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SV40-LT基因的原核表达及免疫原性检测
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作者 付玉志 李传峰 +3 位作者 陈宗艳 王超 陈铁桥 刘光清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期208-212,共5页
为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原... 为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原核表达产物,不仅具有较好的免疫原性,而且能够诱导试验兔产生较高的抗体水平(抗体效价为1∶6 400)。 展开更多
关键词 sv40-lt基因 原核表达 特异性抗体 ELISA
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MDCK过表达SV40-LT基因稳定细胞系的构建
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作者 刘文凯 田玲 +3 位作者 乔自林 王家敏 王明明 李铀 《甘肃畜牧兽医》 2021年第12期54-58,共5页
细胞永生化使细胞能够在保持遗传性状的同时无限增殖,细胞的体外永生化需要将HPV的E6和E7基因、SV40的LT基因或人端粒酶逆转录酶(hTERT)等导入目标内,而SV40-LT是建立永生化细胞最便捷的基因。本试验利用慢病毒感染方式将SV40-LT导入MDC... 细胞永生化使细胞能够在保持遗传性状的同时无限增殖,细胞的体外永生化需要将HPV的E6和E7基因、SV40的LT基因或人端粒酶逆转录酶(hTERT)等导入目标内,而SV40-LT是建立永生化细胞最便捷的基因。本试验利用慢病毒感染方式将SV40-LT导入MDCK细胞中,阳性筛选后经qPCR和免疫荧光实验均检测到SV40-LT的表达,成功建立了利用慢病毒方式导入SV40-LT的实验体系,为后续永生化细胞建系研究提供了技术依据。 展开更多
关键词 增殖 MDCK sv40-lt 细胞永生化
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SV40-LT基因使牙髓干细胞永生化的研究
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作者 陈冬雪 白喜龙 梁英民 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期189-193,共5页
目的:分离牙髓干细胞,用含有SV40-LT抗原的慢病毒感染牙髓干细胞以建立永生化细胞株并进行鉴定。方法:消化法获得牙髓干细胞;用慢病毒粒子HBLV-SV40LT-3*flag-PURO感染目的细胞,抗生素筛选出稳定传代的细胞株,并进行干性测定。结果:原... 目的:分离牙髓干细胞,用含有SV40-LT抗原的慢病毒感染牙髓干细胞以建立永生化细胞株并进行鉴定。方法:消化法获得牙髓干细胞;用慢病毒粒子HBLV-SV40LT-3*flag-PURO感染目的细胞,抗生素筛选出稳定传代的细胞株,并进行干性测定。结果:原代与永生化的牙髓干细胞(iDPSCs)在分化能力及表面标记物的检测无差异;Real-time PCR结果显示,感染组细胞中SV40-LT基因的转录水平显著提高;Western blot结果显示,实验组均可检测到标签蛋白Flag的表达。结论:含有SV40-LT基因片段的慢病毒可使人牙髓干细胞发生永生化,永生化后的细胞仍具有多向分化潜能。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 永生化 sv40-lt
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THE EXPRESSION OF INTRODUCED GENE REGULATED BY MAMMALIAN VIRUS SV40 PROMOTER IN FISH CELLS
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作者 沈孝宙 李辉 +3 位作者 邱黎明 张凌霄 劳为德 陈受宜 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1990年第23期1992-1994,共3页
For gene transfer in fish, the cellular or viral promoters derived from mammalian are probably the only choice to use for the time being. This is due to the fact that the promoter of homologous transcriptional regulat... For gene transfer in fish, the cellular or viral promoters derived from mammalian are probably the only choice to use for the time being. This is due to the fact that the promoter of homologous transcriptional regulatory sequences is absent in fish.In this study, the bacterial gene for chloramphenicol acetyltransferase (CAT) under the control of the early promoter from simian virus 40 (SV40)was used to transfect the cultured kidney cells of grass carp and efficient expression was obtained. It is suggested that the mammalian viral SV40 promoter can be used for the expression of the foreign gene in transgenic fish. 展开更多
关键词 sv40 early PROMOTER kidney CELLS of grass CARP CAT gene.
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大鼠Kupffer细胞分离、培养及永生化实现 被引量:3
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作者 毛德文 裴燕燕 王明刚 《大众科技》 2017年第12期35-37,共3页
枯否细胞(Kupffer Cells,KC)是肝脏免疫防御的第一道防线,其与多种肝脏疾病密切关联。Kupffer细胞分离纯化技术要求较高,且该细胞分化增殖能力极弱,成为开展大规模细胞实验的主要障碍。课题组简化了Kupffer细胞分离纯化步骤,构PDS152_p ... 枯否细胞(Kupffer Cells,KC)是肝脏免疫防御的第一道防线,其与多种肝脏疾病密切关联。Kupffer细胞分离纯化技术要求较高,且该细胞分化增殖能力极弱,成为开展大规模细胞实验的主要障碍。课题组简化了Kupffer细胞分离纯化步骤,构PDS152_p Lenti-GFP-IRES-SV40LT表达载体,包装形成慢病毒颗粒侵染Kupffer细胞,侵染后细胞生长速度变快,能多次传代,细胞状态稳定,巨噬细胞特异性标志F4/80呈阳性表达。将SV40LT片段导入Kupffer细胞可实现细胞永生化,且转染后的kupffer细胞仍维持巨噬细胞的功能特性。 展开更多
关键词 KUPFFER细胞 sv40-lt片段 永生化 特性
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鸡骨骼肌卫星细胞系的建立及分析 被引量:1
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作者 王燕星 张雨时 +7 位作者 姬海港 刘阳 牛玉芳 韩瑞丽 刘小军 田亚东 康相涛 李转见 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4972-4981,共10页
旨在通过慢病毒包装SV 40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20~30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织,采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组,每组3个重复,处理组选择SV 40-LT慢病毒转染48 h后,更换含1μg&... 旨在通过慢病毒包装SV 40-LT基因并转导PMSCs以构建鸡骨骼肌卫星细胞系。本研究采集20~30枚15胚龄健康AA鸡的胸部组织,采用混合酶消化法分离培养PMSCs。将细胞随机分为两组,每组3个重复,处理组选择SV 40-LT慢病毒转染48 h后,更换含1μg·mL^(-1)的嘌呤霉素筛选培养基于处理组和对照组(病毒不转染)。待对照组细胞全部死亡,对处理组细胞进行不断传代培养,最终获得鸡骨骼肌卫星细胞系。免疫荧光试验分析鸡骨骼肌卫星细胞标志基因PAX7的表达;采用CCK-8和细胞周期分析检测细胞增殖特性;血清依赖性和软琼脂分析检测其恶性转化情况;构建诱导分化模型检测其诱导分化能力。结果表明,PMSCs中有92%细胞PAX 7基因呈阳性,可用于后续研究。SV 40-LT基因在鸡骨骼肌卫星细胞系(IMSCs P12)中的表达是原代鸡骨骼肌卫星细胞的15倍,且连续传代至12代后,IMSCs P12与PMSCs均呈纤维样状。IMSCs P12具有更高的增殖活性且没有发生恶性转化,随后,对IMSCs P12进行诱导分化,在其增殖至70%到诱导分化1 d这一阶段,IMSCs P12与PMSCs的PAX 7基因表达下调,而MyoD和MyHC基因表达上调。结果提示,本研究通过转染SV 40-LT基因成功培养了鸡骨骼肌卫星细胞系,其具有与原代鸡骨骼肌卫星细胞相似的特性。该细胞系的建立为研究家禽骨骼肌相关的功能基因提供了新的平台,也为SV 40-LT基因在家禽细胞永生化的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 骨骼肌卫星细胞 sv 40-lt 细胞系 PAX 7
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