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SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达
1
作者
刘定燮
周晓巍
黄培堂
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期79-83,共5页
为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代...
为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t PA表达水平的变化 .在经选择培养 2 8d的COS7细胞库中 ,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在 (30 0拷贝 细胞 ) ,t PA的表达水平为 1 1μg d(10 6细胞 ) .在随后 3个月的动态观察中 ,随着细胞传代 ,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减 ,但在第 1个月内可保持在 1μg d(10 6细胞 )以上 .基于SV4 0载体 COS7稳定表达系统无需筛选克隆 ,在稳定的抗性细胞库形成后的 1个月内可能保持目的基因的高水平表达 ,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验 .
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关键词
sv40载体
COS7细胞
复制
外源基因
表达
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职称材料
题名
SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达
1
作者
刘定燮
周晓巍
黄培堂
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期79-83,共5页
基金
中国博士后科研基金资助项目~~
文摘
为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t PA表达水平的变化 .在经选择培养 2 8d的COS7细胞库中 ,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在 (30 0拷贝 细胞 ) ,t PA的表达水平为 1 1μg d(10 6细胞 ) .在随后 3个月的动态观察中 ,随着细胞传代 ,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减 ,但在第 1个月内可保持在 1μg d(10 6细胞 )以上 .基于SV4 0载体 COS7稳定表达系统无需筛选克隆 ,在稳定的抗性细胞库形成后的 1个月内可能保持目的基因的高水平表达 ,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验 .
关键词
sv40载体
COS7细胞
复制
外源基因
表达
Keywords
COS7 cell, stable expression,
sv
40
vector, episomal DNA
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SV40载体在COS7细胞中的复制及外源基因的表达
刘定燮
周晓巍
黄培堂
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
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职称材料
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