO-1抗血清。方法从质粒pcDNA-HA-SUMO1-GG中用PCR方法克隆到编码人SUMO-1N端97个氨基酸的基因片段,构建了SUMO-1原核表达载体pET41a(+)-SUMO1,转化大肠杆菌BL21(DE3)... 目的构建人SUMO-1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人SUMO-1抗血清。方法从质粒pcDNA-HA-SUMO1-GG中用PCR方法克隆到编码人SUMO-1N端97个氨基酸的基因片段,构建了SUMO-1原核表达载体pET41a(+)-SUMO1,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导蛋白表达并利用GST亲和层析柱进行纯化,以纯化后的融合蛋白GST-SUMO1为抗原免疫家兔,获得抗血清。Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建原核表达载体,纯化到融合蛋白GST-SUMO1,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了人SUMO-1多克隆抗体,为进一步研究人SUMO-1蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 sumo-1 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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SUMO蛋白酶1与肿瘤 被引量:6
7
作者 程金科 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第7期771-774,共4页
由SUMO(small ubiquitin-related modifier protein)介导的蛋白质翻译后修饰是对其所修饰的蛋白质功能与定位的一个关键性调节机制。SUMO修饰是一个动态的过程,由SUMO特异的E1、E2和E3酶来催化,而可逆反应则是由SUMO特异的蛋白酶家族SE... 由SUMO(small ubiquitin-related modifier protein)介导的蛋白质翻译后修饰是对其所修饰的蛋白质功能与定位的一个关键性调节机制。SUMO修饰是一个动态的过程,由SUMO特异的E1、E2和E3酶来催化,而可逆反应则是由SUMO特异的蛋白酶家族SENPs来完成。至今已鉴定了六个人SENPs家族成员,每一个成员有不同的细胞中定位和底物特异性,但这些SENPs在其参与的细胞生物学过程中的确切作用并未十分明确。本文就SENP1和其已鉴定的靶蛋白的一些最新进展,以及它们在肿瘤形成中的潜在作用作一简单地介绍。 展开更多
关键词 sumo SENP1 蛋白质修饰 肿瘤
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人SUMO-2基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备 被引量:1
8
作者 杨振 宋振 +4 位作者 安宁 王劼 郭霭光 雷鸣 郭泽坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期710-713,共4页
目的:构建人SUMO-2基因的原核表达载体,纯化融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2并以其为抗原免疫家兔,制备人SUMO-2多克隆抗体。方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因并克隆至pET41a(+)原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUM... 目的:构建人SUMO-2基因的原核表达载体,纯化融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2并以其为抗原免疫家兔,制备人SUMO-2多克隆抗体。方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因并克隆至pET41a(+)原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性。结果:测序证实重组质粒pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2构建成功;SDS-PAGE结果证实获得Mr为52000的GST-SUMO2-SUMO2融合蛋白且为可溶性蛋白;经过GST亲和层析有效纯化;以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性。结论:获得了人SUMO-2蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究人SUMO-2及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。 展开更多
关键词 sumo-2 原核表达 蛋白纯化 抗血清
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人SUMO-3基因原核表达及多克隆抗体制备 被引量:1
9
作者 安宁 杨振 +2 位作者 宋振 雷鸣 郭泽坤 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期87-92,共6页
构建人SUMO-3基因的原核表达载体pET41a(+)-SUMO-3,表达重组GST-SUMO-3融合蛋白,制备人SUMO-3多克隆抗体。试验结果显示,通过PCR方法从重组质粒pEYFP-SUMO-3中克隆到的SUMO-3N端93个氨基酸的基因序列与NCBI上提供的序列一致,重组质粒pET... 构建人SUMO-3基因的原核表达载体pET41a(+)-SUMO-3,表达重组GST-SUMO-3融合蛋白,制备人SUMO-3多克隆抗体。试验结果显示,通过PCR方法从重组质粒pEYFP-SUMO-3中克隆到的SUMO-3N端93个氨基酸的基因序列与NCBI上提供的序列一致,重组质粒pET41a(+)-SUMO-3构建成功;重组pET41a(+)-SUMO-3在E.coli.BL21(DE3)pLysS中表达GST-SUMO-3融合蛋白,分子量为44.0 kDa,与预期分子量一致;采用亲和层析纯化融合蛋白GST-SUMO-3并免疫家兔,获得人SUMO-3抗体;Westernblot检测显示该抗体可以特异性识别SUMO-3,ELISA检测结果成阳性,抗体效价约为1∶20000。实验结果为进一步研究人SUMO-3及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具。 展开更多
关键词 sumo-3 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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SUMO化在肿瘤发生中的作用及机制 被引量:3
10
作者 韩志坚 冯彦虎 +3 位作者 李阳冰 王芙蓉 陈昊 李玉民 《兰州大学学报(医学版)》 CAS 2017年第3期69-77,共9页
蛋白质翻译后修饰是细胞蛋白质发挥生物学功能的重要调节机制之一,常见的修饰类型有磷酸化、甲基化、泛素化、乙酰化及SUMO化。SUMO化是指SUMO蛋白分子通过成熟、激活、结合和靶蛋白共价连接,并使靶蛋白具有特殊功能的过程,是一种重要... 蛋白质翻译后修饰是细胞蛋白质发挥生物学功能的重要调节机制之一,常见的修饰类型有磷酸化、甲基化、泛素化、乙酰化及SUMO化。SUMO化是指SUMO蛋白分子通过成熟、激活、结合和靶蛋白共价连接,并使靶蛋白具有特殊功能的过程,是一种重要的翻译后修饰,参与调节几乎所有的细胞功能与病理过程。SUMO化修饰通过调节肿瘤细胞增殖、迁移、衰老,以及炎症及血管生成信号影响肿瘤发生、发展及转归。异常的SUMO化修饰能够导致人类包括癌症在内的许多疾病的发生,因此SUMO化修饰的研究对癌症的预防和治疗都具有重要的意义。 展开更多
关键词 类泛素化蛋白 癌症 翻译后修饰 sumo蛋白酶
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去SUMO化蛋白酶的生物学功能与作用基础研究 被引量:7
11
作者 程金科 左勇 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1117-1121,共5页
小泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰是一种新发现的类泛素蛋白质修饰形式。SUMO修饰由活化酶E1、接合酶E2和连接酶E3等三个酶相继作用来完成。同时它又是一个动态的、可逆的过程,其去SUMO修饰的过程则是由SUMO特异性蛋白酶(SENP)家族来介导。... 小泛素样修饰蛋白(SUMO)修饰是一种新发现的类泛素蛋白质修饰形式。SUMO修饰由活化酶E1、接合酶E2和连接酶E3等三个酶相继作用来完成。同时它又是一个动态的、可逆的过程,其去SUMO修饰的过程则是由SUMO特异性蛋白酶(SENP)家族来介导。在蛋白质SUMO修饰的动态过程中,SENP介导的去SUMO过程是决定其靶蛋白质SUMO修饰水平的一个主要因素,同时也是SUMOylation被调节的一个主要环节。SENP家族包括SENP1、SENP2、SENP3、SENP5、SENP6、SENP7等成员,每个成员具有不同的细胞内定位和底物特异性。虽然对其生化特性进行了大量研究,但SENP在参与的细胞生命活动过程中的作用并未十分了解。我们通过分析SENP1和SENP2基因敲除小鼠的表型,发现了SENP1通过正反馈机制调控缺氧-HIF1α和雄激素受体所介导的信号通路,从而在HIF1α与AR所参与的生理病理过程中发挥了重要作用。同时,我们发现SENP2通过调控PcG的活性,参与心脏的发育过程。这些结果表明SENP在调控其靶蛋白所参与的信号通路中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 小泛素样修饰蛋白 蛋白质修饰 sumo特异性蛋白酶
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类泛素家族SUMO-1和UBC9的克隆、融合表达及纯化 被引量:2
12
作者 韦玮 丁丽华 +6 位作者 张浩 杨智洪 崔家骏 周岩 李勤操 毛建平 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期509-511,共3页
目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和p... 目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和pGST-UBC9,分别转化大肠杆菌DH5α,表达融合蛋白GST-SUMO-1和GST-UBC9;用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了SUMO-1和UBC9的融合表达载体;Western印迹检测表明,GST-SUMO-1和GST-UBC9融合蛋白获得表达;纯化得到了融合蛋白。结论:克隆、表达并纯化了SUMO-1和UBC9与GST的融合蛋白。 展开更多
关键词 sumo-1 UBC9 克隆 表达 融合蛋白
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MRTF-A的SUMO化对人脐静脉内皮细胞迁移能力的影响
13
作者 谷岩 张蕊 +1 位作者 何菊 刘辉 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第23期38-44,共7页
目的探讨MRTF-A的SUMO化抑制CCN1的表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移能力的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测CCN1的表达。通过免疫共沉淀(co-IP)和染色质免疫沉淀(ChIP)分析MRTF-A与小泛素相... 目的探讨MRTF-A的SUMO化抑制CCN1的表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移能力的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测CCN1的表达。通过免疫共沉淀(co-IP)和染色质免疫沉淀(ChIP)分析MRTF-A与小泛素相关修饰物(SUMO)的相互作用。采用细胞划痕实验和Transwell法检测细胞迁移能力。结果CCN1的转录活性受活化的PIAS1、UBC9或SUMO1抑制。SUMOylation位点的突变抑制MRTF-A对CCN1的转录活性。细胞迁移实验表明,MRTF-A的SUMO化抑制HUVECs的迁移(P<0.05)。结论MRTF-A的SUMO化通过靶向CCN1抑制HUVECs的迁移。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 富半胱氨酸61 小泛素相关修饰物
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高表达SUMO蛋白对人肝星状细胞LX-2纤维化的影响
14
作者 潘裕华 许晨舒 +2 位作者 李樱媚 曹聪 陈孝 《今日药学》 CAS 2014年第3期164-167,共4页
目的研究在体外培养的人肝星状细胞LX-2中高表达SUMO蛋白对LX-2纤维化指标的影响。方法采用脂质体瞬时转染法分别将SUMO-1/2/3的高表达质粒转染入LX-2细胞中,分别运用RT-PCR和Western Blot检测α-SMA、CollagenⅠ、MMP-2、TIMP-1的mRNA... 目的研究在体外培养的人肝星状细胞LX-2中高表达SUMO蛋白对LX-2纤维化指标的影响。方法采用脂质体瞬时转染法分别将SUMO-1/2/3的高表达质粒转染入LX-2细胞中,分别运用RT-PCR和Western Blot检测α-SMA、CollagenⅠ、MMP-2、TIMP-1的mRNA和蛋白表达量。结果转染质粒48 h后α-SMA、CollagenⅠ的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),MMP-2、TIMP-1的mRNA表达量亦显著降低(P<0.01),但MMP-2和TIMP-1的蛋白表达水平无明显影响。结论高表达SUMO蛋白能抑制人肝星状细胞LX-2的纤维化过程。 展开更多
关键词 sumo 肝星状细胞 肝纤维化
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SUMO表达系统高效、可溶性表达重组鼠源IL-1β 被引量:1
15
作者 郝建权 任桂萍 +5 位作者 刘生伟 傅俊华 谷学佳 姚文兵 李宁 李德山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期684-688,共5页
目的:从LPS刺激过的小鼠胸腺细胞中克隆IL-1β基因,通过原核表达,获得具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础。方法:提取LPS刺激的小鼠胸腺细胞总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-... 目的:从LPS刺激过的小鼠胸腺细胞中克隆IL-1β基因,通过原核表达,获得具有生物活性的可溶性鼠源IL-1β蛋白,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础。方法:提取LPS刺激的小鼠胸腺细胞总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-1β序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-1β的编码序列基因,并插入到原核表达载体pHisSUMO ex-press中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pHisSUMO express-mIL-1β。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达mIL-1β/SUMO融合蛋白,Ni-NTA Agarose纯化后,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用SUMO protease-1切去SUMO标签,经纯化并切去融合标签后获得成熟mIL-1β蛋白。用MTT方法检测目的蛋白对L929细胞的生物学活性。结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致,SDS-PAGE分析表明融合蛋白的相对分子质量为37kD,切割后的成熟蛋白为17kD,与理论值相符。且蛋白表达量高,主要以可溶形式存在。Western blot证实该蛋白为mIL-1β。成熟蛋白纯化产物纯度超过95%以上,通过MTT的方法检测证明其具有使L929细胞增殖的作用,从而说明其具有生物学活性。结论:利用大肠杆菌表达系统可高效可溶性表达高纯度的具有生物活性的mIL-1β蛋白。 展开更多
关键词 mIL-1β sumo 融合蛋白 原核表达 MTT 活性检测
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SUMO在蛋白表达中的应用 被引量:6
16
作者 汪小杰 毛若雨 +3 位作者 张勇 滕达 王秀敏 王建华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期28-33,共6页
毒性蛋白表达具有很大的技术挑战性,其不仅对宿主菌有毒性,而且易于被宿主内源性蛋白酶降解。融合表达是实现毒性蛋白表达的有效策略。目前常用的融合标签有硫氧还蛋白、绿色荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、类固醇异构酶、N利用基质A及谷胱... 毒性蛋白表达具有很大的技术挑战性,其不仅对宿主菌有毒性,而且易于被宿主内源性蛋白酶降解。融合表达是实现毒性蛋白表达的有效策略。目前常用的融合标签有硫氧还蛋白、绿色荧光蛋白、麦芽糖结合蛋白、类固醇异构酶、N利用基质A及谷胱甘肽-S-转移酶等。而SUMO标签除具有传统融合标签的特性外,还具有分子小、促进折叠以及能被SUMO蛋白酶1专一性识别等优势,因此广受关注。综述SUMO标签、SUMO蛋白酶切割特性及其表达系统在异源蛋白融合表达中的应用。 展开更多
关键词 sumo 融合表达 sumo蛋白酶1 毒性蛋白
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抗人SUMO1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
17
作者 王林 谭锋维 +3 位作者 陈实平 陆丽芳 龚燕华 彭小忠 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第6期623-626,共4页
目的表达重组人SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)蛋白并制备单克隆抗体。方法构建含人SUMO1基因的重组表达质粒pET32a-HIS-SUMO1,在大肠杆菌中表达重组蛋白HIS-SUMO1;以纯化后的HIS-SUMO1蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交... 目的表达重组人SUMO1(small ubiquitin-related modifier 1)蛋白并制备单克隆抗体。方法构建含人SUMO1基因的重组表达质粒pET32a-HIS-SUMO1,在大肠杆菌中表达重组蛋白HIS-SUMO1;以纯化后的HIS-SUMO1蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,通过ELISA和Western blot方法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定抗体Ig的类型及亚类;取一株筛选细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore抗体纯化试剂盒进行抗体纯化,Western blot方法检测抗体效价。结果表达纯化了重组人HIS-SUMO1蛋白;3株稳定分泌特异性抗人SUMO1的单克隆抗体杂交瘤细胞株被筛选出,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得效价较高的鼠抗人SUMO1单克隆抗体。结论通过表达纯化人SUMO1重组蛋白,制备出高效价鼠抗人SUMO1的单克隆抗体,该抗体可用于蛋白质SUMO化的研究。 展开更多
关键词 sumo 蛋白表达纯化 单克隆抗体
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SUMO特异性蛋白酶1在动脉粥样硬化发病机制中的作用 被引量:4
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作者 黄弦 吴际 程金科 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1056-1061,共6页
目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小... 目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小鼠在饲喂高胆固醇高脂食物后动脉粥样硬化病理改变。采用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)诱导巨噬细胞RAW264.7泡沫化,油红O染色检测RAW264.7 si-ns及RAW264.7 si-SENP1的泡沫细胞形成能力。采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测RAW264.7 si-ns和RAW264.7 si-SENP1中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)mRNA和蛋白的相对表达量。结果饲喂高胆固醇高脂食物后,油红O染色显示,SENP1+/-X Apoe-/-小鼠的斑块相对面积(斑块面积/血管总面积)和主动脉弓斑块面积均大于SENP1+/+X Apoe-/-小鼠,分别为(6.716±1.442)%和(5.952±2.332)%以及(364 249±45 838)和(273 486±158 814)μm2;免疫组织化学染色显示,主动脉根部巨噬细胞面积/斑块面积分别为(41.00±0.05)%和(40.47±0.07)%,差异无统计学意义(P=0.954)。Real-Time PCR和Western blotting检测以及油红O染色结果显示,RAW264.7 si-SENP1的FABP4表达水平及泡沫细胞形成能力均较RAW264.7 si-ns高。结论 SENP1通过下调FABP4的表达,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成,从而抑制动脉粥样硬化的发生。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 泡沫细胞 sumo特异性蛋白酶1 脂肪酸结合蛋白4
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蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建
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作者 唐波 杜娟 +4 位作者 杨力侠 王小海 吴海波 吴勇延 郭泽坤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第10期199-206,共8页
【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、... 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。 展开更多
关键词 sumo 蛋白质体外修饰 原核表达 OCT4 SOX2
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SUMO融合表达对淀粉酶N-Amy活性的影响
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作者 王美星 向腊 +2 位作者 胡慧贞 巫攀 张桂敏 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 2019年第3期217-222,共6页
前期解析了一个来自嗜碱菌Bacillus pseudofirmus 703的新型的碱性淀粉酶Amy703,该酶含有一个未知功能的N端结构域,将该结构域缺失后得到的突变体N-Amy相对野生型Amy703比酶活提高了35倍;底物结合实验显示Amy703可以结合不可溶性底物,... 前期解析了一个来自嗜碱菌Bacillus pseudofirmus 703的新型的碱性淀粉酶Amy703,该酶含有一个未知功能的N端结构域,将该结构域缺失后得到的突变体N-Amy相对野生型Amy703比酶活提高了35倍;底物结合实验显示Amy703可以结合不可溶性底物,单独的N端结构域和N端结构域缺失突变体N-Amy都不能结合,推测N端结构域会造成催化结构域的结构变化从而引起比酶活的大幅提高.为了进一步探究Amy703特异的N端结构域造成酶活显著下降的原因,将Amy703的N端结构域替换为SUMO蛋白,实验结果显示裂解液上清的SUMO/N-Amy条带比Amy703粗亮,验证了SUMO蛋白的促可溶性作用;但纯化后的融合蛋白SUMO/N-Amy的比酶活显著低于N-Amy,仅和野生型Amy703的比酶活相当,表明SUMO与N-Amy的融合显著降低了酶活,同时也预示着N端多一段结构域会影响到催化结构域的结构变化.此外,对SUMO/N-Amy融合蛋白是否与底物结合进行了探讨,为进一步解析Amy703的N端结构域功能提供了实验依据. 展开更多
关键词 碱性淀粉酶 N端结构域 sumo蛋白 底物结合能力 比酶活
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