阿曼托双黄酮通过JAK2-STAT3通路影响甲状腺癌SW579细胞的增殖和凋亡

目的:探讨阿曼托双黄酮(AF)对甲状腺癌SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其细胞增殖和凋亡的影响。方法:用0、50、100、150、200μmol/L的AF处理SW579细胞24、48、72 h,采用CCK-8和Celigo计数、FCM、WB及qPCR法检测AF对SW579细胞的增殖、凋亡、JAK2-STAT3通路活化及其下游调控基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:AF处理后,SW579细胞增殖能力显著下降(P<0.05)且呈浓度依赖性,细胞凋亡呈浓度依赖性增多(P<0.05),细胞中JAK2-STAT3通路的活化受到显著抑制(P<0.05),其下游基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达均明显下降(均P<0.05)。结论:AF可通过抑制SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其下游基因的表达而抑制SW579细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为治疗甲状腺癌的有效药物。

乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性及血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子受体表达的影响

目的:探究乐伐替尼对甲状腺癌SW579细胞放射敏感性以及对血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(bFGFR)表达的影响。方法:体外培养甲状腺癌SW579细胞,筛选最佳放射剂量,取培养至对数生长期的SW579细胞分为对照组(常规培养SW579细胞)、放射组(使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、乐伐替尼低(在含SW579细胞的培养基中加入5μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)、高(在含SW579细胞的培养基中加入10μmol/L的乐伐替尼后,再使用4 Gy X射线照射SW579细胞)浓度组,培养48 h后。检测SW579细胞存活率、细胞凋亡率和细胞中B细胞淋巴瘤-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达。结果:随着放射剂量的升高,SW579细胞存活率依次降低(均P<0.05),选取4 Gy X射线进行后续实验;与对照组相比,放射组、乐伐替尼低、高浓度组SW579细胞存活率、Bcl-2、VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达依次降低(均P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达依次升高(均P<0.05)。结论:乐伐替尼能增强SW579细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制VEGF、bFGF、bFGFR蛋白表达有关。

PDCD4对甲状腺癌SW579细胞调亡及成瘤能力的影响

目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制。方法将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入t PA刺激细胞进行收集。对照组未加PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激和t PA刺激。应用Annexin V/PI和API等标记,Cyclins/DNA双标流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞的凋亡及周期特异性,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况。结果处于静止期的外周血对PDCD4凋亡诱导不敏感,而G1期PDCD4诱导甲状腺癌SW579细胞出现了明显的细胞凋亡。PDCD4诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生。观察组的Caspase-3、Caspase-9 m RNA的表达值分别为(1.12±0.56)、(1.10±0.29),显著高于对照组的(0.82±0.31)、(0.72±0.26),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDCD4诱导的细胞凋亡与甲状腺癌SW579细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了Caspase活化,参与细胞凋亡及可能抑制细胞成瘤能力。

四溴苯三唑对甲状腺鳞癌SW579细胞凋亡的影响

目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响。方法将甲状腺鳞癌细胞株SW579分为对照组和实验组。实验组细胞均在培养24 h后加药,加入不同浓度的TBB,使其终浓度分别为12.5、25、50、75、100μmol/L。培养到一定时间后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达。结果低浓度TBB组(12.5、25、50μmol/L)肿瘤细胞有向良性细胞形态转化的趋势;高浓度组(75、100μmol/L)细胞生长密度较对照组明显降低,与低浓度组相比,向成熟分化的趋势不明显。MTT结果显示,实验组细胞均出现显著的生长抑制作用,且呈剂量依赖性。实验组随着TBB药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加,细胞滞留在G1期。RT-PCR方法检测发现实验组细胞凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平上调。结论 TBB可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其机制可能与上调Caspase-3基因表达,激活Caspase途径有关。

lncRNA SNHG14通过靶向miR-433-3p调控甲状腺癌SW579细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA SNHG14对甲状腺癌SW579细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:收集2017年10月至2018年12月青海省人民医院收治的20例甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用qPCR检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中SNHG14与miR-433-3p的表达;根据转染物的不同,将SW579细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG14组(转染si-SNHG14)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)、si-SNHG14+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG14与anti-miR-NC)和si-SNHG14+anti-miR-433-3p组(共转染si-SNHG14与anti-miR-433-3p)。MTT法、FCM、Transwell实验分别检测转染后SW579细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力的改变;利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14是否可结合miR-433-3p,qPCR法检测SNHG14与miR-433-3p之间的相互调控关系。结果:SNHG14在甲状腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),而miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。抑制SNHG14的表达或过表达miR-433-3p可使SW579细胞增殖能力降低(P<0.05)、迁移与侵袭细胞数减少(均P<0.05)、细胞凋亡率升高(P<0.05)、G1期细胞比例升高(P<0.05)且S期细胞比例降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明SNHG14可结合miR-433-3p,抑制SNHG14的表达可提高SW579细胞中miR-433-3p水平(均P<0.05)。同时抑制miR-433-3p和SNHG14的表达可部分逆转后者对SW579细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用(均P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中lncRNA SNHG14呈高表达、miR-433-3p呈低表达,lncRNA SNHG14可通过靶向结合miR-433-3p促进甲状腺癌SW579细胞的增殖、迁移、侵袭而抑制细胞凋亡。

ING4诱导甲状腺癌SW579细胞S早期阻滞的机制研究

目的:检测ING4对甲状腺癌SW579细胞周期的影响及其机制。方法:利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖,并利用PI染色和Cldu/Idu双染检测细胞周期变化。Western blot技术检测周期相关蛋白的变化。结果:ING4可以明显抑制SW579细胞增殖,并且导致其S早期阻滞。ING4处理后细胞p53表达明显升高,同时phospho-S345-Chk1和phospho-T68-Chk2等细胞周期相关蛋白表达水平升高。结论:ING4可导致SW579细胞出现S早期阻滞,p53表达明显升高,细胞周期相关蛋白表达水平升高,但是三者关系有待进一步研究。

白藜芦醇增加甲状腺癌SW579细胞放射敏感性的机制

目的考察白藜芦醇作为甲状腺癌SW579细胞辐射增敏剂的机制。方法 MTT法检测不同浓度白藜芦醇对SW579细胞的毒性,克隆形成实验计算白藜芦醇作用SW579细胞后的细胞存活分数。将SW579细胞分为对照组、加药组、照射组和联合组,MTT法和流式细胞术分别检测SW579细胞增殖、细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞增殖蛋白Ki67、凋亡抑制蛋白Survivin、DNA损伤修复蛋白NBS1和ATM表达。结果 25μmol/L白藜芦醇在72 h内对SW549细胞无细胞毒性的最大浓度。同一剂量照射下,白藜芦醇处理组的SW579细胞的细胞克隆形成数和细胞存活分数均比照射组低。白藜芦醇和X射线联合使用可抑制细胞增殖、改变细胞周期和促进细胞凋亡,同时抑制Ki67、Survivin、NBS1和ATM的表达。结论白藜芦醇可通过抑制甲状腺癌SW579细胞增殖,改变细胞周期和促进细胞凋亡进而增加放射敏感性。

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达。结果:TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P<0.05)。RT-PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3mRNA表达水平上调。结论:不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞凋亡的诱导作用

目的探讨白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞凋亡的诱导作用。方法实验分为4组,分别采用0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L浓度的白藜芦醇处理对数生长期的甲状腺癌SW579细胞。干预48 h后,采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡率;干预72h后,Real Time PCR法检测各组bax mRNA和bcl-2 mRNA表达情况。结果 50 mmol/L组、100 mmol/L组、200 mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量均显著高于0 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达量明显低于0 mmol/L组(P均<0.05);100 mmol/L组、200mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量均显著高于50 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2mRNA表达量明显低于50 mmol/L组(P均<0.05);200 mmol/L组细胞凋亡率和bax mRNA表达量显著高于100 mmol/L组(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达量明显低于100 mmol/L组(P均<0.05)。结论白藜芦醇有诱导甲状腺癌SW579细胞凋亡的作用,机制可能与其能调节bcl-2及bax表达有关。

中药玄参对甲状腺癌SW579细胞增殖及BCL-2和C-myc表达的影响

目的:以甲状腺癌SW579细胞为研究对象,探讨不同浓度的中药玄参对甲状腺癌细胞凋亡相关基因BCL-2和C-myc表达水平的影响。方法:不同浓度的中药玄参作用于人甲状腺癌细胞48h后,采用MTT法测出中药玄参对甲状腺癌细胞的IC50值;根据IC50值取玄参浓度3.125,0.390625,0.09765625μg/μL三个组别作为高、中、低组与对照组继续分别作用于甲状腺癌细胞48h后,PCR检测各组BCL-2和C-myc基因的表达水平。结果:中药玄参各组对SW579细胞增殖均有抑制作用(P<0.01),且随着浓度的增加,抗增殖作用增强;随着药物浓度的增加,BCL-2基因(P<0.01)与C-myc基因(P<0.01)表达水平下调,且各组间BCL-2基因(P<0.01)与C-myc基因(P<0.01)有显著差异。结论:中药玄参有抑制甲状腺癌SW579细胞增殖的作用,不同浓度的玄参与凋亡相关基因BCL-2与C-myc表达有量效关系,玄参抑制甲状腺癌细胞的增殖可能与下调BCL-2与C-myc表达有关。

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞增殖影响及其机制研究

目的探究白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞增殖的影响及其作用机制。方法取对数生长期SW579细胞,分为20 mmol/L白藜芦醇组、40 mmol/L白藜芦醇组、60 mmol/L白藜芦醇组、80 mmol/L白藜芦醇组、100 mmol/L白藜芦醇组、对照组和空白组,白藜芦醇各组加入相应浓度白藜芦醇培养,对照组加入等体积二甲基亚砜(DMSO)培养,空白组常规培养,培养24 h后采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。取对数生长期SW579细胞,分为100 mmol/L白藜芦醇组和对照组,采用流式细胞术检测2组SW579细胞周期,采用Western blotting技术检测2组SW579细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)以及双特异性蛋白磷酸酶(BCDC25B)表达水平。结果SW579细胞增殖与白藜芦醇浓度呈依赖性,白藜芦醇浓度越高,增殖率越低。100 mmol/L白藜芦醇组G0/G1期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),S期细胞比例明显高于对照组(P<0.05),G2/M期细胞比例明显低于对照组(P<0.05)。100 mmol/L白藜芦醇组p-AKT、p-mTOR和CDC25B相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05)。结论白藜芦醇可能通过抑制p-AKT、p-mTOR及CDC25B蛋白的表达,从而使SW579细胞分裂增殖时停滞于S期,进而显著抑制甲状腺癌SW579细胞增殖。

五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响

目的:探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。方法:48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组。空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度(100、200和400mg·kg-1)的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达。结果:流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)(P<0.01),并随剂量增加而增加。阴性对照组细胞生长抑制率为(0.12±0.06)%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为(27.51±1.62)%、(34.69±0.79)%和(45.83±1.33)%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blotting检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论:五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

淫羊藿甙诱导甲状腺癌细胞系SW579的分化及恶性表型逆转的实验研究

目的:考察淫羊藿甙(ICA)对甲状腺癌细胞系SW579的增殖、细胞周期、黏附及侵袭效应的影响,探讨其逆转甲状腺癌细胞系SW579恶性表型的机制。方法:采用MTT法检测ICA作用过的甲状腺癌细胞系SW579的增殖,运用流式细胞技术(FACS)检测细胞周期分布;运用Tanswell小室侵袭试验,软琼脂集落形成实验,细胞-基质黏附率检测等方法检测逆转SW579恶性表型情况;RT-PCR检测分化抑制因子/DNA结合抑制因子(Id-1)、p21 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,ICA在浓度(6.25～100)mg/L范围内,对SW579细胞增殖的抑制作用呈明显的浓度依赖效应和时间依赖效应;细胞周期各时相分布中S期明显减小(P<0.01),而G0/G1期升高(P<0.01);SW579细胞非整倍体DNA含量减少,克隆形成率、细胞基质黏附率以及体外细胞侵袭力明显降低;Id-1 mRNA表达下调,p21mRNA表达升高,且有明显的浓度依赖性。结论:ICA可以逆转人甲状腺癌SW579细胞系的恶性表型,通过下调Id-1 mRNA水平来激活p21基因的表达,从而使SW579细胞从S期向G1/G0期逆转,完成诱导分化。

下调CD147表达对甲状腺癌细胞SW579运动能力的影响

目的:检测CD147 siRNA对甲状腺癌SW579细胞的作用及其机制。方法:检测CD147 siRNA处理后SW579细胞的CD147 mRNA和蛋白水平。利用CKK-8实验检测细胞增殖。同时利用transwell检测细胞运动能力变化。并利用Western-blot技术检测运动相关蛋白的变化。结果:下调CD147可以明显抑制SW579细胞增殖,并且阻碍其运动。处理后细胞的MMP-2和MMP-9蛋白水平明显下降。一种运动相关蛋白WAVE2的表达随着CD147的下调而下降。结论 :CD147下调可能通过抑制MMP-2、MMP-9和WAVE2表达导致SW579细胞运动能力下降。

凡德他尼诱导甲状腺癌细胞SW579凋亡及其机制

目的:检测凡德他尼对甲状腺癌SW579细胞的作用及其机制。方法:采用MTT比色法检测凡德他尼处理后SW579细胞的增殖情况。利用流式细胞技术检测SW579细胞的凋亡比例。为了检测凡德他尼对SW579细胞作用的机制,利用小分子对接技术初步模拟可能的信号传导通路。利用Western blot技术证实模拟的细胞信号传导通路。结果:凡德他尼可以明显抑制SW579细胞增殖,并且诱导凋亡。在凋亡过程中,凡德他尼能够结合Smad3并激活Smad传导通路。结论:凡德他尼通过Smad传导通路导致SW579细胞凋亡。

血管能抑素诱导甲状腺癌细胞SW579凋亡和衰老及其机制

目的:检测血管能抑素(canstatin)对甲状腺癌SW579细胞的增殖抑制、诱导凋亡与衰老作用及其机制。方法:利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖。分别利用Annexin V-FITC/PI双染和β-半乳糖苷酶染色检测细胞凋亡和衰老。Western blot技术检测可能的机制。结果:Canstatin可以明显抑制SW579细胞增殖,诱导其凋亡和衰老。处理后细胞的p-AKT蛋白水平明显下降。而caspase 3和9蛋白水平升高。结论:Canstatin通过抑制p-AKT导致SW579细胞凋亡和衰老。

Canstatin与tumstatin抑制甲状腺癌细胞SW579迁移的机制研究

目的:研究canstatin与tumstatin对甲状腺癌SW579细胞迁移的影响及其机制。方法:利用MTT实验和划痕实验检测SW579细胞增殖和迁移。Western blot技术检测运动相关蛋白的变化。结果:Canstatin与tumstatin可以明显抑制SW579细胞增殖和迁移。Canstatin与tumstatin处理后细胞的MMP 3、9和12蛋白水平明显下降。在canstatin作用下Wave2蛋白含量下降,而tumstatin没有类似作用。结论:Canstatin与tumstatin通过抑制MMP 3、9和12蛋白水平导致SW579细胞运动减弱。

SBHL对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响及机制

目的为澳洲茄胺盐酸盐(SBHL)治疗甲状腺鳞癌提供理论依据。方法将1×10-5、5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3mol/L的SBHL作用于甲状腺鳞癌SW579细胞,分别于作用24、48、72、96 h后用MTT比色法观察增殖情况;用流式细胞仪分析细胞周期;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5～1×10-3mol/LSBHL作用后SW579细胞增殖明显受抑,呈浓度依赖性;细胞周期阻滞于G1期,随着SBHL浓度的增加,S期细胞逐渐降低,G1期细胞逐渐增加;端粒酶活性明显降低。结论 SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长具有明显抑制作用,其机制可能与下调端粒酶活性有关。

STIM1对甲状腺癌细胞SW579的影响及其分子机制

目的研究在甲状腺癌细胞内外钙离子浓度改变时STIM1对SW579细胞的影响及其可能机制。方法用病毒转染法将带有STIM1-YFP荧光探针的腺病毒载体(105病毒颗粒/细胞)转入SW579细胞24h后,细胞计数绘制生长曲线;全内角反射荧光显微镜下观察SW579细胞在100μmol/L环匹阿尼酸(CPA)、100μmol/L卡巴胆碱干预下,STIM1在细胞膜附近的实时动态变化。结果 SW579细胞转染组与未转染组生长曲线无显著性差异(P>0.05);CPA处理后SW579细胞荧光强度增加到1.38±0.2(F/F0);卡巴胆碱处理后,SW579细胞荧光增加到1.57±0.3(F/F0),有显著性差异(P<0.01)。结论STIM1在SW579细胞内外钙离子浓度改变时表达并有活性,并可通过Ca2+通道调节SW579细胞。

miR-182表达异常对甲状腺癌细胞株SW579增殖迁移的影响

目的:研究不同病理状态甲状腺组织中miRNA-182(miR-182)的mRNA表达水平,探讨沉默miR-182后,甲状腺癌细胞系SW579的增殖、迁移能力及VEGF和p53的蛋白表达水平变化。方法:实时荧光定量PCR检测miR-182的mRNA表达水平。转染miR-182-inhibitor后,MTT法、流式细胞术和划痕实验分别检测SW579细胞的增殖和迁移能力的变化。免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中VEGF和p53的蛋白表达水平。结果:miR-182在正常甲状腺组织和癌旁甲状腺组织中几乎不表达,在甲状腺腺瘤组织和甲状腺癌组织中呈高表达。转染miR-182-inhibitor后,SW579细胞的增殖能力和细胞迁移数显著降低(P<0.05),VEGF和p53的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:miR-182高表达可能与甲状腺癌的发生发展具有潜在联系。下调miR-182可抑制SW579细胞的增殖迁移,其作用机制与降低细胞中VEGF和p53的蛋白表达水平有关。