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类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
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作者 杨南扬 缪璇 +3 位作者 伍贤军 刘金美 辻一郎 李晓萌 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1010-1014,共5页
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白... 目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。 展开更多
关键词 类泛素化蛋白3 GST融合蛋白 蛋白纯化
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人SUMO3基因突变体(SUMO3-K11R)真核表达质粒的构建及其鉴定
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作者 伍权 李文庭 《生物技术世界》 2012年第2期4-6,14,共4页
构建人SUMO3基因K11R突变体的真核表达质粒并对其进行功能鉴定。方法:PCR扩增人SUMO3基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1内,构建含人SUMO基因K11R突变体的真核表达质粒pEGFP-SUMO3-K11R。使用真核转染,Western blot和免疫荧光实验的方... 构建人SUMO3基因K11R突变体的真核表达质粒并对其进行功能鉴定。方法:PCR扩增人SUMO3基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1内,构建含人SUMO基因K11R突变体的真核表达质粒pEGFP-SUMO3-K11R。使用真核转染,Western blot和免疫荧光实验的方法,鉴定SUMO-K11R在真核细胞中的表达和功能。结果:克隆的人SUMO-K11R基因,测序结果显示完全正确。瞬时转染真核细胞后,Western blot在预期的位置检测出目的条带,免疫荧光实验显示SUMO3-K11R突变体蛋白其功能与SUMO1蛋白相似,可作为研究SUMO1蛋白和SUMO3蛋白功能差异的有力工具。结论:成功构建了含人SUMO-K11R基因的真核表达质粒。 展开更多
关键词 sumo3-K11R基因 质粒 真核表达 免疫荧光
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利用猪源SUMO3标签蛋白可溶性表达猪腺病毒3型的Hexon基因高变区蛋白 被引量:1
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作者 李志要 孙阳阳 +1 位作者 鲍恩东 吕英军 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第3期107-111,共5页
利用猪源小泛素化相关修饰蛋白可溶性表达猪腺病毒3型(PADV-3)的主要衣壳蛋白六邻体蛋白(Hexon)基因的高变区蛋白,为检测试剂盒和亚单位疫苗的开发奠定基础。本试验扩增出猪腺病毒3型的Hexon基因中的超变区(HVR1~HVR6)片段,并在其N端添... 利用猪源小泛素化相关修饰蛋白可溶性表达猪腺病毒3型(PADV-3)的主要衣壳蛋白六邻体蛋白(Hexon)基因的高变区蛋白,为检测试剂盒和亚单位疫苗的开发奠定基础。本试验扩增出猪腺病毒3型的Hexon基因中的超变区(HVR1~HVR6)片段,并在其N端添加猪源的SUMO3的蛋白基因,连接到pET28a质粒,构建出pET28a-Hexon-HVR1-6、pET28a-pigSUMO3-Hexon-HVR1-6重组质粒,经过PCR以及双酶切验证并测序确认无碱基突变后,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导进行表达,经超声波破碎后进行SDS-PAGE验证标签蛋白的促溶情况,将表达量最高的融合蛋白进行大量表达并纯化,Western blot鉴定分析。结果显示:在1100 bp左右可见扩增出来目的基因片段;SDSPAGE表明在32 kDa、37 kDa处可以看到目的蛋白,细菌破碎后发现SUMO3标签蛋白显著提高Hexon-HVR1-6蛋白可溶性;免疫印迹结果显示融合蛋白可以被His6标签的特异性抗体和PADV-3的阳性血清特异性识别。以上结果表明成功表达出了PADV-3的主要结构蛋白Hexon-HVR1-6,加入猪源的SUMO3标签后能显著提高重组蛋白的可溶性,且反应性和特异性良好。 展开更多
关键词 猪腺病毒3型 六邻体蛋白高变区 sumo3 可溶性表达
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卵巢癌中SUMO1P3表达及对细胞生物学行为的影响 被引量:2
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作者 姜广利 马静静 +2 位作者 何胜悦 晁利娜 梁艳 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1094-1098,共5页
目的探讨长链非编码SUMO1P3在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测上皮卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3和CAOV3和正常卵巢上皮细胞系IOSE80中SUMO1P3表达;si-SUMO1P3转染CAOV3细胞以沉默SUMO1P... 目的探讨长链非编码SUMO1P3在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测上皮卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3和CAOV3和正常卵巢上皮细胞系IOSE80中SUMO1P3表达;si-SUMO1P3转染CAOV3细胞以沉默SUMO1P3表达(si-SUMO1P3组),另转染阴性对照质粒为对照组(si-NC组);MTT法、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白的表达。结果卵巢癌HO8910、SKOV3和CAOV3细胞系中SUMO1P3表达水平分别为3.42±0.21、3.61±0.32和3.77±0.35,均高于正常卵巢上皮细胞系IOSE80的0.96±0.023,差异具有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组的0.97±0.02比较,si-SUMO1P3组SUMO1P3表达明显降低(0.37±0.10,P<0.05)。MTT结果显示,si-SUMO1P3组24、48、72、96 h细胞增殖率分别为(89.9±17.1)%、(177.4±30.7)%、(364.6±38.8)%、(470.3±59.9)%,72和96 h细胞增殖率明显低于si-NC组。si-SUMO1P3组细胞24h迁移率为(37.8±5.8)%,显著低于si-NC组的(75.8±10.3)%;si-SUMO1P3组细胞侵袭数为159±8,显著低于si-NC组的248±9,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-SUMO1P3组Vimentin、β-catenin、Cyclin D1和c-Myc表达降低,E-cadherin表达增加。结论沉默SUMO1P3表达通过抑制β-catenin信号途径抑制上皮卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 卵巢癌 SUMO1P3 增殖 迁移 侵袭
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长链非编码RNA SUMO1P3对人肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响 被引量:2
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作者 甘园园 何晓琴 徐细明 《中国医药导报》 CAS 2016年第24期31-35,共5页
目的探讨长链非编码RNASUMO1P3对人肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响。方法收集40例来自武汉大学人民医院肝癌患者手术后肝癌及其癌旁组织标本,人肝癌细胞系和正常肝细胞由武汉大学人民医院中心实验室保存。采用实时荧光定量PCR技术(R... 目的探讨长链非编码RNASUMO1P3对人肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响。方法收集40例来自武汉大学人民医院肝癌患者手术后肝癌及其癌旁组织标本,人肝癌细胞系和正常肝细胞由武汉大学人民医院中心实验室保存。采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测SUMO1P3在肝癌及癌旁组织、肝癌细胞及正常肝细胞中表达情况。实验分为si-NC组和si-SUMO1P3组,应用小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞,分别以CCK8法、流式细胞术、划痕实验及Transwell侵袭实验检测下调SUMO1P3对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。结果SUMO1P3在肝癌组织中较对应的癌旁组织显著高表达(P<0.05);SUMO1P3在肝癌细胞株中较正常肝细胞显著高表达(P<0.05)。肝癌细胞转染48h后si-SUMO1P3组较si-NC组SUMO1P3表达明显下调(P<0.05);CCK8实验显示,si-SUMO1P3组转染24、48、72、96h后吸光度值均低于si-NC组(P<0.05);流式细胞术显示,si-SUMO1P3组细胞凋亡率高于si-NC组(P<0.05);划痕实验证明,si-SUMO1P3组细胞迁移抑制率高于si-NC组(P<0.05);Transwell实验表明,si-SUMO1P3组穿膜细胞数明显少于si-NC组(P<0.05)。结论LncRNASUMO1P3可能与肝癌细胞的增殖、凋亡及侵袭转移等生物学行为密切相关。 展开更多
关键词 肝癌 长链非编RNA SUMO1P3 生物学行为
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SUMO特异肽酶3调控小鼠睾丸Sertoli细胞自噬 被引量:1
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作者 陶亚群 朱慧琴 +3 位作者 潘艺青 劳一敏 易静 杨洁 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期706-713,共8页
目的·探讨小鼠睾丸中SUMO特异肽酶3(SUMO specific peptidase3,SENP3,又称SUMO特异蛋白酶3)对自噬的调控作用。方法·采用免疫荧光法对SENP3在睾丸生精细胞和支持细胞(Sertoli cells,简称Sertoli细胞)中的定位进行检测。对Senp... 目的·探讨小鼠睾丸中SUMO特异肽酶3(SUMO specific peptidase3,SENP3,又称SUMO特异蛋白酶3)对自噬的调控作用。方法·采用免疫荧光法对SENP3在睾丸生精细胞和支持细胞(Sertoli cells,简称Sertoli细胞)中的定位进行检测。对Senp3野生型(Senp3+/+)小鼠和Senp3基因敲除杂合子(Senp3+/-)小鼠进行饥饿处理,诱导自噬的发生。提取小鼠的睾丸组织蛋白质,采用Western blotting检测自噬的程度。利用透射电子显微镜技术、免疫荧光法检测睾丸组织切片中的细胞自噬,并区分睾丸生精细胞和Sertoli细胞自噬的程度。结果·SENP3主要定位于Sertoli细胞核。与Senp3+/+小鼠相比,Senp3+/-小鼠饥饿后,Sertoli细胞自噬增加。结论·SENP3能够抑制营养缺乏时Sertoli细胞自噬,可能对细胞自噬的程度发挥控制作用。 展开更多
关键词 自噬 SUMO特异蛋白酶3 睾丸 支持细胞(Sertoli细胞)
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SUMO特异性蛋白酶3通过调控巨噬细胞极化促进磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤形成 被引量:5
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作者 陈阳 张永兴 +2 位作者 倪焕尔 李伟峰 汪芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期769-778,共10页
目的:探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)调控巨噬细胞极化在磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成中的作用。方法:(1)分离C57BL/6背景的Senp3flox/flox(野生型,WT)小鼠和Senp3flox/flox;Lyz2-Cre(SENP3单核细胞特异性敲除,即条件性敲除,c KO... 目的:探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)调控巨噬细胞极化在磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成中的作用。方法:(1)分离C57BL/6背景的Senp3flox/flox(野生型,WT)小鼠和Senp3flox/flox;Lyz2-Cre(SENP3单核细胞特异性敲除,即条件性敲除,c KO)小鼠骨髓来源的单核细胞(BMDMs),分别诱导其M1/M2型分化,采用RT-q PCR、Western blot和细胞免疫荧光比较SENP3表达以及M1/M2型巨噬细胞分布差异。(2)8~12周龄雄性WT小鼠和c KO小鼠用改良型磷酸钙诱导14 d构建小鼠AAA模型,比较两组小鼠的成瘤率和生存率;RT-q PCR和Western blot检测SENP3、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6及基质金属蛋白酶9(MMP-9)在两组小鼠AAA组织中的表达差异;二氢乙啶染色检测组织中活性氧簇(ROS)生成差异。(3)为探讨其中机制,通过Western blot和免疫共沉淀验证SENP3与丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)的相互作用;在BMDMs中转染FlagMKK7野生型(Flag-MKK7 WT)和SUMO修饰位点K18突变体(Flag-MKK7 K18R mutant)后诱导BMDMs进行M1极化,用Western blot检测p-JNK和MMP-9表达的差异。结果:(1)SENP3在M1型巨噬细胞中表达显著升高(P<0.01),在M2型巨噬细胞中显著下调(P<0.01);SENP3在M1向M2型巨噬细胞转化过程中表达显著下降(P<0.01),而在M2向M1型巨噬细胞转化时表达显著上调(P<0.01);c KO组BMDMs经M1/M2型诱导后,巨噬细胞M1型少于WT组,而M2型多于WT组;(2)SENP3在AAA组织中表达上调(P<0.05);c KO小鼠磷酸钙诱导后成瘤率显著降低(P<0.01),生存率显著提高(P<0.05),最大腹主动脉外直径显著减小(P<0.01);c KO小鼠AAA组织中IL-1β、IL-6和TNFα表达显著下调(P<0.01),ROS生成减少,MMP-9表达也显著下调(P<0.05)。(3)M1巨噬细胞中,MKK7的SUMO2/3修饰减少,与SENP3的相互作用增强;突变回补实验说明,转染Flag-MKK7 K18R mutant的M1型巨噬细胞中p-JNK和MMP-9表达显著上调(P<0.05)。结论:SENP3通过去SUMO化修饰MKK7,激活MAPK/JNK通路,调控巨噬细胞的极化,上调MMP-9的表达,从而促进AAA形成。 展开更多
关键词 SUMO特异性蛋白酶3 磷酸钙 腹主动脉瘤 巨噬细胞 基质金属蛋白酶9
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SENP3在小鼠脑损伤模型中的表达与细胞内定位 被引量:1
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作者 玉壮 张顶顶 +4 位作者 厉华 闫惠颖 黄立添 张华升 杭春华 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2015年第3期196-199,共4页
目的研究小泛素类修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶3(SENP3)在创伤性脑损伤(TBI)脑组织中的分布和表达变化。方法成年雄性ICR小鼠84只,随机分为假手术组和TBI后3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d共7组(每组12只)。通过自由落体法制作小鼠TBI模... 目的研究小泛素类修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶3(SENP3)在创伤性脑损伤(TBI)脑组织中的分布和表达变化。方法成年雄性ICR小鼠84只,随机分为假手术组和TBI后3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d共7组(每组12只)。通过自由落体法制作小鼠TBI模型,应用免疫印迹法(Western blot)法检测TBI后脑组织中SENP3及半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的蛋白表达变化。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学染色法检测TBI后脑组织中SENP3的表达和分布变化。结果 Western blot结果显示,SENP3及Caspase-3蛋白水平在TBI后6 h开始升高,24 h达到高峰。RT-PCR结果显示伤灶周围脑组织中的SENP3的mRNA水平在TBI后逐渐升高,并在12 h达到高峰。免疫组织化学染色检测结果显示假手术组SENP3在细胞核及胞浆内均有表达,但主要位于核内。与假手术组相比,TBI组的脑组织中SENP3阳性细胞的核明显增大、固缩,细胞排列紊乱。结论 SENP3可能参与了TBI后的神经细胞凋亡的机制。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 SUMO特异性蛋白酶3 免疫组织化学染色 小鼠
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variation in expression of small ubiquitin-like modifiers in injured sciatic nerve of mice 被引量:1
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作者 Dian-Ying Zhang Kai Yu +3 位作者 Zhong Yang Xiao-Zhi Liu Xiao-Fang Ma Yan-Xia Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第8期1455-1461,共7页
Small ubiquitin-like modifiers (SUMOs) have been shown to regulate axonal regeneration, signal transduction, neuronal migration, and myelination, by covalently and reversibly attaching to the protein substrates during... Small ubiquitin-like modifiers (SUMOs) have been shown to regulate axonal regeneration, signal transduction, neuronal migration, and myelination, by covalently and reversibly attaching to the protein substrates during neuronal cell growth, development, and differentiation. It has not been reported whether SUMOs play a role in peripheral nerve injury and regeneration. To investigate any association between SUMOylation and potential neuroprotective effects during peripheral nerve injury and regeneration, C57/BL mice were randomly divided into sham and experimental groups. The sciatic nerve was exposed only in the sham group. The experimental group underwent neurotomy and epineurial neurorrhaphy. Real-time quantitative polymerase chain reaction and western blot assay results revealed different mRNA and protein expression levels of SUMO1, SUMO2, SUM03 and UBC9 in sciatic nerve tissue (containing both 5 mm of proximal and distal stumps at the injury site) at various time points after injury. Compared with the sham group, protein levels of SUM01 and SUMO2/3 increased in both their covalent and free states after sciatic nerve injury in the experimental group, especially in the covalent state. UBC9 protein levels showed similar changes to those of SUMO1 and SUMO2/3 in the covalent states. Immunohistochemical staining demonstrated that SUMO1 and SUMO2/3 immunopositivities were higher in the experimental group than in the sham group. Our results verified that during the repair of sciatic nerve injury, the mRNA and protein expression of SUMO1, SUMO2, SUMO3 and UBC9 in injured nerve tissues changed in varying patterns and there were clear changes in the expression of SUMO-related proteins. These findings reveal that SUMOs possibly play an important role in the repair of peripheral nerve injury. All animal protocols were approved by the Institutional Animal Care and Use Committee of Tianjin Fifth Central Hospital, China (approval No. TJWZXLL2018041) on November & 2018. 展开更多
关键词 NERVE REGENERATION peripheral NERVE injury SCIATIC NERVE SUMO1 SUMO2/3 UBC9 SUMOYLATION epineurial NEURORRHAPHY neural REGENERATION
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慢病毒介导的SUMO1P3基因表达对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及EMT的影响 被引量:1
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作者 任喜尚 杨洁 郑凤龙 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第19期4832-4835,共4页
目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病... 目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病毒载体)。Western印迹检测SUMO1P3下调效果及EMT相关E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-SMA蛋白表达。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力及黏附能力;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果si-SUMO1P3的组SUMO1P3蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。si-SUMO1P3组BGC-823细胞24~72h细胞活力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组在接种的30min和60min细胞黏附能力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组细胞侵袭能力、迁移能力均显著低于空白组,E-cadherin蛋白表达显著高于空白组,Vimentin和α-SMA蛋白显著表达低于空白组(P<0.05)。结论抑制SUMO1P3基因表达可能通过阻碍EMT降低胃癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。 展开更多
关键词 胃癌 SUMO1P3基因 侵袭迁移 黏附力 上皮细胞间质转化(EMT)
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SENP3对ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的影响 被引量:2
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作者 邵路瑶 刘媛 殷妮娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1363-1369,共7页
目的:探讨小泛素样修饰物(SUMO)/sentrin特异性蛋白酶3(SENP3)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞泡沫化的影响及其机制。方法:利用慢病毒感染并筛选构建4组稳转细胞,分为SENP3过表达组和对照组人源THP-1单核-巨噬细胞,以及SE... 目的:探讨小泛素样修饰物(SUMO)/sentrin特异性蛋白酶3(SENP3)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞泡沫化的影响及其机制。方法:利用慢病毒感染并筛选构建4组稳转细胞,分为SENP3过表达组和对照组人源THP-1单核-巨噬细胞,以及SENP3敲减表达组和对照组小鼠RAW264.7巨噬细胞,利用ox-LDL诱导巨噬细胞构建泡沫细胞模型。采用油红O染色检测细胞内脂滴沉积;用试剂盒酶法测定细胞内胆固醇含量;Westernblot检测SENP3的表达量,以及pro-caspase-1的表达量和剪切情况;ELISA法检测细胞中促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)的分泌。结果:与对照组相比,SENP3过表达显著降低THP-1细胞内脂滴含量,SENP3敲减表达显著提升RAW264.7细胞内脂滴含量;与对照组相比,SENP3过表达细胞内总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯化率均显著降低(P<0.05或P<0.01);SENP3的表达量随ox-LDL刺激时间增加而显著下降(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,SENP3过表达组pro-caspase-1的表达量没有显著差异,而剪切体caspase-1(p20)的含量显著下降(P<0.01);与对照组相比,SENP3过表达组细胞分泌的IL-1β蛋白量显著下降(P<0.05)。结论:SENP3蛋白可显著抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能是通过抑制炎症小体的激活实现的。 展开更多
关键词 SUMO/sentrin特异性蛋白酶3 泡沫细胞 炎症小体 动脉粥样硬化
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嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症SUMO特异性蛋白酶3表达降低促进替代激活巨噬细胞极化
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作者 暴喜明 周争 李吉平 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2021年第5期360-366,共7页
目的探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP 3)在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症中对巨噬细胞极化产生的影响。方法嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症患者鼻黏膜组织中CD68、CD206、SENP3免疫荧光染色共定位。用白细胞介素-4(IL-4)和IL-13刺激SENP3基... 目的探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP 3)在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症中对巨噬细胞极化产生的影响。方法嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症患者鼻黏膜组织中CD68、CD206、SENP3免疫荧光染色共定位。用白细胞介素-4(IL-4)和IL-13刺激SENP3基因敲除小鼠和对照小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM),体外诱导巨噬细胞极化。利用SENP3基因敲除小鼠建立嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症动物模型,用免疫荧光共定位检测F4/80、CD206。结果在SENP3基因敲除小鼠建立的嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症模型中,鼻黏膜中CD206^(+)细胞数量显著增加。在体外诱导BMDM极化过程中,敲除SENP3使F4/80^(+)CD206^(+)细胞数量增加。同时,在对照组小鼠提取的BMDM极化的过程中,SENP3蛋白表达量明显下降。在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症患者鼻黏膜内检测到不表达SENP3的CD68^(+)CD206^(+)细胞数量显著多于表达SENP3的CD68^(+)CD206^(+)细胞。结论在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症中,巨噬细胞SENP3表达的下调促进替代激活巨噬细胞的极化。 展开更多
关键词 嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症 SUMO特异性蛋白酶3 巨噬细胞
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瑞芬太尼通过调控lncRNA SUMO1P3表达抑制肾癌细胞786-O的增殖、迁移和侵袭
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作者 赵铤 赵全丰 +1 位作者 李坤庆 金胜 《山西医科大学学报》 CAS 2021年第11期1396-1402,共7页
目的探讨瑞芬太尼是否通过lncRNA SUMO1P3影响肾癌细胞786-O增殖、迁移和侵袭。方法体外培养786-O细胞,分为对照组(正常培养48 h)和不同浓度瑞芬太尼组(20,40,80 nmol/L瑞芬太尼的培养基培养48 h),细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性,... 目的探讨瑞芬太尼是否通过lncRNA SUMO1P3影响肾癌细胞786-O增殖、迁移和侵袭。方法体外培养786-O细胞,分为对照组(正常培养48 h)和不同浓度瑞芬太尼组(20,40,80 nmol/L瑞芬太尼的培养基培养48 h),细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。786-O细胞分别转染SUMO1P3小干扰RNA(si-SUMO1P3组)和小干扰RNA阴性对照序列(si-NC组)后,CCK-8、Transwell及Western blot法分别观察沉默SUMO1P3基因表达对786-O细胞活性、迁移和侵袭,及Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。786-O细胞分别转染SUMO1P3过表达载体(pcDNA-SUMO1P3)和空载体(pcDNA),然后再用80 nmol/L瑞芬太尼干预(依次记为80 nmol/L瑞芬太尼+pcDNA-SUMO1P3组、80 nmol/L瑞芬太尼+pcDNA组)后,CCK-8、Transwell及Western blot法分别观察细胞活性、迁移和侵袭,及Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果与0 nmol/L组比较,20,40,80 nmol/L瑞芬太尼组786-O细胞活性、迁移数和侵袭数及细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05),SUMO1P3基因表达降低(P<0.05),且不同浓度瑞芬太尼组间各检测指标比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-SUMO1P3组786-O细胞活性、迁移数和侵袭数,及细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与80 nmol/L瑞芬太尼+pcDNA组比较,80 nmol/L瑞芬太尼+pcDNA-SUMO1P3组786-O细胞活性、迁移数和侵袭细胞数,及细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论瑞芬太尼可通过抑制SUMO1P3的表达阻碍肾癌786-O细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 肾癌 瑞芬太尼 SUMO1P3 细胞增殖 迁移 侵袭
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SENP3在疾病发生发展中作用的研究进展
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作者 周涛 方晋仁 +2 位作者 王凯兵 何咏奥 杨南扬 《中南医学科学杂志》 CAS 2022年第4期606-609,共4页
小泛素样修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶(SENP)能介导SUMO前体加工和去SUMO化修饰,是细胞内SUMO稳态维持的核心调控因子。SENP3是SENP家族成员之一,分布于核仁并优先催化靶蛋白的去SUMO2/3修饰;通过与靶蛋白结合并去SUMO化靶蛋白调节多种... 小泛素样修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶(SENP)能介导SUMO前体加工和去SUMO化修饰,是细胞内SUMO稳态维持的核心调控因子。SENP3是SENP家族成员之一,分布于核仁并优先催化靶蛋白的去SUMO2/3修饰;通过与靶蛋白结合并去SUMO化靶蛋白调节多种胞内蛋白功能。一旦SENP3的表达异常,便会引发一系列细胞异常活动,最终导致疾病的发生发展。本文对SENP3在疾病中的功能研究进展做一综述。 展开更多
关键词 SUMO特异性蛋白酶3 去SUMO化 疾病
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长链非编码RNA SUMO1P3对胃癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量:5
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作者 郭魁元 罗昭锋 +5 位作者 闫军浩 郭晓磊 杨战锋 吴万庆 傅聿铭 崔小兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期258-260,共3页
目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)SUMO1P3在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SUMO1P3在63例胃癌及癌旁组织和胃癌细胞株(MGC803、AGS、BSG823、SGC7901)及正... 目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)SUMO1P3在胃癌组织中的表达水平及其对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SUMO1P3在63例胃癌及癌旁组织和胃癌细胞株(MGC803、AGS、BSG823、SGC7901)及正常人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)中的相对表达量。将胃癌细胞株MGC803分为两组,小干扰RNA组(si-SUMO1P3组)和阴性对照组(si-Ctrl组),分别以细胞计数试剂盒(CCK-8)法、克隆形成实验、划痕愈合实验及流式细胞术检测干扰SUMO1P3表达对胃癌细胞增殖能力、克隆形成能力、细胞迁移能力及凋亡的影响。结果 胃癌组织中SUMO1P3相对表达水平(2.37±0.59)显著高于癌旁组织(0.91±0.28,t=17.740,P<0.01),且SUMO1P3在胃癌细胞株MGC803、AGS、BSG823、SGC7901中的表达量明显高于GES-1(P<0.05)。小干扰RNA(siRNA)能够明显抑制MGC803细胞中lncRNA SUMO1P3的表达。CCK-8实验结果显示,72 h后si-SUMO1P3组细胞吸光度值(2.22±0.14)低于si-Ctrl组(3.12±0.13,t=4.730,P<0.01)。克隆形成实验结果显示,si-SUMO1P3组克隆形成率(26.2±5.5)%低于si-Ctrl组(47.3±6.9)%(t=4.140,P<0.05)。划痕愈合实验结果显示,24 h后si-SUMO1P3组细胞迁移率(21.7±4.1)%低于si-Ctrl组(35.3±5.8)%(t=3.320,P<0.05)。细胞凋亡结果表明,si-SUMO1P3组细胞凋亡率(16.4±2.3)%高于si-Ctrl组(7.3±1.6)%(t=5.630,P<0.01)。结论 lncRNA SUMO1P3在胃癌组织中高表达,干扰SUMO1P3表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 胃癌 长链非编码RNA SUMO1P3 增殖 凋亡
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PIAS蛋白家族的功能 被引量:4
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作者 刘文栋 伍会健 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第2期397-400,共4页
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。通过相互作用,PIAS蛋白通过影响了蛋白的活性和功能,参与基因的转录调控和包括STAT(Signal transducer and activator of trans... PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。通过相互作用,PIAS蛋白通过影响了蛋白的活性和功能,参与基因的转录调控和包括STAT(Signal transducer and activator of transcription),Wnt,TGFβ,NF-κB等通路在内的细胞信号通路,具有重要的生理功能。PIAS蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(small ubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的化学修饰,尤其是SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,为蛋白质之间的相互作用提供平台,促进细胞信号通路复合物或基因转录复合物中其它调节蛋白的去除和募集,并涉及到靶蛋白的亚核定位。同时,针对不同的靶蛋白,PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIAS蛋白功能的特异性和复杂性。本篇综述将就上述内容作一介绍。 展开更多
关键词 PIAS蛋白 SUMO SUMOE3连接酶 构架蛋白
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长链非编码RNA SUMO1P3在非小细胞肺癌中的表达及其预后价值 被引量:2
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作者 刘晓 胡岗 +3 位作者 陈一凡 刘波 徐敏 廖俊喆 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第27期3839-3842,共4页
目的探讨非小细胞肺癌lncRNA SUMO1P3的表达与临床意义。方法应用qRT-PCR法检测126例非小细胞肺癌患者肿瘤组织及配对癌旁组织中SUMO1P3的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。结果与癌旁组织、健康组织相比,非小细胞肺癌组织中SUM... 目的探讨非小细胞肺癌lncRNA SUMO1P3的表达与临床意义。方法应用qRT-PCR法检测126例非小细胞肺癌患者肿瘤组织及配对癌旁组织中SUMO1P3的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。结果与癌旁组织、健康组织相比,非小细胞肺癌组织中SUMO1P3表达水平明显升高(P<0.01)。其表达水平与TNM分期(χ~2=12.49,P<0.01)及肿瘤体积(χ~2=10.20,P<0.01)显著相关。ROC曲线下面积为0.728 4[95%CI(0.664,0.761);P=0.001 2]。Kaplan-Meier生存分析显示SUMO1P3高表达组患者的总生存时间(OS)和疾病无进展生存期(PFS)显著缩短(P=0.000 1,P=0.003 1)。Cox回归分析显示SUMO1P3表达水平、组织学分级和TNM分期是OS、PFS的独立预测指标。结论 SUMO1P3的高表达与非小细胞肺癌患者的不良预后密切相关,可能是非小细胞肺癌患者诊断及治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 长链非编码RNA SUMO1P3 预后
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PIASx结构与功能的研究进展
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作者 王海燕 张露萍 郑英 《生命科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期1014-1021,共8页
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。PIASx是4个组成成员中的一种,其包括两个亚型。PIASx通过与不同种类的蛋白相互作用,影响它们的活性和功能。PIASx蛋白的调控机... PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。PIASx是4个组成成员中的一种,其包括两个亚型。PIASx通过与不同种类的蛋白相互作用,影响它们的活性和功能。PIASx蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(smallubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,通过与雄激素受体的作用参与雄激素介导的基因转录调节。PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIASx蛋白功能的特异性和复杂性。 展开更多
关键词 PIASx SUMO SUMOE3连接酶 雄激素调节因子 SAP
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多囊卵巢综合征中高雄激素诱导的颗粒细胞自噬激活作用 被引量:2
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作者 孙东梅 柴蔚然 +1 位作者 匡延平 王锋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期324-329,334,共7页
目的探讨高雄激素睾酮(testosterone)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法分离培养卵巢功能正常的不孕患者(对照组)及PCOS不孕患者(PCOS组)的卵巢颗粒细胞,分别用10μmol/L睾酮处理24 h... 目的探讨高雄激素睾酮(testosterone)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法分离培养卵巢功能正常的不孕患者(对照组)及PCOS不孕患者(PCOS组)的卵巢颗粒细胞,分别用10μmol/L睾酮处理24 h;将人卵巢颗粒细胞株KGN培养至3×10^(5)个,分别进行小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异肽酶3(SUMO specific peptidase 3,SENP3)质粒转染;RT-PCR法检测SENP3基因mRNA转录水平,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及SENP3蛋白表达水平。结果与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P <0.01),P62蛋白表达水平显著降低(P <0.01);两组患者卵巢颗粒细胞经睾酮处理后,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P均<0.05),P62蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SENP3 mRNA转录及蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。KGN细胞经siRNA干扰,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平上调(P <0.01),P62蛋白表达水平下降(P <0.05);KGN细胞经SENP3质粒转染,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平无明显变化(P> 0.05),P62蛋白表达水平上调(P <0.01)。PCOS组卵巢颗粒细胞经睾酮处理后,SENP3蛋白表达水平显著下降(P <0.05)。结论PCOS患者颗粒细胞有一定程度的自噬激活,且高雄激素参与了PCOS患者颗粒细胞的自噬激活过程,其作用机制可能与高雄激素抑制颗粒细胞中SENP3蛋白表达有关。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 高雄激素血症 自噬 SUMO特异肽酶3
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A novel tomato SUMO E_3 ligase,SlSIZ_1,confers drought tolerance in transgenic tobacco 被引量:8
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作者 Song Zhang Kunyang Zhuang +3 位作者 Shiju Wang Jinlian Lv Na'na Ma Qingwei Meng 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期102-117,共16页
SUMOylation is an impo^ant post-translational modification process that regulates different cellular functions in eukaryotes. SIZ/PIAS-type SAP and Mizl (SIZ0 proteins exhibit SUMO E3 ligase activity, which modulates... SUMOylation is an impo^ant post-translational modification process that regulates different cellular functions in eukaryotes. SIZ/PIAS-type SAP and Mizl (SIZ0 proteins exhibit SUMO E3 ligase activity, which modulates SUMOylation. However, SIZI in tomato has been rarely investigated. In this study, a tomato SIZI gene (SISIZI) was isolated and its molecular characteristics and role in tolerance to drought stress are described. SISIZI was upregulated by cold, sodium chloride (NaCI), polyethylene glycol (PEG), hydrogen peroxide (H20~) and abscisic acid (ABA), and the corresponding proteins were localized in the nucleus. The expression of SISIZI in Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) sizl-2 mutants partially complemented the phenotypes of dwarf, cold sensitivity and ABA hypersensitivity. SISIZI also exhibited the activity of SUMO E3 ligase to promote the accumulation of SUMO conjugates. Under drought stress, the ectopic expression of SISIZl in transgenic tobacco lines enhanced seed germination and reduced the accumulation of reactive oxygen species..SISIZl overexpression conferred the plants with improved growth, high free proline content, minimal malondialdehyde accumulation and increased accumulation of SUMO conjugates. SISIZ1 is a functional homolog of Arabidopsis SIZ1 with SUMO E3 ligase activity. Therefore, overexpression of SISIZ1 enhanced the tolerance of transgenic tobacco to drought stress. 展开更多
关键词 drought stress SUMO E3 ligase SlSIZ1 SUMO conjugates TOMATO transgenic tobacco
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