肉桂酰雷公藤内酯醇通过抑制核因子κB (NF-κB)通路下调小鼠肾小球系膜细胞IP-10表达并抑制其增殖

目的 探讨肉桂酰雷公藤内酯醇(T32)对γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)在SV40MES13小鼠肾小球系膜细胞表达及促增殖作用的影响。方法 采用(2~30)ng/mL T32和(1~500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共培养24 h,利用CCK-8法检测细胞生存率确定T32和IP-10最佳处理剂量;将对数生长期的SV40MES13细胞随机分为空白组、 1000 U/mLγ干扰素(IFN-γ)刺激组、 IFN-γ联合10μmol/L吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组和IFN-γ联合(2~20)ng/mL T32干预组。IFN-γ刺激24 h后,通过实时荧光定量PCR检测SV40MES13细胞IP-10 mRNA水平,ELISA检测SV40MES13细胞培养上清液IP-10分泌量;IFN-γ刺激20 min后,应用Western blot法检测SV40MES13细胞核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白核因子κB p65(NF-κB p65)、核因子κB抑制物α(IκBα)及其磷酸化蛋白p-NF-κB p65、 p-IκBα的表达。结果 IFN-γ刺激可促进SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达增加,与空白组相比,NF-κB p65、 IκBα蛋白的磷酸化水平明显增加。采用特异性通路抑制剂PDTC阻断NF-κB信号通路后,与IFN-γ刺激组相比,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、 IκBα蛋白磷酸化水平下降。与IFN-γ刺激组相比,经(2~20)ng/mL T32干预后,SV40MES13细胞IP-10 mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65、 IκBα蛋白磷酸化水平分别下降44.22%和48.59%。(1~500)ng/mL IP-10与SV40MES13细胞共同孵育24 h后,细胞生存率提高,IP-10剂量为10 ng/mL时细胞生存率为119.83%,随后进入平台期;经(4~20)ng/mL T32干预后,细胞生存率与10 ng/mL IP-10刺激组相比明显降低。结论 IFN-γ诱导SV40MES13细胞表达IP-10的作用可被肉桂酰雷公藤内酯醇通过阻断NF-κB信号通路而下调,并抑制IP-10的促增殖作用。

miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的探索miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响。方法首先将肾小球系膜细胞SV40-MES-13细胞分为2组:对照组和高糖组,用于分析高糖对SV40-MES-13细胞活性及miR-660-5p/P53表达的影响。然后将高糖处理过后的SV40-MES-13细胞分为4组:miR NC组、miR-660-5p mimic组、si NC组与si P53组。实时荧光定量PCR实验检测SV40-MES-13细胞中miR-660-5p和P53的表达水平;噻唑蓝试剂法(MTT)分析SV40-MES-13细胞的生长能力;原位末端标记法(TUNEL)以及流式细胞术分析SV40-MES-13细胞的凋亡率;Targetscan检索以及荧光素酶报告基因实验分析SV40-MES-13细胞中miR-660-5p与P53的靶向作用关系;蛋白质印迹分析P53蛋白的表达。结果与对照组比较,高糖处理后导致SV40-MES-13细胞增殖活性降低,凋亡率增加,miR-660-5p表达降低而P53表达增加。与miR-660-5p NC组比较,miR-660-5p mimic处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。与si NC组比较,si P53处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。miR-660-5p与P53存在结合域,且能抑制P53表达。结论高糖处理肾小球系膜细胞后,miR-660-5p表达水平降低,P53表达水平增加,上调肾小球系膜细胞的miR-660-5p的表达后,高糖处理后的肾小球系膜细胞增殖活性增加,凋亡率下降,并且miR-660-5p的这一作用与抑制P53的表达相关。