羟基喜树碱耐药结肠癌细胞株SW1116/HCPT肿瘤耐药相关基因的表达

目的分析结肠癌耐药株SW1116/HCPT(羟基喜树碱)肿瘤耐药相关基因的表达情况。方法对本所新近构建的结肠癌耐药株SW1116/HCPT的肿瘤药物耐受功能分类基因芯片的检测结果进行验证;以实时荧光定量-PCR法检测基因芯片中部分表达有改变的基因;以western blot法分析SW1116/HCPT耐药细胞株与原代细胞株间在p21和MRP2蛋白表达水平上的变化。结果p21WAF1/CIP1、MRP2(ABCC2)、BRCA2、CYP3A5等部分表达有改变基因的实时荧光定量-PCR鉴定结果与基因芯片结果基本一致;Western blot检测的p21WAF1/CIP1和MRP2(ABCC2)蛋白表达水平与其转录水平表达相吻合。结论基因芯片技术是一种大规模检测多种基因表达的有效方法,新建的结肠癌细胞耐药模型SW1116/HCPT中存在多类肿瘤耐药相关基因在转录水平和翻译水平的表达差异。

苦参碱诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡及机制探讨

目的观察苦参碱(Ma)诱导结肠癌SW1116细胞凋亡的作用,并探讨其机制。方法采用不同浓度的Ma处理SW1116细胞48h,并设正常对照组,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测Fas和Bax mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,不同浓度Ma处理的SW1116细胞抑制率、胞凋亡率显著升高(P均(0.01),Fas和Bax mRNA表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论Ma可诱导SW1116细胞凋亡,其作用机制可能与上调Fas和Bax mRNA表达有关。

莪术醇抑制人结肠癌SW1116细胞增殖及相关机制的研究

观察莪术醇对人结肠癌SW1116细胞生长及肿瘤细胞凋亡的影响,以探讨其可能的机制。用不同浓度的莪术醇处理SW1116细胞,MTT检测莪术醇对SW1116细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测Bcl-2、Bcl-XL的蛋白表达。莪术醇能以时间、剂量依赖性的关系抑制人结肠癌SW1116细胞的增殖,并诱导凋亡;莪术醇与SW1116细胞作用48h和72h后Caspase-3酶活性显著增强;同时,莪术醇处理SW1116细胞后,Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达下调。说明莪术醇可抑制人结肠癌SW1116的增殖,诱导其凋亡,机制可能与调节Caspase-3、Bcl-2/Bcl-XL表达水平有关。

氧化苦参碱诱导结肠癌细胞株SW1116凋亡的实验研究

目的:探讨氧化苦参碱(OM)抗肿瘤的作用机制,为OM在抗结肠癌方面的应用提供理论依据。方法:采用流式细胞仪检测不同浓度的OM对结肠癌细胞凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果:OM具有一定的诱导结肠癌细胞凋亡的作用,可使S期细胞数目减少,随着OM剂量的加大,结肠癌细胞凋亡率增高,与剂量呈正相关。随药物浓度及作用时间的变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高。结论:OM具有一定的抗结肠癌作用,其机制与抑制癌细胞的增殖及促进癌细胞的凋亡有关。

丁酸钠对人大肠癌细胞株SW1116动力学影响和超微结构改变的初步研究

用丁酸钠处理人大肠癌细胞株ＳＷ１１１６，观察其对瘤细胞增殖动力学影响及超微结构的改变。经丁酸钠（２ｍｍｏｌ／Ｌ，４ｍｍｏｌ／Ｌ）处理后的细胞用流式细胞仪检测可见Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比增加，增殖指数下降；将诱导后细胞种植裸鼠皮下，瘤块形成受到抑制；电镜观察诱导后细胞，超微结构呈良好分化改变。

D-氨基葡萄糖衍生物诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡的形态学变化

目的:研究D-葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌细胞SW1116凋亡时,其形态学的变化.方法:选用不同浓度的2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖与人结肠癌细胞SW1116共同孵育不同时间后,采用倒置相差显微镜,荧光显微镜、透射电子显微镜观察人结肠癌细胞SW1116的形态结构变化.结果:经2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖的不同浓度作用24～96h后,观察发现:人结肠癌细胞SW1116出现体积缩小,荧光染色增强,胞核或胞质中可见致密浓染的颗粒状黄绿色荧光染色.细胞染色质固缩,积聚在核膜边缘呈新月状,内质网疏松并与胞膜融合形成空泡,并呈一定的浓度、时间依赖性.结论:2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖在体外具有诱导人结肠癌细胞SW1116凋亡的作用.

Linomide对人大肠癌裸鼠肠壁原位移植SW1116肿瘤的抑制作用

目的 研究 L inomide对人大肠癌 SW1116裸鼠肠壁原位移植瘤的抑制及抗转移作用。方法 用肿瘤肠壁粘接原位接种新技术和脾切除的方法为肿瘤创造生长及转移的条件 ,经裸鼠体内筛选获得稳定模型 ,模型用于 L inom ide对 SW1116裸鼠肠壁原位移植瘤的抑制及抗转移作用的研究 ,设立丝裂霉素 (MMC)和不给药对照。结果 L inomide和 MMC对肠壁原位肿瘤的抑制率分别为 71.9%和 81.3% ,两种药物均抑制了肿瘤的转移 ,对照组的肿瘤肝转移率为 75 % (6 / 8)。结论 采用新的粘接接种技术和脾切除的方法 ,降低了受体的免疫力 ,不仅使模型稳定传代 ,而且还能产生自发转移 ,初步显示了此模型在研究转移机制及抗转移药物方面有一定的应用价值。

血管生成素-1对SW1116细胞的作用及其机制

目的探讨血管生成素-1(Angiopoietin-1,Ang-1)蛋白对无血清DMEM培养基培养的结肠癌细胞(SW 1116)存活率的影响及其与PI3-′k inase/Akt通路的关系。方法将不同浓度的Ang-1蛋白作用于SW 1116细胞,用MTT法检测细胞增殖,根据实验结果选定Ang-1蛋白的后续实验浓度,设计出SW 1116细胞增殖抑制模型,分别向该模型中加入Ang-1及LY294002,应用免疫印记法分析相关蛋白(Tie-2、PI3K、Akt)的变化。结果 Ang-1组与无血清DMEM培养基组比较,Tie-2、PI3K、Akt三种蛋白在SW 1116细胞中的表达均增强,但仅Tie-2的表达有显著差异(P<0.01),LY294002组三种蛋白的表达均减弱(P<0.01,P<0.05)。结论较低浓度(0.05 mg/L)的Ang-1蛋白在结肠癌细胞中即有抗凋亡作用,且随着浓度的增加抗凋亡作用逐渐加强,当高于0.2 mg/L时,作用逐渐减弱,其诱导凋亡的机制可能与Tie-2/PI3-′k inase/Akt调节的通路有关,应用该途径的抑制剂LY294002可抑制结肠癌细胞的生长,实现抗肿瘤作用。

白毛藤诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡作用及其机制研究

目的:研究白毛藤诱导人结肠癌细胞凋亡的作用及其机制。方法:荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导SW1116细胞凋亡的作用,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果:白毛藤具有诱导SW1116细胞凋亡的作用,并且上调Fas基因、降低Bcl-2基因的表达。结论:白毛藤促进SW1116细胞凋亡,其机制可能与激活Fas基因、抑制Bcl-2基因表达有关。

帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及安全性观察

目的观察帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及安全性。方法建立人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤模型。将24只BALB/C裸鼠随机分为对照组、帕瑞昔布组和5-Fu组。记录各组裸鼠的体重和瘤体积变化,用药30 d后取瘤及脾脏,计算脾脏指数、抑瘤率,检测血清ALT和BUN,并用透射电镜观察瘤组织的形态学变化。结果帕瑞昔布组未见明显的药物相关毒副反应。帕瑞昔布能抑制SW11 16细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。在干预前18 d,帕瑞昔布组的肿瘤抑制率逐渐增加,但随着药物干预时间的延长,抑制率却逐渐降低。结论裸鼠体内短期应用帕瑞昔布（15~18 d）是安全的,并能抑制SW1116细胞皮下移植瘤的生长。

化疗药对结直肠癌细胞株SW1116中DCC基因影响的实验研究

结直肠癌是我国较常见的严重危害人民健康的恶性肿瘤之一,世界范围的流行病学调查资料表明,在各类恶性肿瘤中,结直肠癌的发病率占第3位,仅次于胃癌和肺癌的第三位恶性肿瘤,结直肠癌已成为危害人们身体健康的严重疾病。

芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响

目的观察芹菜素对人结肠癌细胞SW1116及CIK细胞的作用,探讨芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响。方法不同浓度的芹菜素分别诱导人CIK细胞和结肠癌细胞SW1116细胞24、48、72 h,四甲基偶唑蓝(MTT)法检测上述两种细胞的生长。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对结肠癌SW1116细胞杀伤活性。结果体外培养10 d后,CIK细胞比例由3.12%增加到17.55%。与对照组比较,浓度1.17～4.7μmol/L芹菜素作用后的CIK细胞的增殖率显著提高(P<0.05),浓度37.5～600μmol/L的芹菜素对SW1116细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),三个时间段比较均无明显差异。浓度2.35～9.4μmol/L的芹菜素作用48 h后,CIK细胞对结肠癌SW1116细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。结论芹菜素在一定浓度范围内可促进CIK细胞的生长,明显提高CIK细胞对SW1116细胞的杀伤作用,且抑制结肠癌SW1116细胞的生长。

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌SWlll6凋亡的作用

目的:研究D-葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人结肠癌SWlll6细胞生长增殖的影响,进而探讨COPADG诱导SWlll6细胞凋亡的作用.方法:用不同浓度的COPADG处理SWlll6,采用MTT法测定其对SWlll6细胞生长增殖的抑制作用,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察其对SWlll6细胞诱导凋亡的效应.结果:COPADG能抑制SWlll6细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;COPADG能诱导结肠癌SWlll6细胞凋亡;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰.结论:COPADG在体外可显著诱导结肠癌SWlll6细胞凋亡.

周期蛋白E促进结直肠癌SW1116细胞增殖和侵袭

目的探究周期蛋白E高表达对结直肠癌SW1116细胞增殖和侵袭的影响。方法将SW116细胞分为周期蛋白E-过表达组、对照组与空载体组,免疫组化法检测各组细胞周期蛋白E的表达;实时定量PCR法检测周期蛋白E mRNA的表达;四甲基偶氮唑盐实验法(MTT)观察细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果与对照组与空载体组相比,周期蛋白E过表达组SW116细胞的周期蛋白E mRNA表达明显升高;在24h和48h时的细胞存活率明显升高;G_(0)/G_(1)期细胞比例明显升高,G_(2)/M期细胞比例明显降低;穿膜细胞数明显增加。结论周期蛋白E促进结直肠癌SW1116细胞的增殖与侵袭。

穿心莲内酯抑制人结肠癌SW1116细胞增殖及诱导细胞凋亡作用的研究

目的:观察穿心莲内酯对人结肠癌SW1116细胞生长及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨其可能的机制。方法:用不同浓度的穿心莲内酯处理SW1116细胞,MTT检测穿心莲内酯对SW1116细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测bax、Bcl-2的蛋白表达。结果:穿心莲内酯能够剂量依赖型的抑制人结肠癌SW1116细胞的增殖,并诱导凋亡;穿心莲内酯与SW1116细胞作用48小时后Caspase-3酶活性显著增强;同时,穿心莲内酯处理SW1116细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:穿心莲内酯可抑制人结肠癌SW1116的增殖,诱导其凋亡,机制可能与调节Caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平有关。

携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用

目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。

体内连续筛选法建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型

目的:通过在裸鼠体内进行SW1116结肠癌细胞株原位种植肝转移连续筛选,建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型系统,为研究结肠癌转移的分子机制提供实验模型。方法:将SW1116细胞株在裸鼠皮下连续5次传代后,取皮下种植瘤在裸鼠结肠进行原位种植,继而取肝脏转移灶进行下一代裸鼠结肠原位种植,经3次结肠原位种植肝转移筛选,建立大肠癌肝转移阶梯细胞模型。用免疫组化法验证种植瘤及转移灶的组织来源,并行同期体内外侵袭实验,检测经体内连续筛选出的癌细胞侵袭转移能力变化。结果:经5代皮下连续传代及3代结肠至肝的体内转移筛选,成功建立了第三代结肠癌肝转移筛选细胞系(CRCLM3)。裸鼠种植瘤及转移灶均表达人癌胚抗原,而同期体内外侵袭试验结果显示,经体内筛选得到的结肠癌细胞株转移能力逐渐加强。结论:经体内连续肝转移筛选所建立的结肠癌细胞系侵袭转移能力增强,而CRCLM3细胞系是研究结肠癌肝转移机制的理想细胞模型。

内皮抑素对结肠癌增殖和转移抑制效应的实验观察

目的研究内皮抑素对结肠癌增殖和转移的抑制作用,并探讨基质金属蛋白酶13(MMP13)对结肠癌血管生成的作用。方法采用人结肠癌细胞株SW1116完整组织块于裸小鼠原位种植,建立结肠癌转移裸小鼠模型。种植后第1周开始皮下注射内皮抑素,每天1次,剂量为0mg/kg(对照组)、5mg/kg(实验Ⅰ组)、10mg/kg(实验Ⅱ组)、20mg/kg(实验Ⅲ组),共用6周。种植后第7周处死动物,测量原位肿瘤体积、抑瘤率,检测MMP13、微血管密度(MVD),观察腹膜、肝脏及其它脏器转移情况。结果内皮抑素剂量为0、5、10和20mg/kg时,原位肿瘤体积分别为(1.42±0.45)、(0.54±0.38)、(0.31±0.28)、(0.22±0.16)cm3;抑瘤率分别为0、62.0%、78.2%、84.5%;MMP13分别为81.8%、58.3%、42.9%、21.4%;MVD分别为(11.20±3.9)、(6.10±2.6)、(2.40±1.6)、(1.22±0.4);腹膜转移率分别为81.8%、50.0%、28.5%、7.1%;肝脏转移率分别为63.6%、33.3%、14.3%、0。实验Ⅰ～Ⅲ组与对照组相比,组间结肠癌增殖与转移的抑制作用差异有显著性(P<0.05)。结论MMP13可能是结肠癌重要的促血管生成因素之一;内皮抑素通过抑制肿瘤血管生成,对裸小鼠结肠癌增殖和转移均有抑制作用。