SWNSN-20-1型生物质能水暖锅炉

SWNSN-20-1型生物质能水暖锅炉是由北京老万生物质能科技有限公司生产的新型燃烧器。该燃烧器及产品于2001年7月通过了农业部组织的部级鉴定。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

卵巢型子宫内膜异位症患者外周血ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平及与病情的关系

目的探究卵巢型子宫内膜异位症(EMs)患者外周血氧自由基(ROS)、氧磷酶-1(PON-1)水平和miR-20a表达水平及与病情的关系。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月在江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)进行治疗的113例卵巢型EMs患者纳入研究组,并根据美国生育协会分期标准对其进行分组:62例Ⅰ~Ⅱ期患者纳入轻度组,51例Ⅲ~Ⅳ期患者纳入重度组。另选30例在本院进行治疗的盆腔炎且子宫内膜正常患者纳入对照组。比较研究组与对照组患者、轻度组与重度组患者的ROS、PON-1水平和miR-20a相对表达水平,比较轻度组与重度组的血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并探究其与患者病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平对重度卵巢型EMs的诊断价值。结果研究组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(485.55±32.12)pg/mL、2.48±0.33,均高于对照组患者[(326.26±28.12)pg/mL、1.03±0.24],PON-1水平为(152.23±8.78)pg/mL,低于对照组患者[(212.26±8.23)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(498.22±18.45)pg/mL、2.64±0.37,均高于轻度组患者[(433.28±23.16)pg/mL、1.97±0.21],PON-1水平为(142.04±5.99)pg/mL,低于轻度组患者[(164.56±5.48)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的血清IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平分别为(33.26±2.45)、(29.55±3.16)、(39.45±2.78)、(29.88±2.64)pg/mL,均高于轻度组患者[(17.22±2.23)、(23.66±3.15)、(32.45±2.54)、(21.02±2.37)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROS水平,miR-20a相对表达水平,IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平与患者的临床分期呈正相关(r=0.847、0.751、0.862、0.685、0.830、0.859,P<0.05),PON-1水平与患者的临床分期呈负相关(r=-0.856,P<0.05)。ROS、PON-1水平,miR-20a相对表达水平诊断重度卵巢型子宫内膜异位的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.991、0.997、0.936,具有较好诊断价值(P<0.05)。结论ROS水平、miR-20a相对表达水平在卵巢型EMs患者中升高,PON-1水平表达下调,且对其病情严重程度具有一定诊断价值,可用于临床辅助诊断。

miR-20a、IL-6、ERCC1水平对非小细胞肺癌同步放化疗效果的评估价值

目的探讨微小RNA-20a(miR-20a)、白细胞介素-6(IL-6)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)水平在非小细胞肺癌(NSCLC)同步放化疗效果评估中的价值。方法选取2020年1月~2023年12月期间在我院肿瘤科就诊并行同步放化疗的60例NSCLC患者,根据治疗结束后的疗效将患者分为有效组和无效组。比较两组miR-20a、IL-6、ERCC1的变化,分析与NSCLC同步放化疗效果相关的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-20a、IL-6、ERCC1单独预测和三者联合预测NSCLC患者同步放化疗效果的价值。结果60例患者同步放化疗1个月后,21例完全缓解,20例部分缓解,13例疾病稳定,6例疾病进展,治疗有效率为68.33%;有效组的血清miR-20a、IL-6、ERCC1表达水平明显低于无效组,肿瘤中、高分化程度比例高于无效组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-20a、IL-6、ERCC1表达水平降低及肿瘤中、高分化程度是NSCLC患者同步放化疗有效的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-20a、IL-6、ERCC1三者联合预测NSCLC患者同步放化疗效果的ROC曲线下面积(AUC)为0.890,灵敏度和特异度分别为82.90%、89.50%,高于miR-20a、IL-6、ERCC1单独预测(P<0.05)。结论miR-20a、IL-6、ERCC1及肿瘤分化程度与NSCLC同步放化疗的效果有关,miR-20a、IL-6、ERCC1在NSCLC组织中呈现异常表达状态,miR-20a、IL-6、ERCC1三者联合预测NSCLC患者同步放化疗效果的价值较高。

血清CCL20、FAS、SREBP-1c联合检测在结直肠癌临床诊断及预后评估中的应用价值探讨

目的探讨血清趋化因子CC亚家族配体20(CCL20)、脂肪酸合酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)联合检测在结直肠癌临床诊断及预后评估中的应用价值。方法选取2017年1月至2020年5月106例结直肠癌患者为研究对象,50例健康体检者为对照,均检测血清CCL20、FAS、SREBP-1c,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估CCL20、FAS、SREBP-1c的诊断价值,并随访预后结局,进行生存分析。结果结直肠癌组的血清CCL20、FAS、SREBP-1c水平均高于健康对照组(P<0.05)。血清CCL20、FAS、SREBP-1c诊断结直肠癌的灵敏度分别为80.00%、78.00%、76.00%,特异度分别为68.60%、81.40%、75.50%。血清CCL20、FAS、SREBP-1c水平与分化程度、临床分期有关联(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、大体分型、组织学分型无关联(P>0.05)。CCL20、FAS、SREBP-1c高水平组3年无进展生存率分别为41.67%、42.86%、41.11%,低于CCL20、FAS、SREBP-1c低水平组的68.18%、73.33%、81.25%(P<0.05)。CCL20、FAS、SREBP-1c高水平组无进展生存时间为33个月,短于CCL20、FAS、SREBP-1c低水平组的38、48、44个月(P<0.05)。结论血清CCL20、FAS、SREBP-1c可能与结直肠癌的发生发展有一定关联,可作为结直肠癌的辅助诊断筛查和预后随访指标,血清CCL20、FAS、SREBP-1c高水平可能预示着肿瘤进展和预后不良。

缺氧诱导因子-1ɑ及miR-20ɑ-5p在子痫前期患者中的表达及相互作用

目的观察子痫前期孕妇胎盘组织中缺氧诱导因子-1ɑ(HIF-1ɑ)及miR-20ɑ-5p的表达情况,探讨二者与子痫前期发生发展的关系。方法选取河北北方学院附属第二医院2018年1月-2019年12月诊治的子痫前期孕妇(子痫前期组)和健康妊娠孕妇(健康组)各58例,采用qRT-PCR检测2组胎盘组织中HIF-1ɑ和miR-20ɑ-5p表达情况,采用Pearson法分析HIF-1ɑ和miR-20ɑ-5p间的相关性,采用Logistics多因素分析二者与子痫前期并发不良后果的关系,通过miRDB、TargetScan和miRWalk网站分析二者间的潜在机制。结果子痫前期组胎盘组织中HIF-1ɑ和miR-20ɑ-5p表达量均明显高于健康组(P均<0.05)。Pearson分析发现HIF-1ɑ和miR-20ɑ-5p表达量呈正相关(r=0.466,P<0.05)。多因素分析显示,HIF-1ɑ和miR-20ɑ-5p高表达、孕周均为子痫前期并发不良后果的风险因子(P均<0.05),其中HIF-1ɑ、miR-20ɑ-5p均为子痫前期预后不良的预测因子。生物信息学结果提示miR-20ɑ-5p可靶向调控HIF-1ɑ的表达。结论miR-20ɑ-5p可能通过调控HIF-1ɑ的表达参与子痫前期的发生发展。

LRG1和PCDH20在宫颈癌组织中的表达情况及临床价值

目的探讨富亮氨酸α2-糖蛋白1(LRG1)和原钙黏蛋白20(PCDH20)在宫颈癌组织中的表达情况及临床价值。方法选取2019年6月至2020年6月内江市第二人民医院收治的68例宫颈癌患者的宫颈活检标本作为宫颈癌组,并选取本院同期68例宫颈良性肿瘤患者的宫颈活检标本作为对照组,收集宫颈癌组相关临床资料。比较两组LRG1和PCDH20表达情况,分析LRG1和PCDH20表达情况与临床病理特征的关系,采用Spearman分析宫颈癌组织中LRG1和PCDH20表达的相关性,采用Kaplan-Meier法分析宫颈癌组织中LRG1和PCDH20表达与患者预后的关系,采用Cox回归分析影响宫颈癌患者预后的不良因素。结果宫颈癌组LRG1阳性表达率高于对照组(P<0.05),宫颈癌组PCDH20阳性表达率低于对照组(P<0.05)。宫颈癌组LRG1和PCDH20表达情况与肿瘤最大径、恶性肿瘤国际临床病理(TNM)分期、是否有淋巴结转移、组织分化程度及浸润深度相关(P<0.05)。宫颈癌组织中LRG1和PCDH20表达情况呈负相关(r=-0.594,P<0.001)。宫颈癌组织中LRG1阳性表达患者3年生存率低于LRG1阴性表达患者(P<0.05),宫颈癌组织中PCDH20阳性表达患者3年生存率高于PCDH20阴性表达患者(P<0.05)。LRG1阳性表达、PCDH20阴性表达、有淋巴结转移、感染人乳头瘤病毒(HPV)、浸润深度为深肌层均为宫颈癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论在宫颈癌组织中LRG1高表达,PCDH20低表达,两者均与患者预后密切相关,可作为预测指标对宫颈癌患者进行预后评估。

HIV-1感染患者外周血单核细胞miR-20a、miR-122表达与HIV-1 DNA、HIV-1 RNA及CD4+T淋巴细胞计数的关系

目的检测人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)微小RNA(miR)-20a、miR-122表达水平,探讨其与HIV-1 DNA、HIV-1 RNA及CD4+T淋巴细胞计数关系。方法选取2021年5月~2023年1月南通市第三人民医院收治的HIV-1感染患者110例作为HIV-1组,依据HIV-1 DNA分为HIV-1 DNA高表达组(DHG组,n=65例)、HIV-1 DNA低表达组(DLG组,n=45例);依据HIV-1 RNA分为HIV-1 RNA高表达组(RHG组,n=49例)、HIV-1 RNA低表达组(RLG组,n=61例);根据CD4+T淋巴细胞计数分为<200 cellsμl组(n=36例)、200~350 cellsμl组(n=48例)、>350 cellsμl组(n=26例)。另选取同时间段健康体检者110例作为健康对照组。荧光定量PCR法检测PBMCs miR-20a、miR-122、HIV-1 DNA以及血浆HIV-1 RNA,流式细胞仪获取CD4+T淋巴细胞计数。比较各组患者PBMCs中miR-20a、miR-122水平差异。Pearson法分析两指标间相关性。结果HIV-1组PBMCs中miR-20a、miR-122水平高于健康对照组[(1.72±0.45)vs.(1.09±0.12)、(1.51±0.38)vs.(1.04±0.07)],差异有统计学意义(t=14.188、12.757,P<0.05)。与DLG组相比,DHG组患者PBMCs中miR-20a、miR-122水平均明显升高[(1.91±0.48)vs.(1.45±0.41)、(1.64±0.39)vs.(1.32±0.37)],差异有统计学意义(t=5.239、4.320,P<0.05)。RHG组PBMCs中miR-20a、miR-122水平高于RLG组[(1.85±0.46)vs.(1.62±0.44)、(1.70±0.40)vs.(1.36±0.36)],差异有统计学意义(t=2.670、4.685,P<0.05)。<200 cellsμl组、200~350 cellsμl组、>350 cellsμl组miR-20a、miR-122水平逐次降低[(2.04±0.55)、(1.67±0.46)、(1.37±0.29),(1.73±0.40)、(1.51±0.39)、(1.21±0.33)],差异有统计学意义(F=16.525,14.117,P<0.05)。相关性结果显示,HIV-1组PBMCs中miR-20a与miR-122呈正相关(r=0.651,P<0.05),miR-20a、miR-122均与HIV-1 DNA(log 2 DNA)有明显正相关(r=0.569、0.471,P<0.05),与HIV-1 RNA(log 2 RNA)有明显正相关(r=0.491、0.444,P<0.05),但与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关性(r=-0.555、-0.536,P<0.05)。结论HIV-1感染者PBMCs中miR-20a、miR-122表达水平升高,与CD4+T淋巴细胞计数及HIV-1病毒的DNA和RNA定量检测结果相关,可能与病毒储存库建立有关,检测二者水平可反映患者感染状况。

人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达

目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性。方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果:DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20+)和A549(4-1BB+)细胞结合的活性。结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达。表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。

吐温20增敏同步荧光光谱法测定尿液中1-羟基芘

尿液中1-羟基芘作为人体内多环芳烃(PAHs)的代谢产物,是高浓度PAHs职业环境和一般环境中人体接触PAHs的一个灵敏指标,已被广泛用于评价人体和动物与多环芳烃接触的内暴露生物指示物,其含量的测定具有十分重要的意义。本研究建立了人尿中1-羟基芘(1-OHP)的同步荧光测定方法。在Britton-Robinson缓冲溶液(pH2.6)中,以同步波长差Δλ=34nm进行同步荧光扫描,其同步特征峰的强度与1-OHP的浓度呈线性关系。表面活性剂吐温20对1-OHP的同步荧光具有增敏作用。本方法的线性范围为2.5×10-10～5.0×10-7mol/L;检出限为9.5×10-11mol/L;相对标准偏差(RSD)为0.78%(1.0×10-7mol/L,n=11)。应用于实际尿样的测定,加标回收率为93.8%～107.4%。

20(s)-原人参二醇对前列腺癌RM-1细胞的生长抑制作用及其机制

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对前列腺癌RM-1细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:建立前列腺癌RM-1细胞动物模型,将36只C57小鼠随机分为3组:模型组(橄榄油等体积灌胃每天1次、生理盐水等体积腹腔注射每周1次),紫杉醇(Taxol)组(20mg.kg-1,腹腔注射每周1次),PPD组(20mg.kg-1,灌胃每天1次),连续给药4周。每隔3d测量肿瘤体积1次,给药第4周末处死动物。观察指标:动物一般状态、肿瘤体积、瘤重、抑瘤率、死亡率,采用RT-PCR和Western blotting法检测肿瘤组织Cyclin D1蛋白表达水平。结果:PPD组小鼠一般状态明显好于模型组,表现为活泼好动、毛色光亮;而模型组小鼠步履蹒跚、行动迟缓、精神萎靡;肿瘤组织出现破溃、糜烂、出血。给药13d时,PPD组小鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05);21d时PPD组肿瘤体积明显小于Taxol组(P<0.05)。与模型组比较,PPD组小鼠瘤质量明显降低(P<0.05),死亡率为零;与Taxol组比较,PPD组小鼠抑瘤率增高(P<0.05),死亡率降低(P<0.05)。各给药组小鼠肿瘤组织Cyclin D1基因转录、蛋白表达水平均明显低于模型组(P<0.05),与Taxol组比较,PPD组Cyclin D1基因转录明显减弱(P<0.05),而蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论:PPD有明显抑制前列腺癌RM-1细胞生长的作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1蛋白表达有关。

TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究

目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响。方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列。利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接。经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842bp),并与pGL3-Basic载体连接。pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1ng/mLTGF-β1,12h后检测荧光素酶的活性。结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒。与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强。结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能。

20(S/R)-人参皂苷Rg_3的制备及调节Th1/Th2免疫失衡活性

采用醋酸溶液作为提取溶剂,使西洋参叶中的二醇组人参皂苷在提取过程中发生降解,从而直接获得20(S)-人参皂苷Rg_3和20(R)-人参皂苷Rg_3,并对其调节Th1/Th2免疫失衡活性进行了研究.正交实验结果表明,当醋酸浓度为50%(体积分数),提取温度为80℃,提取时间为1 h时,20(S)-人参皂苷Rg_3和20(R)-人参皂苷Rg_3的转化率最高,分别为12. 30%和14. 80%.将20(S)-人参皂苷Rg_3和20(R)-人参皂苷Rg_3处理后的朗格汉斯状树突细胞(LDCs)分别作用于小鼠抗原诱导的Th1/Th2免疫失衡模型,发现细胞上层清液中IL-4的水平均显著降低,说明20(S)-人参皂苷Rg_3和20(R)-人参皂苷Rg_3对小鼠Th1/Th2免疫失衡具有调节作用.本文不仅建立了一种制备20(S)-人参皂苷Rg_3和20(R)-人参皂苷Rg_3的新方法,也为人参皂苷Rg_3在免疫系统疾病中的应用提供了新的科学依据.

20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1表达及凋亡的影响

目的观察20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子(TGF)-β1表达及凋亡的影响。方法利用高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、糖尿病组和Rg3治疗组。Rg3治疗组以20 mg/kg体重每日灌胃给予人参皂苷Rg3。监测大鼠体重和血糖,于12 w结束实验时处死大鼠,留取肾脏。用过碘酸雪夫(PAS)染色检测各实验组大鼠肾脏组织,观察其形态学改变;免疫组化法检测各实验组大鼠肾脏组织中TGF-β1的表达;TUNEL染色观察各实验组大鼠肾脏组织凋亡的情况。结果通过PAS染色可以观察到糖尿病组大鼠肾脏组织中肾小球毛细血管袢开放尚可,部分肾小球体积增大、囊腔裂隙变窄,肾小球系膜基质和系膜细胞弥漫性增生。Rg3治疗组大鼠肾脏组织中肾小球形态接近正常。各实验组大鼠肾脏组织中,TGF-β1均主要表达于肾小管上皮细胞,其中糖尿病组TGF-β1的表达增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Rg3治疗组TGF-β1的表达较糖尿病组明显降低(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL染色见糖尿病组肾小管上皮细胞大量凋亡,显著高于对照组与Rg3治疗组;Rg3治疗组与正常对照组之间凋亡阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,肾小管上皮细胞TGF-β1的表达与细胞凋亡率呈正相关。结论 20(S)人参皂苷Rg3显著抑制了糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡,这与其下调肾小管上皮细胞TGF-β1的表达相关,该研究证实了20(S)人参皂苷Rg3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。

Runx2介导TGF-β1调控成釉细胞MMP20基因表达的研究

目的:研究Runx2在TGF-β1调控小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase 20,MMP20)基因表达中的作用。方法:首先利用双荧光素酶基因报告系统分析TGF-β1对MMP20基因启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)方法观察Runx2与MMP20特异性结合位点之间的相互作用,并利用基因定点突变和双荧光素酶基因报告系统分析Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响;最后运用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默,实时定量RT-PCR技术观察TGF-β1诱导MMP20基因表达的改变。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,MMP20启动子在-87～+23区域转录活性无明显变化外,其他各区域转录活性均增强。利用ChIP研究发现Runx2与MMP20基因核心启动子的特征性序列"TGTGGG"相互作用;将该特征性序列由"TGTGGG"突变为"TGTAAG"后,利用双荧光素酶基因报告系统发现Runx2对MMP20基因启动子转录活性的影响减弱;利用小RNA干扰技术使Runx2基因沉默后,TGF-β1上调MMP20基因表达的作用减弱。结论:TGF-β1通过转录因子Runx2调控成釉细胞MMP20的表达。

LncRNA ZBTB20-AS1靶向miR-132-3p/MAPT轴影响阿尔茨海默病的发生发展

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指蛋白ZBTB20反义RNA1(ZBTB20-AS1)靶向miR-132-3p/微管相关蛋白tau(MAPT)轴对阿尔茨海默病(AD)发生发展的影响。方法采用Aβ25~35(20μmol/L)处理SK-N-SH细胞构建AD细胞模型。将si-con、si-ZBTB20-AS1、miR-con、miR-132-3p mimics、si-MAPT分别转染SK-N-SH细胞,经Aβ25~35处理后,反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测MAPT、细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZBTB20-AS1和miR-132-3p、miR-132-3p和MAPT的靶向关系。结果AD细胞模型中ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平显著升高,MAPT的表达水平显著降低。沉默ZBTB20-AS1、过表达miR-132-3p或沉默MAPT均可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ25~35诱导的细胞凋亡。miR-132-3p是ZBTB20-AS1的靶基因,ZBTB20-AS1可靶向负性调控miR-132-3p表达。MAPT是miR-132-3p的靶基因,miR-132-3p可靶向调控MAPT表达。抑制miR-132-3p表达或过表达MAPT均可逆转沉默ZBTB20-AS1对Aβ25~35诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默ZBTB20-AS1通过调控miR-132-3p/MAPT轴可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ25~35诱导的SK-N-SH细胞凋亡。

1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症的临床和分子遗传分析

目的通过对1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的临床特点和基因突变研究,初步探讨17OHD临床表现的基因分子机制。方法收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点。结果患者临床表现及内分泌功能检查完全符合17OHD,PCR产物测序发现,CYP17A1基因第6外显子329位密码子发生了TAC→AA的纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并形成了一个只包含418个氨基酸的截短蛋白,从而使该蛋白完全缺乏17α-羟化酶和17,20碳链裂解酶活性。结论CYP17A1突变导致的P450 c17蛋白的结构改变是该17OHD患者临床表现的基因分子基础。

微生物酶催化制备人参皂苷20(S)-Rg2,20(S)-Rh1和20(S)-PPT

以微生物Microbacterium esteraromaticum GS514的培养液中分离的粗酶为催化剂水解人参皂苷Re和Rg1,并通过1HNMR和13C NMR谱对水解产物的结构进行了表征.实验结果表明,反应体系中无机盐NaCl的存在与否直接影响人参皂苷Re,Rg1与粗酶液的反应结果.人参皂苷与粗酶液直接反应时,人参皂苷Re不发生反应,人参皂苷Rg1通过C6所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解转化成人参皂苷F1.而该反应在无机盐NaCl存在下进行时,人参皂苷Re通过对C20所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解定向转化为20(S)-人参皂苷Rg2;人参皂苷Rg1定向转化成20(S)-人参皂苷Rh1以及20(S)-原人参三醇(PPT).表明NaCl的加入激活了C20β-D-吡喃葡萄糖苷酶的活性,这对定向合成不同次级人参皂苷具有重要意义.

2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者临床及遗传学分析

目的分析2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者的临床特点和分子遗传学特征。方法收集2007年9月—2008年7月在河南省人民医院内分泌科治疗的2例患者临床、基础激素测定和影像学检查资料,对患者进行CYP17A1基因检测。结果 2例患者血压高于正常值,血钾低于正常值,第二性征发育不良。激素测定示血皮质醇水平低于正常,促肾上腺皮质激素反馈性增高;肾素活性受抑制;睾酮、雌二醇低于正常值,而促性腺激素增高。CT示双侧肾上腺增生。CYP17A1基因检测显示,2例患者基因第6外显子上发现c.1 045del和c.1 047C>A,329位密码子发生了TAC-AA纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并提前产生一个终止密码子(418TGA)。结论高血压伴低血钾患者同时存在性发育不良,应考虑17α-羟化酶缺陷症的可能,CYP17A1基因突变导致的P450c17蛋白的结构改变是17α-羟化酶缺陷症的分子基础。

西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗治疗老年晚期直肠癌的近远期效果及其对ICAM-1、Cox-2和CK-20水平的影响

目的探讨西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗治疗老年晚期直肠癌的近远期效果及其对血清细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、环氧酶-2（Cox-2）和细胞角蛋白-20（CK-20）表达的影响。方法选取2009年6月～2013年11月右江民族医学院附属医院肛肠外科收治的88例老年晚期直肠癌患者．根据治疗方案的不同分为XELOX化疗组（单独组）和XELOX化疗＋西妥昔单克隆抗体组（联合组），每组各44例；分别比较两组患者的近远期临床疗效、ICAM-1、Cox-2和CK-20的变化。结果联合组的治疗有效率为70．45％，显著高于单独组的40．91％（P〈0．05），但两组患者疾病控制率和不良反应发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组1年生存率与单独组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组2年生存率明显高于单独组（P〈0．05）；而且，联合组患者的局部复发与转移率也明显低于单独组（P〈0．05）；单独组患者的平均生存时间为16．263个月，显著短于联合组的20．658个月（P〈0．05）；治疗后两组患者ICAM-1、Cox-2和CK-20表达水平均显著降低（P〈0．05）；而且，联合组患者的改善程度明显优于单独组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗可显著提高老年晚期直肠癌的近远期临床疗效，抑制肿瘤相关基因ICAM-1、Cox-2和CK-20的水平。