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EXPRESSION OF SV40 Tag AND FORMATION Tag-p53 AND Tag-Rb COMPLEXES IN CHINESE BRAIN TUMORS
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作者 步星耀 章翔 +3 位作者 甄海宁 梁景文 刘先珍 易声禹 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第1期18-21,共4页
Objective: To investigate the expression of SV40 Tag and formation of Tag-p53 and Tag-Rb complexes in Chinese brain tumors. Methods: SV40 large tumor antigen (Tag) were investigated by immunoprecipitation, silver stai... Objective: To investigate the expression of SV40 Tag and formation of Tag-p53 and Tag-Rb complexes in Chinese brain tumors. Methods: SV40 large tumor antigen (Tag) were investigated by immunoprecipitation, silver staining and Western blot in 65 cases of Chinese brain tumors and 8 cases of normal brain tissues. Tag-p53 and Tag-Rb complexes were screened by the same way in 20 and 15 Tag positive tumor tissues respectively. Results: Tag was found in all of 8 ependymomas and 2 choroid plexus papillomas, 90% (9/10) of pituitary adenomas, 73% (11/15) of astrocytomas, 70% (7/10) of meningiomas, 50% (4/8) of glioblastoma multiform, 33% (2/6) of medulloblastomas, 5 oligodendrogliomas, 1 pineocytoma and 8 normal brain tissues were negative for Tag. Tag-p53 complex was detected in all of 20 Tag positive tumors as well as Tag-Rb complex in all of 15 Tag positive tumors. Conclusion: SV40 Tag is not only expressed in human brain tumors, but also it can form specific complexes with tumor suppressors p53 and Rb. SV40 is correlated to human brain tumorigenesis. The inactivation of p53 and Rb due to the formation of Tag-p53 and Tag-Rb complexes is possibly an important mechanism in the etiopathogenesis of human brain tumors. 展开更多
关键词 Simian virus 40 (sv40) Large tumor antigen (tag) Brain tumor P53 RB
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SV40TAg真核表达载体的设计与构建 被引量:1
2
作者 王鹰 郝飞 +1 位作者 杨希川 邓军 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期104-106,共3页
目的设计并构建SV40TAg真核表达载体。方法采用重叠延伸拼接法从pUC19-SV40载体中克隆切除了内含子的SV40LT基因全长,在其5′端连上loxP位点,EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,同时采用重叠延伸拼接法从pEGFP-N1真核表达载体中克隆EGFP基因全长,并... 目的设计并构建SV40TAg真核表达载体。方法采用重叠延伸拼接法从pUC19-SV40载体中克隆切除了内含子的SV40LT基因全长,在其5′端连上loxP位点,EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,同时采用重叠延伸拼接法从pEGFP-N1真核表达载体中克隆EGFP基因全长,并在3′端连上loxP位点,两个酶切产物连接后定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,DNA序列分析鉴定重组质粒。结果SV40LT基因和两个loxP位点成功克隆至pEGFP-N1真核表达载体中。结论本实验构建的SV40LT重组质粒为利用SV40T抗原进行黑素细胞发育、分化,黑素生成以及黑素瘤发生等研究提供了新的分子工具。 展开更多
关键词 sv40tag 真核表达 载体构建
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Tet-on诱导表达c-myc和SV40Tag的转基因小鼠肿瘤模型 被引量:1
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作者 张成香 程言信 薛整风 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期276-281,I0006,共7页
目的研究Tet-on诱导表达c-myc和SV40Tag小鼠肿瘤模型的肿瘤发生和基因表达情况,探讨c-myc基因的作用。方法用pTRE2-c-myc单阳性转基因小鼠和Tet-on、pTRE2-SV40Tag双阳性转基因小鼠交配,后代检测得到Tet-onp、TRE2-SV40Tag、pTRE2-c-my... 目的研究Tet-on诱导表达c-myc和SV40Tag小鼠肿瘤模型的肿瘤发生和基因表达情况,探讨c-myc基因的作用。方法用pTRE2-c-myc单阳性转基因小鼠和Tet-on、pTRE2-SV40Tag双阳性转基因小鼠交配,后代检测得到Tet-onp、TRE2-SV40Tag、pTRE2-c-myc三阳性转基因小鼠,经强力霉素诱导一段时间以后,观察肿瘤的发生;通过RT-PCR、病理组织切片和磁共振等方法对肿瘤的发生部位和时相进行研究。结果Tet-on、pTRE2-SV40Tag、pTRE2-c-myc三阳性转基因小鼠①经诱导后发生肿瘤,且发瘤率和发瘤时间高于和短于Tet-on、pTRE2-SV40Tag双阳性转基因小鼠;②c-myc和SV40Tag基因在表达部位上有所不同。结论c-myc和SV40Tag基因同时表达与SV40Tag基因单独表达时相比,肿瘤发生明显增强,提示c-myc基因与肿瘤的发生有着密切关系。 展开更多
关键词 TET-ON 转基因小鼠 C-MYC sv40tag
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Gene expression analysis of pancreatic cystic neoplasm in SV40Tag transgenic mice model
4
作者 Jie Feng Qiang Sun +4 位作者 Cheng Gao Juan Dong Xiao-Luan Wei Hua Xing Hou-Da Li 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第15期2218-2222,共5页
AIM: To study the gene expression changes in pancreatic cystic neoplasm in SV40Tag transgenic mice model and to provide information about the prevention, clinical diagnosis and therapy of pancreatic cancer. METHODS:... AIM: To study the gene expression changes in pancreatic cystic neoplasm in SV40Tag transgenic mice model and to provide information about the prevention, clinical diagnosis and therapy of pancreatic cancer. METHODS: Using the pBC-SV40Tag transgenic mice model of pancreatic cystic neoplasm, we studied the gene expression changes by applying high-density microarrays. Validation of part gene expression profiling data was performed using real-time PCR.RESULTS: By using high-density oligonucleotide microarray, of 14113 genes, 453 were increased and 760 decreased in pancreatic cystic neoplasm, including oncogenes, cell-cycle-related genes, signal transduction-related genes, skeleton-related genes and metabolism-related genes. Among these, we confirmed the changes in Igf, Shh and Wnt signal pathways with real-time PCR. The results of real-time PCR showed similar expression changes in gene chip.CONCLUSION: all the altered expression genes are associated with cell cycle, DNA damage and repair, signal pathway, and metabolism. SV40Tag may cooperate with several proteins in promoting tumorigenesis. 展开更多
关键词 sv40tag Pancreatic cystic neoplasm cDNA microarray
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猿病毒40大T抗原基因(SV_(40)Tag)肝细胞移植治疗手术介导的急性肝衰竭的实验研究 被引量:1
5
作者 周少波 张阳德 +3 位作者 范立侨 陈伟 刘勤 郭妍 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期1-2,共2页
目的:研究带猿病毒 40大T抗原 (SV4 0 Tag)基因肝细胞移植对手术介导的ALF(Acuteliverfailure)大鼠肝功能及生存率的影响。方法 :雄性Wistar大鼠切除肝脏 90 % ,然后在脾实质内移植普通肝细胞和SV4 0 Tag(Simianvirus 40largeTantigeng... 目的:研究带猿病毒 40大T抗原 (SV4 0 Tag)基因肝细胞移植对手术介导的ALF(Acuteliverfailure)大鼠肝功能及生存率的影响。方法 :雄性Wistar大鼠切除肝脏 90 % ,然后在脾实质内移植普通肝细胞和SV4 0 Tag(Simianvirus 40largeTantigengene)肝细胞 ,观察其肝功能指标及生存率情况。结果 :普通肝细胞移植和SV4 0 Tag细胞移植组肝功能指标及生存率均好于ALF组 ,而SV4 0 Tag肝细胞移植组生存率又高于普通肝细胞移植组。结论 :SV4 0 Tag肝细胞移植及普通肝细胞移植均可改善ALF大鼠的肝功能指标及生存率 ,而SV4 0Tag组长期生存率高于普通肝细胞移植组。 展开更多
关键词 sv40tag 肝细胞 移植 急性肝功能衰竭
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重组SV40大T抗原慢病毒表达载体的构建 被引量:2
6
作者 李培杰 赵国强 《肿瘤基础与临床》 2008年第5期384-387,共4页
目的构建含有重组SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,转染真核细胞Eca-9706并检测SV40大T抗原基因在真核细胞内的表达。方法以PCR方法从含有SV40大T抗原基因的质粒上扩增出SV40大T抗原基因作为靶基因;将其连接至pGEM-TEasy... 目的构建含有重组SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,转染真核细胞Eca-9706并检测SV40大T抗原基因在真核细胞内的表达。方法以PCR方法从含有SV40大T抗原基因的质粒上扩增出SV40大T抗原基因作为靶基因;将其连接至pGEM-TEasy载体上,并对靶基因进行DNA测序确认;再将靶基因与慢病毒表达载体pLentiGFP重组构建成为pLentiGFP-Tag;以脂质体介导转染真核细胞Eca-9706,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR检测SV40大T抗原基因在细胞内的表达水平。结果成功克隆SV40大T抗原基因,经由DNA测序确认;成功筛选出含SV40大T抗原基因正插子的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag;转染真核细胞Eca-9706后48 h,观察到绿色荧光的广泛表达并检测出宿主细胞内高效表达的SV40大T抗原mRNA。结论成功构建含SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,并观察到SV40大T抗原在真核细胞中的成功表达。 展开更多
关键词 sv40大T抗原 慢病毒载体 细胞永生化
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人脑肿瘤中SV40大T抗原与pRb形成特异性复合物 被引量:1
7
作者 甄海宁 章翔 +3 位作者 步星耀 黄文晋 张志文 肖华胜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期409-411,共3页
目的:探讨 S V40 早期基因编码产物大 T 抗原( Tag) 表达及与抑癌蛋白p Rb 的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法:采用免疫共沉淀及 Western 印迹法检测43 例人脑肿瘤组织及5 例正常人脑组织中 Tag... 目的:探讨 S V40 早期基因编码产物大 T 抗原( Tag) 表达及与抑癌蛋白p Rb 的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法:采用免疫共沉淀及 Western 印迹法检测43 例人脑肿瘤组织及5 例正常人脑组织中 Tag 的表达,并对15 例 Tag 阳性瘤组织检测 Tag - p Rb 复合物的存在。结果: Tag 在5 例室管膜瘤及2 例脉络丛乳头状瘤中全部表达,垂体腺瘤(5/6) 、星形胶质细胞瘤(7/10) 、脑膜瘤(4/6) 、多形性胶质母细胞瘤(2/5) 及髓母细胞瘤(1/5) 均有 Tag 的表达; 3 例少枝胶质细胞瘤、1 例松果体瘤及5 例正常人脑组织无 Tag 表达。15 例 Tag 阳性瘤组织中均发现 Tag 与p Rb 形成特异性复合物。结论:在人脑肿瘤组织中 Tag 广泛表达, Tag 可与p Rb 形成特异性复合物, Tagp Rb特异性复合物的形成导致p Rb 失活,可能是人脑肿瘤发生发展的一个重要机理。 展开更多
关键词 脑肿瘤 sv40 大T抗原 抑癌蛋白 PRB
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人脑胶质组织中SV40大T抗原表达及p53形成特异性复合物
8
作者 步星耀 赵红卫 +3 位作者 于耀宇 连建敏 章翔 张永福 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期374-376,共3页
目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑胶质瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 89例人脑胶质瘤组织和 11例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对Tag表达阳性瘤组织进行免... 目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑胶质瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫组织化学方法检测 89例人脑胶质瘤组织和 11例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对Tag表达阳性瘤组织进行免疫共沉淀和Westernblot检测Tag p5 3复合物的存在。结果  89例人脑胶质瘤组织Tag表达阳性 33例 (阳性率 37 1% ) ,Tag表达水平与胶质瘤病理分级呈显著正相关 (pearson列联系数 =0 72 ,P <0 0 1) ;33例Tag表达阳性瘤组织中均发现Tag与p5 3形成特异性复合物。 11例正常人脑组织Tag表达全部阴性。结论 SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关 ,Tag可能是SV40在胶质瘤发生发展中起作用的重要因素 ;Tag与p5 3可形成特异性复合物 ,Tag p5 3特异性复合物的形成导致p5 3失活 ,可能是人脑胶质癌发生发展的一个重要机理。 展开更多
关键词 胶胶质瘤 sv40 大T抗原 P53 肿瘤抑制基因
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SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达
9
作者 甄海宁 章翔 +4 位作者 张志文 黄文晋 张萍 梁景文 刘先珍 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第2期135-137,共3页
目的 探讨 SV40早期区域基因编码产物大 T抗原(Tag)的表达及与抑癌蛋白 p5 3,p Rb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义 .方法 采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法检测 6 5例人脑肿瘤及 8例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例... 目的 探讨 SV40早期区域基因编码产物大 T抗原(Tag)的表达及与抑癌蛋白 p5 3,p Rb的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义 .方法 采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法检测 6 5例人脑肿瘤及 8例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例和 15例 Tag阳性瘤组织分别检测Tag- p5 3和 Tag- p Rb复合物的形成 .结果  SV40 Tag在人脑肿瘤中广泛表达 ,阳性率为 6 6 % (4 3/ 6 5 ) ,而 8例正常人脑组织均无 Tag表达 ,二者差异显著 (P<0 .0 5 ) ;分别检测 18例和 15例 Tag阳性瘤组织 ,均发现 Tag可与 p5 3,p Rb形成特异性复合物 .结论  SV40 Tag的表达与人脑肿瘤的发生有一定关系 ;SV40 Tag与 p5 3,p Rb形成特异性复合物并导致其失活 ,可能是 SV40致人脑肿瘤发生的一个重要机制 . 展开更多
关键词 sv40 大T抗原 脑肿瘤 P53 PRB 病因
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An experimental study on the expression of SV40 large tumor antigen in human brain tumors
10
作者 章翔 甄海宁 +5 位作者 李安民 张志文 黄文晋 张萍 梁景文 刘先珍 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2000年第1期1-6,共6页
Objective: To study the role of SV40 early region gene coding product large tumor antigen(Tag) expression and the interaction between Tag and tumor suppressors p53 and pRb in human brain tumorigenesis. Methods: Tag wa... Objective: To study the role of SV40 early region gene coding product large tumor antigen(Tag) expression and the interaction between Tag and tumor suppressors p53 and pRb in human brain tumorigenesis. Methods: Tag was investigated by immunoprecipitation followed by silver staining and Western blot in 65 cases of human brain tumors and 8 cases of normal brain tissues. Tag-p53 and Tag-pRb complexes were screened by immunoprecipitation and Western blot in 18 and 15 Tag positive tumor tissues respectively. Results: SV40 Tag was expressed generally in human brain tumors, its positive rate was 66. 2% (43 /65). However, Eight normal brain tissues were all negative for Tag, there was significant difference between them(P < 0. 05). Tag-p53 complex was detected in all of 18 Tag positive tumors as well as Tag-pRb complex in all of 15 Tag positive tumors. Conclnsion: SV40 Tag expression is associated with human brain tumorigenesis. The inactivation of p53 and pRh due to the formation of Tag-p53 and Tag-pRb complexes is possibly an important mechanism in the etiopathogenesis of human brain tumors. 展开更多
关键词 simian virus 40 (sv40) large TUMOR ANTIGEN (tag) brain TUMOR p53 PRB TUMOR SUPPRESSOR
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永生化人前软骨干细胞株的构建 被引量:1
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作者 尹德龙 陈安民 +2 位作者 郭风劲 王俊芳 程浩 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期223-226,共4页
背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus40large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。目的:以SV40Tag... 背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus40large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一。目的:以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株。方法:采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞。利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照。阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线。以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达。结果与结论:贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别。传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P<0.01)。与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P<0.01)。第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性,成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560bp处有一特异形扩增条带,未转染的原代细胞未见条带。提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株。 展开更多
关键词 人前软骨干细胞 永生化 sv40tag 软骨组织工程
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Generation and characterization of a transgenic mouse model for pancreatic cancer 被引量:3
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作者 Qiang sun Jie Feng +6 位作者 Xiao-Luan Wei Rong Zhang Su-Zhen Dong Qian Shen Juan Dong Hou-Da Li Ying-He Hu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2006年第17期2785-2788,共4页
AIM: To generate a SV40Tag transgenic tumor animal model and to study the mechanism underlying tumorigenesis. METHODS: A mammary gland expression vector containing SV40Tag DNA was generated. Transgene fragments were... AIM: To generate a SV40Tag transgenic tumor animal model and to study the mechanism underlying tumorigenesis. METHODS: A mammary gland expression vector containing SV40Tag DNA was generated. Transgene fragments were microinjeted into fertilized eggs of FVB mice. The genetically manipulated embryos were transferred into the oviducts of pseudo-pregnant female mice. PCR and Northern blot analysis were used for genotype analysis of F1 and F2 mice. Transgene expression was detected by RT-PCR and immunohistochemistry. RESULTS: SV40Tag gene was detected in two lines of transgenic mice. One of them delivered the transgene to F1 and a tumor was found in the pancreas of these mice. RT-PCR and immunohistochemistry showed that SV40Tag gene was expressed in the tumor. Pathological characterization of the transgenic mice demonstrated that the tumor belonged to pancreatic cystic neoplasm. CONCLUSION: SV40Tag transgenic mouse model can be successfully established. The transgenic mice develop a pancreatic tumor, which can be used for investigation of the molecular mechanism of tumorigenesis in vivo. 展开更多
关键词 sv40tag Transgenic mice Animal model Pancreatic neoplasms
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Deregulation of c-myc and SV40Tag causing brain tumor in mice
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作者 wu Hong ZHU Hong +1 位作者 ZHANG ChengXiang LI HouDa 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第24期3355-3362,共8页
Deregulated expressions of both c-myc and simian virus 40 large T antigen (SV40Tag) are consistent features of lots of tumors. To investigate whether the expression of c-myc and SV40Tag in mouse might help develop a m... Deregulated expressions of both c-myc and simian virus 40 large T antigen (SV40Tag) are consistent features of lots of tumors. To investigate whether the expression of c-myc and SV40Tag in mouse might help develop a model of human tumor, we generated c-myc transgenics by inserting human c-myc gene into pTRE2 of Tet-On system. We obtained conditional expression of SV40Tag transgenics by the Tet-On system from Yangzhou University. Crossing the c-myc transgenic mouse with the SV40Tag transgenic mice to generate bitransgenics we got double-transgenic mice expressing c-myc and SV40Tag by the Tet-On system. After being treated with doxycycline continuously, single-transgenic SV40Tag mice developed brain tumor infrequently (3 of 84, 3.6%) with a long onset (185 d on average). In contrast, double-transgenic c-myc/SV40Tag mice developed brain tumor with a short onset (96 days on average) and a 41% brain tumor incidence rate (7 of 17, 41%). This tumor was assumed to be me- dulloblastoma. Our experiments suggest that deregulated expression of c-myc and SV40Tag in brain might generate a mouse model of human brain tumor that recapitulates some features of human medulloblastoma. 展开更多
关键词 C-MYC sv40tag 脑瘤 转基因 成髓细胞瘤
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永生化人肝星状细胞株WM07的建立
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作者 郭津生 王满 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期893-898,共6页
目的以慢病毒载体介导猿猴病毒40(simian virus 40,SV40)大肿瘤抗原(large tumor antigen,TAg)转染原代人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)获得永生化HSC株。方法以含SV40 TAg cDNA序列的SV40tsA58质粒为模板,PCR获取全长SV40 TA... 目的以慢病毒载体介导猿猴病毒40(simian virus 40,SV40)大肿瘤抗原(large tumor antigen,TAg)转染原代人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)获得永生化HSC株。方法以含SV40 TAg cDNA序列的SV40tsA58质粒为模板,PCR获取全长SV40 TAg序列,经TOPO克隆进入pENTR^(TM)TOPO~?载体,PCR鉴定获得pENTR-SV40 TAg Entrez质粒,再经LR重组反应将SV40 TAg cDNA克隆到目标慢病毒载体pLenti4/V5-DEST,PCR鉴定pLenti4/V5-GW/SV40 TAg质粒,进一步用该质粒转染工程细胞293FT进行假病毒包装,用含包装病毒的细胞培养上清液转染原代人HSC,经博来霉素筛选获得稳定表达SV40 TAg的人HSC株(命名为WM07),并对细胞进行SV40 TAg及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达的检测和鉴定。结果对pENTR-SV40 TAg Entrez质粒及pLenti4/V5-GW/SV40 TAg慢病毒表达质粒进行PCR测序,结果证实所构建的质粒含ATG转录起始位点及SV40 TAg cDNA序列。对经过转染、筛选获得的WM07行免疫荧光染色,结果显示SV40 TAg在细胞核表达和定位,细胞质内均表达活化的HSC标志物α-SMA。结论 pLenti4/V5-GW/SV40 TAg质粒构建成功。经质粒转染,获得永生化HSC株WM07,可稳定传代并用于肝纤维化研究。 展开更多
关键词 猿猴病毒40(sv40) 大肿瘤抗原(tag) 慢病毒载体 细胞永生 人肝星状细胞(HSC) WM07
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SV40大T抗原在人脑肿瘤中与p53形成特异性复合物 被引量:1
15
作者 甄海宁 章翔 +7 位作者 步星耀 黄文晋 张萍 梁景文 王西玲 陈镔复 张志文 易声禹 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期73-76,共4页
目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫共沉淀及Western印迹法检测 43例人脑肿瘤组织及 5例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例Tag阳性瘤组织检... 目的 探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法 采用免疫共沉淀及Western印迹法检测 43例人脑肿瘤组织及 5例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例Tag阳性瘤组织检测Tag p5 3复合物的存在。结果 Tag在 5例室管膜瘤及 2例脉络丛乳头状瘤中全部表达 ,垂体腺瘤 (5 / 6 )、星形胶质细胞瘤 (7/10 )、脑膜瘤 (4 / 6 )、多形性胶质母细胞瘤 (3/ 5 )及髓母细胞瘤 (2 / 5 )均有Tag的表达 ,3例少枝胶质细胞瘤、1例松果体瘤及 5例正常人脑组织无Tag表达 ;检测 18例Tag阳性瘤组织均发现Tag与 p5 3形成特异性复合物。结论 在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达 ,Tag可与p5 3形成特异性复合物 ,Tag p5 3特异性复合物的形成导致 p5 3失活 。 展开更多
关键词 sv40病毒 T抗原 抑癌蛋白P53 脑肿瘤
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猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建 被引量:17
16
作者 高峰 田玉科 +2 位作者 杨辉 安珂 张传汉 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期597-600,共4页
目的建立猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)永生化大鼠神经前体细胞株,为细胞移植治疗和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代培养的新生大鼠神经前体细胞,经嘌呤霉... 目的建立猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)永生化大鼠神经前体细胞株,为细胞移植治疗和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代培养的新生大鼠神经前体细胞,经嘌呤霉素筛选,阳性克隆扩大培养并连续传代。应用巢蛋白抗体进行细胞鉴定,5%胎牛血清诱导细胞分化后,应用免疫细胞化学法检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern印迹杂交和免疫细胞化学法检测SV40Tag在转染细胞中的表达。结果转染细胞经筛选培养后获得1 个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示细胞的巢蛋白和微管相关蛋白2染色为阳性,增殖能力较强。5%胎牛血清可诱导转染细胞分化为微管相关蛋白2阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。Southern印迹杂交结果显示转染细胞基因组中存在SV40Tag cDNA,并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达。转染细胞经扩大培养,命名为永生化神经前体细胞。贴壁培养的神经前体细胞,群体倍增时间为(22.9±2.7)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论成功地构建了SV40Tag永生化的大鼠神经前体细胞株。 展开更多
关键词 猴病毒40 抗原 多瘤病毒转化 干细胞 永生化神经前体细胞 基因永生化 新生大鼠 细胞株 大T抗原 sv40tag 病毒
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