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组蛋白甲基化酶SUV39H1过表达对C2C12细胞成骨分化的影响
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作者 王乾 黄晨 +5 位作者 黄廷锐 孙攀 赵永见 施杞 王拥军 唐德志 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1260-1265,共6页
目的 组蛋白甲基化修饰作为组蛋白密码的重要组成部分在表观遗传学研究中占有重要地位。本文旨在探讨组蛋白甲基化酶SUV39H1过表达对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导的C2C12细胞成骨分化的影响。方法 利用SUV3... 目的 组蛋白甲基化修饰作为组蛋白密码的重要组成部分在表观遗传学研究中占有重要地位。本文旨在探讨组蛋白甲基化酶SUV39H1过表达对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导的C2C12细胞成骨分化的影响。方法 利用SUV39H1慢病毒感染C2C12细胞构建SUV39H1过表达稳转株。然后利用100 ng/mL的BMP2成骨诱导液对SUV39H1过表达稳转株成骨诱导7 d,随后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色和茜素红染色检测成骨分化和矿化相关指标,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、细胞免疫荧光、Western blot检测成骨相关蛋白表达。结果 ALP和茜素红染色显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会抑制C2C12细胞早期和晚期成骨分化和矿化程度,qRT-PCR显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会降低Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、ALP、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)、骨钙素(osteocalcin, OCN)基因的表达(P<0.05)。Western blot和免疫荧光结果显示,与过表达GFP对照组比较,SUV39H1过表达会抑制Runx2和ALP成骨蛋白的表达,同时会提高组蛋白H3第9位点赖氨酸三甲基化(histone H3 lysine 9 trimethylation, H3K9me3)蛋白表达水平(P<0.05)。结论 SUV39H1过表达会抑制C2C12细胞的成骨分化水平。 展开更多
关键词 组蛋白甲基化酶 suv39h11 C2C12细胞 成骨分化
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枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响 被引量:7
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作者 胡鹏刚 张昌明 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第6期27-33,40,共8页
目的探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组(5,10,50μmol/L枸杞皂苷)及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞... 目的探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组(5,10,50μmol/L枸杞皂苷)及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系(HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2)和人鼻咽癌上皮细胞(NP69)中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体(pcDNA-Suv39H1)以及针对Suv39H1的小干扰RNA(Suv39H1 siRNA),分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖(F=12.030,P=0.0025)和侵袭(F=4.807,P=0.0315),增加细胞凋亡率(F=5.232,P=0.0261),抑制Suv39H1蛋白表达(F=14.64,P=0.0013);与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高(P<0.01);转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义(P<0.01);与50μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高(P<0.01)。结论枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。 展开更多
关键词 枸杞皂苷 鼻咽癌 suv39h1 JAK2/STAT3信号通路
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沉默SUV39H1基因对急性髓系白血病KG-1细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 马旭东 赵婷 黄轶群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期82-86,共5页
本研究旨在探讨沉默SUV39H1基因对急性髓系白血病细胞株KG-1增殖和凋亡的影响。将SUV39H1 siRNA经LipofectamineTM2000转染至KG-1细胞,应用MTS法检测细胞增殖率,观察SUV39H1 siRNA对KG-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞凋亡;Western ... 本研究旨在探讨沉默SUV39H1基因对急性髓系白血病细胞株KG-1增殖和凋亡的影响。将SUV39H1 siRNA经LipofectamineTM2000转染至KG-1细胞,应用MTS法检测细胞增殖率,观察SUV39H1 siRNA对KG-1细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测SUV39H1 siRNA作用后P15和凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-9、procaspase-3、C-MYC的表达。结果表明,沉默SUV39H1基因可抑制细胞增殖,SUV39H1 siRNA浓度为30、60、120、240 nmol/L作用48 h后,KG-1细胞的增殖率分别为(76.43±1.98)%、(51.31±1.84)%、(37.31±1.61)%、(18.94±3.22)%,差异具有统计学显著意义(P<0.05);SUV39H1 siRNA可上调P15基因的表达;SUV39H1 siRNA可诱导细胞凋亡,30、60、120 nmol/L SUV39H1 siRNA作用48 h后,KG-1细胞凋亡率分别为(40.2±5.1)%、(56.8±4.8)%、(71.6±5.6)%,差异有统计学显著意义(P<0.05);抗凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-9、procaspase-3、C-MYC的表达减少。结论:SUV39H1 siRNA能抑制KG-1细胞的增殖并诱导其凋亡,有望成为白血病治疗的一个新的靶点。 展开更多
关键词 急性白血病 suv39h1 RNA干扰 KG-1细胞
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Suv39 H2在胆管癌组织中的转录表达及临床意义 被引量:1
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作者 陈忠 丁志强 +3 位作者 陈勇军 俞亚红 罗强 张先林 《临床外科杂志》 2008年第4期236-237,共2页
目的探讨Suv39H2与胆管癌发生的关系及其临床意义。方法用RT-PCR检测35例胆管癌组织及28例正常胆管组织Suv39H2mRNA表达,并与肿瘤分化程度、有无转移作对比研究。结果胆管癌中Suv39H2mRNA阳性表达率为71.43%(25/35),正常胆管组织中阳性... 目的探讨Suv39H2与胆管癌发生的关系及其临床意义。方法用RT-PCR检测35例胆管癌组织及28例正常胆管组织Suv39H2mRNA表达,并与肿瘤分化程度、有无转移作对比研究。结果胆管癌中Suv39H2mRNA阳性表达率为71.43%(25/35),正常胆管组织中阳性表达率为32.14%(9/28),差异有统计学意义(P<0.01)。胆管癌中Suv39H2mRNA阳性表达与分化程度、有无转移无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Suv39H2参与胆管癌发生早期阶段。 展开更多
关键词 suv39 h2 组蛋白甲基化 胆管癌
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CRISPR/Cas13d介导猪胎儿成纤维细胞SUV39H1/SUV39H2基因敲降
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作者 毕登峰 王煜 +1 位作者 姚婧 赵建国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期1957-1966,共10页
研究旨在利用CRISPR/Cas13d系统对猪胎儿成纤维细胞(PEF)中的胚胎发育相关基因SUV39H1/SUV39H2进行RNA水平的敲降,从而在猪上建立CRISPR/Cas13d介导的基因敲降系统。根据SUV39H1、SUV39H2基因的编码序列各设计3个靶向编码链的sgRNAs,并... 研究旨在利用CRISPR/Cas13d系统对猪胎儿成纤维细胞(PEF)中的胚胎发育相关基因SUV39H1/SUV39H2进行RNA水平的敲降,从而在猪上建立CRISPR/Cas13d介导的基因敲降系统。根据SUV39H1、SUV39H2基因的编码序列各设计3个靶向编码链的sgRNAs,并以单链寡核苷酸的形式合成,退火后与BspQⅠ线性化的sgRNA表达载体进行连接,构建SUV39H1-sgRNA和SUV39H2-sgRNA表达载体,用Sanger软件进行测序;将Cas13d表达载体和靶向SUV39H1/SUV39H2基因的sgRNA载体按照1∶1、1∶2、1∶4、2∶1和4∶1比例转染猪胎儿成纤维细胞,48 h后收集细胞,用流式细胞术分选检测细胞转染效率,用半定量PCR和实时荧光定量PCR检测敲降效率;用半定量PCR和免疫荧光检测敲降SUV39H1/SUV39H2基因后,靶基因转录水平及组蛋白H3K9me3水平的变化。测序结果表明,针对2个基因设计的各3条sgRNAs均成功连入载体中;流式细胞术分选结果显示,转染效率约70%;半定量PCR结果表明,与对照组相比,3个sgRNAs均极显著降低了SUV39H1和SUV39H2基因的表达(P<0.01),其中SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1均可使SUV39H1和SUV39H2的表达降低50%;Cas13d∶sgRNA为1∶1、1∶2和1∶4组细胞的存活率高于2∶1和4∶1组;实时荧光定量PCR结果表明,Cas13d∶sgRNA为1∶2、1∶4、2∶1和4∶1组敲降效率均显著高于1∶1组(P<0.05),且Cas13d∶sgRNA为1∶2组敲降效率最高(70%)。半定量PCR结果显示,转染SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1极显著降低SUV39H1和SUV39H2的表达,表达量为对照组的25%~30%(P<0.01)。免疫荧光检测结果表明,敲降SUV39H1和SUV39H2基因后,组蛋白H3K9me3水平显著降低(P<0.05)。因此,本研究利用CRISPR/Cas13d系统在猪胎儿成纤维细胞中成功敲降SUV39H1和SUV39H2,并下调其催化的H3K9me3水平。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas13d suv39h1/suv39h2基因 敲降 猪胎儿成纤维细胞
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猪Suv39h2基因的cDNA克隆及原核表达
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作者 刘丽娜 彭健 +2 位作者 郑嵘 刘敏 蒋思文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期611-616,共6页
以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠... 以人Suv39h2基因mRNA序列为基础,利用"电子克隆"获得猪的部分cDNA序列,并用RT-PCR技术从肌肉组织中扩增得到猪Suv39h2基因1 291 bp的cDNA序列,将其重组于pGEX-KG原核表达载体中,经酶切、序列鉴定正确后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,经异丙基B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并用SDS-PAGE电泳进行检测,优化后的最佳条件为IPTG诱导4 h,其浓度为0.7 mmol.L-1,并主要以包涵体的形式存在。Western blotting检测发现在约66 ku处有一条特异带,与预测的大小一致。猪Suv39h2基因的克隆和表达研究,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 组蛋白赖氨酸甲基转移酶 suv39h2基因 克隆 表达
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甲基化转移酶Suv39h1基因慢病毒表达载体构建及鉴定
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作者 张帆 卢韬 +3 位作者 孙荷 吕娟 杨明峰 董学君 《医学研究杂志》 2012年第12期47-50,共4页
目的构建小鼠H3K9甲基转移酶Suv39h1基因慢病表达毒载体。方法设计并合成带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物,以携带Suv39h1 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板扩增目的基因,将其与Lenti-eGFP-Neo载体双酶切,T4连接酶连接,构建成PLenti-eGFP-Suv3... 目的构建小鼠H3K9甲基转移酶Suv39h1基因慢病表达毒载体。方法设计并合成带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物,以携带Suv39h1 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板扩增目的基因,将其与Lenti-eGFP-Neo载体双酶切,T4连接酶连接,构建成PLenti-eGFP-Suv39h1重组载体,转化感受态细胞DH5α,PCR筛选阳性克隆质粒,酶切与测序鉴定正确后,将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞,包装及效价测定。以感染复数(MOI值)为10和30的慢病毒颗粒感染293T细胞,RT-PCR检测Suv39h1 mRNA表达。结果 PCR、酶切及测序结果均显示目的片段插入正确,四质粒共转染293T细胞后,镜下可见95%的细胞表达绿色荧光;效价测定为2.11×108TU/ml;RT-PCR检测显示,MOI值为30的Suv39h1表达量是MOI值为10的3倍,两者均可在293T细胞中均匀稳定表达。结论成功构建Suv39h1基因慢病毒表达载体,为后续Suv39h1基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 suv39h1 组蛋白甲基转移酶 慢病毒载体
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局灶性脑缺血再灌注损伤对小鼠脑组织SUV39H1、H3K9及GFAP表达的影响 被引量:4
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作者 花向阳 卞尔保 +1 位作者 张正伟 赵兵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第2期205-209,214,共6页
目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤中病变区域组蛋白3赖氨酸9(H3K9)及其甲基化转移酶(SUV39H1)与星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的变化特点。方法选用C57BL/6小鼠作为实验对象,运用Koizumi法建立左侧大脑中动脉局灶性缺血... 目的探讨局灶性脑缺血再灌注损伤中病变区域组蛋白3赖氨酸9(H3K9)及其甲基化转移酶(SUV39H1)与星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的变化特点。方法选用C57BL/6小鼠作为实验对象,运用Koizumi法建立左侧大脑中动脉局灶性缺血再灌注小鼠模型(MCAO model),采用行为学、切片染色、qRT-PCR、相关分析、Western blot等方法,对比观察空白对照组、假手术组、脑缺血2 h再灌注24 h(实验组)小鼠大脑组织SUV39H1、H3K9及GFAP的表达情况。结果氯化三苯四氮唑(TTC)染色结果显示,与假手术组和空白对照组相比,实验组小鼠脑梗死面积明显增加、脑水肿明显。qRT-PCR及Western blot结果显示,与假手术组和空白对照组相比,实验组小鼠脑组织SUV39H1、H3K9及GFAP的表达明显增加(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注损伤的小鼠脑组织SUV39H1和H3K9的表达增加,同时GFAP的表达也显著增加,提示星形胶质细胞活化对局灶性缺血再灌注损伤的小鼠脑组织中SUV39H1和H3K9表达增加可能具有重要作用。 展开更多
关键词 MCAO模型 缺血再灌注损伤 suv39h1 组蛋白h3K9 GFAP 星形胶质细胞
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SUV39H1的生物学功能研究进展
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作者 简俊(综述) 刘修恒(审校) 王磊(审校) 《疑难病杂志》 CAS 2022年第11期1216-1219,1224,共5页
SUV39H1是第一个被发现的人类组蛋白赖氨酸甲基转移酶(HMT),能够特异性甲基化H3K9,参与异染色质的形成和基因的沉默,进而发挥表观遗传调控作用。近年研究发现,SUV39H1同时具有抑癌效应和致癌效应,在肿瘤发生发展的调控中发挥重要作用。... SUV39H1是第一个被发现的人类组蛋白赖氨酸甲基转移酶(HMT),能够特异性甲基化H3K9,参与异染色质的形成和基因的沉默,进而发挥表观遗传调控作用。近年研究发现,SUV39H1同时具有抑癌效应和致癌效应,在肿瘤发生发展的调控中发挥重要作用。此外,在诸多疾病过程中均发现SUV39H1的异常表达,表明其广泛参与各种病理生理过程。文章回顾了近年有关SUV39H1与各类疾病过程联系的研究,总结了SUV39H1在生长发育及疾病发生发展过程中的调控机制,为相关疾病的诊断及治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 suv39h1 h3K9甲基化 人类组蛋白赖氨酸甲基转移酶 表观遗传修饰
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组蛋白甲基转移酶Suv39h2调控非酒精性脂肪性肝炎的机制研究
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作者 樊智文 徐涌 《临床肝胆病杂志》 CAS 2017年第8期1457-1457,共1页
【据《Hepatology》2017年6月报道】题:组蛋白甲基转移酶Suv39h2调控非酒精性脂肪性肝炎的机制研究(作者樊智文等)非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种典型由于营养过剩及活动过少导致代谢紊乱的肝脏病理状态。
关键词 suv39h2 甲基转移酶 肝脏病理 NASh 智文 组蛋白 活化的巨噬细胞 营养过剩 肝脏炎症 转录因子
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SUV39H1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖能力的影响 被引量:3
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作者 王佩琦 张一帆 吕育纯 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期431-432,共2页
目的分析组蛋白甲基转移酶SUV39H1在正常卵巢组织和卵巢癌中的表达,研究其对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响。方法收取上皮性卵巢癌组织89例,正常卵巢组织38例,通过免疫组织化学染色检测SUV39H1蛋白的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理... 目的分析组蛋白甲基转移酶SUV39H1在正常卵巢组织和卵巢癌中的表达,研究其对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响。方法收取上皮性卵巢癌组织89例,正常卵巢组织38例,通过免疫组织化学染色检测SUV39H1蛋白的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理特征及预后之间的相关性,构建SUV39H1稳定干扰的SKOV-3细胞株,CCK-8法检测卵巢癌细胞增殖能力的变化。结果卵巢癌组织中的SUV39H1蛋白高表达率为67.4%显著高于正常卵巢组织的34.2%(P <0.05);卵巢癌组织中SUV39H1高表达与患者的FIGO分期、Grade分级、有无远处转移以及血清CA-125水平具有显著的相关性(P <0.05);高表达SUV39H1与卵巢癌患者较差的预后相关;降低SKOV-3细胞株中SUV39H1的表达,能够显著抑制肿瘤细胞的增殖能力。结论SUV39H1在卵巢癌组织中表达升高,与卵巢癌患者预后不良相关,并且能够促进卵巢癌细胞株的增殖。 展开更多
关键词 卵巢癌 suv39h1 细胞增殖
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SUV39H1 deficiency suppresses clear cell renal cell carcinoma growth by inducing ferroptosis 被引量:13
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作者 Jianfeng Wang Xiaomao Yin +3 位作者 Wei He Wei Xue Jin Zhang Yiran Huang 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2021年第2期406-419,共14页
Clear cell renal cell carcinoma(ccRCC)is a common kidney malignancy characterized by a poor prognosis.Suppressor of variegation 3-9 homolog 1(SUV39H1),which encodes a histone H3 lysine 9 methyltransferase,has been rep... Clear cell renal cell carcinoma(ccRCC)is a common kidney malignancy characterized by a poor prognosis.Suppressor of variegation 3-9 homolog 1(SUV39H1),which encodes a histone H3 lysine 9 methyltransferase,has been reported to act as an oncogene in many cancers.However,it is unclear whether SUV39H1 is involved in ccRCC.Here,we report that SUV39H1 expression is frequently upregulated in ccRCC tumors and is significantly correlated with ccRCC progression.SUV39H1 expression level is an independent risk factor for cancer prognosis,and integration with several known prognostic factors predicted ccRCC patient prognosis with improved accuracy than the conventional SSIGN(stage,size,grade and necrosis)prognostic model.Mechanistically,we discovered that siRNA knockdown or pharmacological inhibition of SUV39 H1 induced iron accumulation and lipid peroxidation,leading to ferroptosis that disrupted ccRCC cell growth in vitro and in vivo.We also show that SUV39H1 deficiency modulated the H3K9me3 status of the DPP4(dipeptidyl-peptidase-4)gene promoter,resulting in upregulation of its expression that contributes to ferroptosis.Taken together,our findings provide the mechanistic insight into SUV39H1-dependent epigenetic control of ccRCC tumor growth and indicate that SUV39H1 may serve as a potential therapeutic target for ccRCC treatment. 展开更多
关键词 Clear cell renal cell carcinoma suv39h1 PROGRESSION Prognostic model Ferroptosis DPP4 EPIgeneTICS Therapeutic target
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RNA干扰沉默急性白血病细胞SUV39H1基因表达的实验研究
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作者 赵婷 马旭东 黄轶群 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期49-54,共6页
目的应用小干扰RNA(siRNA)干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1(suppressor of variegation 3-9 homolog1)基因的表达,研究SUV39H1基因沉默对KG一1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响,探寻白血病... 目的应用小干扰RNA(siRNA)干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1(suppressor of variegation 3-9 homolog1)基因的表达,研究SUV39H1基因沉默对KG一1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点。方法用Lipo.feetamineTM2000将体外合成针对SUV39H1基因的siRNA片段转染到KG-1细胞后,采用RT—PCR方法检测siRNA对SUV39H1mRNA表达的抑制效果,用四唑氮化合物(MTS)法绘制细胞增殖抑制曲线,Westernblot法检测目的基因SUV39H1和抑癌基因p15的表达及对组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响。结果SUV39H1siRNA转染KG-1细胞可沉默该基因;沉默SUV39H1基因表达可抑制细胞增殖,30、60、120、240nmol/LSUV39H1siRNA转染48h后,KG-1细胞的增殖抑制率分别为(23.57±1.98)%、(48.69±1.84)%、(62.69±1.61)%、(81.06±3.22)%,差异有统计学意义(P〈0.05);沉默SUV39H1基因可上调p15基因的表达,下调组蛋白H3K9三甲基化,上调组蛋白H3K9、H3的乙酰化。30、60、120nmol/LSUV39H1siRNA处理KG-1细胞48h后,组蛋白H3K9三甲基化水平较对照组分别减少25%、33%、49%;组蛋白H3K9乙酰化水平增强,分别为对照组的1.83、2.16、3.07倍;组蛋白H3乙酰化水平逐渐升高为对照组的1.35、1.87、2.37倍;p15表达水平呈递增趋势,分别为对照组的1.52、2.89、3.08倍;而组蛋白H4、H3K14、H3K27的乙酰化水平未见显著变化。结论沉默SUV39H1基因表达可能通过改变抑癌基因启动子区域的组蛋白修饰,即上调组蛋白H3K9乙酰化及下调H3K9甲基化,使p15基因重新表达,从而抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 白血病 RNA干扰 基因 suv39h1 KG-1细胞 组蛋白修饰
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PHF6 functions as a tumor suppressor by recruiting methyltransferase SUV39H1 to nucleolar region and offers a novel therapeutic target for PHF6-muntant leukemia 被引量:2
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作者 Hsiang-i Tsai Yanping Wu +14 位作者 Rui Huang Dandan Su Yingyi Wu Xiaoyan Liu Linglu Wang Zhanxue Xu Yuxin Pang Chong Sun Chao He Fan Shu Haitao Zhu Dongqing Wang Fang Cheng Laiqiang Huang Hongbo Chen 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期1913-1927,共15页
Mutations in the plant homeodomain-like finger protein 6(PHF6)gene are strongly associated with acute myeloid(AML)and T-cell acute lymphoblastic leukemia(T-ALL).In this study,we demonstrated that PHF6 can bind to H3K9... Mutations in the plant homeodomain-like finger protein 6(PHF6)gene are strongly associated with acute myeloid(AML)and T-cell acute lymphoblastic leukemia(T-ALL).In this study,we demonstrated that PHF6 can bind to H3K9me3 and H3K27me1 on the nucleolar chromatin and recruit histone methyltransferase SUV39H1 to the rDNA locus.The deletion of PHF6 caused a decrease in the recruitment of SUV39H1 to rDNA gene loci,resulting in a reduction in the level of H3K9me3 and the promotion of rDNA transcription.The knockdown of either SUV39H1 or PHF6 significantly attenuated the effects of increase in H3K9me3 and suppressed the transcription of rDNA induced by the overexpression of the other interacting partner,thereby establishing an interdependent relationship between PHF6 and SUV39H1 in their control of rRNA transcription.The PHF6 clinical mutants significantly impaired the ability to bind and recruit SUV39H1 to the rDNA loci,resulting in an increase in rDNA transcription activity,the proliferation of in vitro leukemia cells,and the growth of in vivo mouse xenografts.Importantly,significantly elevated levels of pre-rRNA were observed in clinical AML patients who possessed a mutated version of PHF6.The specific rDNA transcription inhibitor CX5461 significantly reduced the resistance of U937 AML cells deficient in PHF6 to cytarabine,the drug that is most commonly used to treat AML.Collectively,we revealed a novel molecular mechanism by which PHF6 recruits methyltransferase SUV39H1 to the nucleolar region in leukemia and provided a potential therapeutic target for PHF6-mutant leukemia. 展开更多
关键词 PhF6 suv39h1 AML rDNA transcription EPIgeneTIC CX5461 METhYLTRANSFERASE LEUKEMIA
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重组MBP-SUV39H1在大肠杆菌中表达与纯化 被引量:2
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作者 李剑 李丕龙 《生物技术》 CAS 2019年第1期11-15,22,共6页
[目的]在大肠杆菌中获得具有甲基转移酶活性的重组MBP-SUV39H1蛋白。[方法]通过在大肠杆菌中同时表达异染色质蛋白1(HP1)与重组MBP-SUV39H1蛋白的方法,实现了MBP-SUV39H1的表达,采用his亲和纯化与分子筛Superdex200(SD200)两步分离纯化... [目的]在大肠杆菌中获得具有甲基转移酶活性的重组MBP-SUV39H1蛋白。[方法]通过在大肠杆菌中同时表达异染色质蛋白1(HP1)与重组MBP-SUV39H1蛋白的方法,实现了MBP-SUV39H1的表达,采用his亲和纯化与分子筛Superdex200(SD200)两步分离纯化方案,并利用质谱和ELISA检测MBP-SUV39H1的甲基转移酶活性。[结果]利用大肠杆菌成功表达了MBP-SUV39H1融合蛋白,经纯化后目的条带单一,并具有良好的甲基转移酶活性。[结论]纯化的具有甲基转移酶活性的MBP-SUV39H1可用于抑制剂筛选等后续研究。 展开更多
关键词 suv39h1 hP1 原核共同表达 蛋白质纯化 活性测定
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Suv39h1基因RNA干扰慢病毒载体构建与验证
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作者 罗驰恒 沈艺琳 +2 位作者 樊馨竹 何太平 高羽亭 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2021年第5期495-501,共7页
目的 构建色斑3-9抑制因子同源物1(Suv39h1)的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,通过转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)验证其干扰效果。方法 根据Suv39h1的基因序列和短发夹RNA序列设计原则,设计合成构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建KD1、KD2、KD3 3种... 目的 构建色斑3-9抑制因子同源物1(Suv39h1)的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,通过转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)验证其干扰效果。方法 根据Suv39h1的基因序列和短发夹RNA序列设计原则,设计合成构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建KD1、KD2、KD3 3种不同慢病毒敲低靶点的LV-Suv39h1-RNAi重组质粒。经酶切及测序正确后,将包装好的3种Suv39h1基因低表达慢病毒载体转染对数生长期的大鼠BMSCs,设为KD1、KD2、KD3转染组,并设转染阴性对照病毒的对照组。转染72 h后,鉴定转染效率,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测4组细胞中Suv39h1的mRNA相对表达水平。结果 测序结果表明成功构建3种LV-Suv39h1-RNAi重组质粒。慢病毒载体转染效率鉴定结果显示:当感染复数为20时,3种慢病毒载体转染后的BMSCs均有80.00%以上表达绿色荧光;表明慢病毒构建成功,且转染效率高。qPCR检测结果显示:KD1、KD2、KD3转染组BMSCs中Suv39h1 mRNA相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05),KD1和KD3转染组BMSCs中Suv39h1 mRNA相对表达水平均低于KD2转染组(P值均<0.05);但KD1与KD3转染组BMSCs中Suv39h1 mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 成功构建Suv39h1基因低表达慢病毒载体;该载体可在大鼠BMSCs中表达,为研究Suv39h1基因在急性髓系白血病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 suv39h1 骨髓间充质干细胞 慢病毒载体 转染 构建 验证 大鼠
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H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响
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作者 田钗 张彩玉 +4 位作者 杨婷 王婷 黄时海 石德顺 李湘萍 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期68-74,共7页
H3K9的异常甲基化被认为是影响胚胎发育障碍的主要表观遗传修饰之一.毛壳素是H3K9me3的特异性抑制剂,能抑制其甲基转移酶SUV39H1/2和G9A的活性,下调H3K9me3水平.本实验通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛壳素,探究调控H3K9me3对猪卵... H3K9的异常甲基化被认为是影响胚胎发育障碍的主要表观遗传修饰之一.毛壳素是H3K9me3的特异性抑制剂,能抑制其甲基转移酶SUV39H1/2和G9A的活性,下调H3K9me3水平.本实验通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛壳素,探究调控H3K9me3对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响.在0~22 h用不同浓度毛壳素(0 nmol/L,2 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L)处理猪卵母细胞,与未处理组相比,发现2 nmol/L毛壳素可显著提高卵母细胞的第一极体排出率(81.5%VS 72.62%),孤雌胚胎4-细胞率(74.43%VS 68.69%)和囊胚率(40.43%VS 27.48%)(p<0.05).qRT-PCR结果表明,与未处理组相比,2 nmol/L毛壳素显著降低卵母细胞中SUV39H1/2和G9A的表达,显著提高囊胚中Nanog,Oct4,CDX2的表达(p<0.05).免疫荧光分析发现,与未处理组相比,2 nmol/L毛壳素显著降低囊胚中H3K9me3的表达(p<0.05),H3K9me3在GV期卵母细胞中有表达,在MI,MII期未检测到表达.在0~44 h用不同浓度毛壳素(0 nmol/L,2 nmol/L,5 nmol/L,10 nmol/L)处理猪卵母细胞,未处理组与各处理组的卵裂率、4-细胞率、囊胚率及囊胚细胞总数均无差异不具有统计学意义(p>0.05).5 nmol/L处理组的第一极体排出率显著提高(87.39%VS 71.95%,p<0.05).以上结果表明,毛壳素可通过降低卵母细胞中SUV39H1/2和G9A的表达,上调囊胚中多能性基因Nanog,Oct4,CDX2的表达,调控H3K9me3的水平,从而促进猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育. 展开更多
关键词 suv39h1/2 h3K9me3 胚胎发育 卵母细胞成熟
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异紫堇碱对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用
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作者 章涵 赵玉霞 +1 位作者 杨惠然 董雪 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1120-1125,共6页
目的探讨异紫堇碱对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法将A549细胞分为对照组,异紫堇碱低、中、高剂量组,miR-NC组,miR-1296-5p组,anti-miR-NC组,anti-miR-1296-5p组,异紫堇碱+anti-miR-NC组,异紫堇碱+anti-miR-1296... 目的探讨异紫堇碱对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法将A549细胞分为对照组,异紫堇碱低、中、高剂量组,miR-NC组,miR-1296-5p组,anti-miR-NC组,anti-miR-1296-5p组,异紫堇碱+anti-miR-NC组,异紫堇碱+anti-miR-1296-5p组。MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,RT-qPCR法检测miR-1296-5p和花斑抑制因子同源物1(SUV39H1)mRNA表达,Western blot法检测相关蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-1296-5p和SUV39H1的靶向关系。结果不同剂量异紫堇碱处理A549细胞后,细胞增殖抑制率升高,迁移、侵袭细胞数降低,miR-1296-5p表达升高,SUV39H1 mRNA和蛋白表达降低,并呈剂量依赖性(P<0.05)。miR-1296-5p靶向调控SUV39H1,过表达miR-1296-5p可抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论异紫堇碱可能通过调控miR-1296-5p/SUV39H1抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 异紫堇碱 肺癌 增殖 迁移 侵袭 miR-1296-5p suv39h1
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毛壳素对猪核移植胚胎体外发育潜能的影响研究 被引量:2
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作者 王婷 李海艳 +4 位作者 刘晨 孙乐 杨婷 石德顺 李湘萍 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期792-797,共6页
为了解H3K9三甲基化表达水平对德保猪核移植胚胎发育潜能的影响,本试验使用毛壳素处理德保猪胎儿成纤维细胞,利用体细胞核移植技术观察猪核移植胚胎的体外发育和相关基因mRNA表达情况。结果显示,不同浓度毛壳素处理(20、30、50 nmol/L)... 为了解H3K9三甲基化表达水平对德保猪核移植胚胎发育潜能的影响,本试验使用毛壳素处理德保猪胎儿成纤维细胞,利用体细胞核移植技术观察猪核移植胚胎的体外发育和相关基因mRNA表达情况。结果显示,不同浓度毛壳素处理(20、30、50 nmol/L)德保猪成纤维细胞24 h时,20 nmol/L处理组的细胞生长曲线与未处理组相似,呈“S”型。实时定量PCR检测结果显示,20 nmol/L和30 nmol/L毛壳素处理均会显著降低SUV39H1/2和G9a在成纤维细胞中的表达(P<0.05)。核移植胚胎体外发育结果显示,与未处理组相比,20 nmol/L处理可显著提高核移植胚胎的4-细胞发育率和囊胚发育率(P<0.05);30 nmol/L处理的卵裂率、4-细胞发育率和囊胚发育率显著降低(P<0.05)。实时定量PCR检测结果显示,与未处理组相比,20 nmol/L处理可显著降低SUV39H1/2和G9a在2-细胞、4-细胞和8-细胞期核移植胚胎中的表达,显著提高2-细胞、4-细胞和核移植胚胎中eIF3A和TFIIA、囊胚中Nanog和Oct-4基因的表达(P<0.05)。研究结果表明:适宜浓度的毛壳素处理可降低德保猪核移植胚胎中H3K9me3的表达,提高核移植早期胚胎的发育潜能。 展开更多
关键词 毛壳素 suv39h1/2 h3K9me3 胚胎发育
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