羽扇豆醇对胰腺癌细胞株SW1990及γδT细胞生长的影响

目的:探讨羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990及γδT细胞生长的影响.方法:采用本实验室体外扩增人外周血γδT细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的羽扇豆醇在不同时间段对人γδT细胞和人胰腺癌细胞SW1990生长的影响.本实验分3组:空白对照组、溶剂对照组和实验组,时间段分24、48、72h组.结果:羽扇豆醇浓度在0.4-200μg/mL时羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990在24、48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).而24、48、72h3组比较差异无统计学意义.γδT细胞培养7d从扩增前的3.61%增加到80.2%,羽扇豆醇对γδT细胞在24、48、72h随浓度的增加先增值后抑制作用.24h与空白对照组和溶剂对照组比较差异无统计学意义.48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990有抑制作用,对γδT细胞随着浓度增加有先促进后抑制作用.

紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化

目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。

CEACAM6介导上皮间质转化增强胰腺癌细胞侵袭能力和耐药性的研究

目的:研究CEACAM6对胰腺癌细胞株SW1990侵袭能力和耐药性的影响,并探讨上皮间质转化(EMT)在其中的作用。方法:筛选及鉴定过表达CEACAM6的稳定转染SW1990-CEACAM6细胞株,通过定量PCR和Western blot方法检测SW1990细胞株中EMT相关表型标志物的改变。通过Transwell实验检测过表达CEACAM6对SW1990细胞株侵袭的影响,MTT法检测耐药指数(RI)。结果:定量PCR及Western blot验证过表达CEACAM6细胞株SW1990-CEACAM6成功建立,其倾向于向间质细胞转化:波形蛋白(Vimentin)表达明显上调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达下降。功能实验证实过表达CEACAM6具有促进SW1990胰腺癌细胞株侵袭作用,同时细胞株耐药性增强。结论:CEACAM6能够促进SW1990胰腺癌细胞株上皮间质转化,从而促进胰腺癌细胞的恶性转化。

载芦荟大黄素新型纳米微球体外抗胰腺癌细胞的实验研究

目的探讨新型的靶向性表皮生长因子受体(EGFR)壳聚糖芦荟大黄素纳米微球对人胰腺癌细胞SW1990细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)观察抗EGFR芦荟大黄素包埋的壳聚糖纳米微球在不同作用时间内对在体外培养的SW1990细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果芦荟大黄素能对胰腺癌细胞SW1990的增殖起到抑制作用(P<0.05),抗EGFR芦荟大黄素包埋的壳聚糖纳米微球可明显增强芦荟大黄素对人胰腺癌细胞SW1990生长的抑制作用(P<0.05),使细胞凋亡率升高达(40.56±1.24)%(P<0.05),在G0/G1期阻滞细胞增殖(P<0.05)。结论抗EGFR芦荟大黄素包埋的壳聚糖纳米微球对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用显著,可能为将来中药对胰腺癌的靶向性治疗提供新的研究方向。

刺参粘多糖对人胰腺癌细胞株SW1990增殖的抑制作用

刺参粘多糖（stichopus japonicus acid muco—polysaccharide，SJAMP）是从中国刺参体壁中提炼出来的一类多糖类物质。该物质成分恒定，结构简单，易于克服空间位阻，增加了对黏膜上皮的穿透能力，容易被吸收。初步研究证实，刺参粘多糖具有广谱的抗肿瘤活性，能抑制肝癌、宫颈癌等恶性肿瘤细胞的增殖，诱导细胞分化。本研究观察SJAMP对胰腺癌细胞SW1990增殖、凋亡的影响，探讨其可能机制。

吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中乳腺癌耐药蛋白基因表达的研究

现有大量文献报道乳腺癌耐药蛋白（ABCG2）参与多种肿瘤细胞多药耐药机制，但对于ABCG2与胰腺癌耐药方面报道较少。本实验旨在探讨胰腺癌中ABCG2与化疗耐药的关系。

白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞影响及机制探讨

目的观察中药白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响,并初步探讨可能机制。方法分离健康人外周血单个核细胞,细胞因子诱导培养NK细胞达实验要求;不同浓度(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5、25、50和100μg/mL)的白桦脂酸分别诱导NK细胞、SW1990胰腺癌细胞48h后,CCK8法检测白桦脂酸对NK细胞增殖的影响;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测白桦脂酸对SW1990胰腺癌细胞株增殖的影响;流式细胞术(flow cymetory,FCM)检测白桦脂酸作用48h后NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测白桦脂酸对NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响;蛋白质印迹法检测白桦脂酸对NK细胞表达磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,p-ERK1/2)的影响。结果培养10d的NK细胞比例达74.43%。与对照组比较,白桦脂酸在其浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5和25μg/mL时显著促进NK细胞增殖,F=129.476,P<0.01;并抑制胰腺癌细胞增殖,F=278.222,P<0.01。浓度为0.05、0.2、0.8和3.2μg/mL的白桦脂酸作用NK细胞48h后,与对照组比较均能促进NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤,F=36.451,P<0.05。与对照组比较,白桦脂酸在浓度为0.2和0.8μg/mL时不同程度促进NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达,P<0.05。与对照组比较,浓度为0.8、3.2和12.5μg/mL的白桦脂酸可促进NK细胞表达p-ERK1/2,F=83.708,P<0.05。结论白桦脂酸在一定的浓度范围内能够增强NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能通过促进NK细胞增殖,抑制胰腺癌细胞增殖,激活NK细胞内ERK信号通路,提高NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达。

MEG3对人胰腺癌细胞SW1990侵袭及运动能力的影响

母系表达基因3（maternally expressed gene3，MEG3）是小鼠母体印记基因Gt12的人类同系物，定位于染色体14q32．3，属于长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）。近年来研究发现lncRNA是调控基因表达、染色质重塑、转录、转录后加工等过程的重要分子，与多种肿瘤的发生密切相关。

沉默乳腺癌耐药蛋白基因影响胰腺癌SW1990细胞对吉西他滨的化疗敏感性的研究

胰腺癌是一种治疗效果及预后极差的消化道恶性肿瘤.吉西他滨（GEM）是临床上用于胰腺癌化疗的＂金标准＂.RNA干扰（RNAi）是双链RNA介导的转录后基因特异性沉默.前期研究结果表明,GEM能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随作用时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与GEM作用细胞后上调乳腺癌耐药基因ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）的表达有关。

MMI-166对人胰腺癌SW1990细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的观察MMI-166对人胰腺癌SWl990细胞及其移植瘤组织凋亡相关蛋白表达的影响，探讨其可能机制。方法应用人胰腺癌细胞株SWl990建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，按完全随机法将荷瘤裸鼠分为对照组和MMI-166组，分别给予口服生理盐水和MMI-166（200mg·kg^-1·d^-1），持续28d。采用TUNEL法和蛋白质印迹法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）及p53、c-Myc、Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase-1、Fas蛋白的表达。应用不同浓度（0、50、100μg／m1）MMI-166作用于人胰腺癌SWl990细胞24h，蛋白质印迹法检测c-Myc、Survivin的表达。结果MMI-166组移植瘤组织的AI为81．1±7．9，显著高于对照组的21．3±2．2（P：0．000）；c-Myc、Survivin的表达量分别为7715±2229、4594±1240，显著低于对照组的16870±2446、15208±1903（P值均为0．000）；p53、Bax、Bcl-2、Caspase-1、Fas的表达与对照组比较无显著变化。50、100μg/ml的MMI-166处理后，人胰腺癌SWl990细胞的c-Myc表达量显著下调（0．098±0．003、0．073±0．008tLo．169±0．007，F=189．361，P〈0．05）：Survivin的表达量无明显变化。结论MMI-166可能通过下调c-Myc的表达诱导人胰腺癌SWl990细胞凋亡。