1994年～2004年杭州地区O139群霍乱弧菌携SXT元件和整合子的特征

目的了解杭州地区O139群霍乱弧菌菌株携带SXT元件和整合子的特征。方法对1994年～2004年杭州地区腹泻患者分离的ctxA阳性霍乱弧菌O139群菌株25株（1994年～2004年）、O1群菌株（1997年～2001年）18株，应用PCR进行SXT元件和Ⅰ类整合子检测，并对Ⅰ类整合子携带的基因盒进行核酸序列测定，同时检测菌株对10种抗生素的耐药谱。结果1994年分离的浙江省首株O139群菌株即开始携带SXT元件。1994年～2004年分离的25株O139群菌株中，SXT元件携带率为96．00％（24／25）；18株O1群菌株（1997年～2001年）均属O139群出现后分离的，SXT元件为83．33％（15／18）。Ⅰ类整合子最早出现于1998年分离的O139群菌株，总阳性率为60．00％（15／25）；在2000年以后检出的O139群菌株中，携带率为81．25％（13／16）；Ⅰ类整合子中的基因盒阵列有两种：一为aadA2，占93．33％（14／15）；另一为dfrAI2＋orfF＋aadA3c，占6．67％（1／15）。18株O1群菌株（1997年～2001年）中未发现有Ⅰ类整合子。结论SXT元件在O139群（1994年～2004年）和O1群（1997年～2001年）霍乱弧菌中有较高的携带率。Ⅰ类整合子在2000年以后检出的O139群菌株中有较高的携带率。携带的基因盒提示，O139群菌株与其他细菌可能通过Ⅰ类整合子途经交换对抗生素耐药基因。

携带SXT/R391家族整合接合元件多重耐药菌株的高效筛选与分析

本研究建立了一种抗生素平板与分子检测相结合的高效筛选水产品中携带SXT/R391家族整合接合元件(integrative and conjugative elements,ICEs)的多重耐药菌株的方法。采用美国临床与实验室标准研究所标准Kirby-Bauer纸片扩散法、需氧菌液体微量稀释法,以及接合实验,对筛选、鉴定获得的携带SXT/R391家族ICEs的变形杆菌(Proteus vulgaris)进行了抗菌素、重金属抗性以及ICEs元件接合转移活性的分析。结果表明:运用本研究建立的筛选法可有效获得含有多重耐药基因的ICEs元件,其检出率为3%,远高于常规聚合酶链式反应技术的检测水平(<1‰)。受试菌株对六大类10种抗菌素均表现出抗性,并且对重金属镉、铜、锌和汞具有高度耐受性。接合实验证明了受试菌株所携带的ICEs元件在普通变形杆菌与大肠杆菌(Escherichia coli)MG1655之间的自我转移活性。

SXT/R391元件核心基因的生物信息学分析

目的:SXT/R391元件是革兰阴性菌中研究最充分、已知成员最多的整合性接合元件家族,本研究的主要目的是探讨SXT/R391元件核心基因组的适应性进化规律。方法:收集数据库中及文献报道的SXT/R391家族元件数据,并利用已测序的细菌基因组序列预测该家族元件,分析元件核心基因的进化特性。结果:通过文献搜集和预测,共获得83个SXT/R391元件的基因组序列。在52个核心基因中,计算发现22个基因在进化过程中经历了重组,基因分布于SXT/R391元件的4个必需模块。此外,在7个基因中检测到了正选择信号。结论:分析了SXT/R391元件核心基因的进化机制,为了解该家族的进化和扩散奠定了基础。

打造完善的外设产品线:同方SXT350

随着宽带网络的普及,摄像头已经不再是陌生的产品了。相较而言,摄像头属于技术含量比较小的产品。在挑选摄像头的时候注重的就是摄像头材料、象素、接口这几个考虑因素。

跨界公羊 道奇酷博2.0SXT

道奇正式进入国内，是在2007年的上海车展，对于这头并不熟悉的“公羊”，我最初的认识还依旧停留在它开创了大马力汽车的先河，拥有着蝰蛇这种能与法拉利和兰博基尼匹敌的超跑。随着跨界的风潮让许多人对此趋之若鹜，轿车、SUV与MPV的混血概念逐渐潜移默化地颠覆了汽车的传统风格。恍然间，道奇便以大胆的设计让“公羊”徽标成为城市中瞩目的焦点，而酷博便成为美式礼教下鲜有的跨界车型。

基于产毒基因sxtA的qPCR方法在长江口邻近海域有毒藻类检测中的应用初探

麻痹性贝毒(paralytic shellfish toxins)包括石房蛤毒素(saxitoxin)及其同系物,是一类具有神经毒性的生物毒素,主要由甲藻和蓝藻产生。近年来,在蓝藻和甲藻中相继发现了一些与石房蛤毒素合成密切相关的基因,并建立了基于特定产毒基因的有毒藻类检测方法。长江口邻近海域是我国近海有害藻华的高发区,本研究尝试应用基于麻痹性贝毒产毒基因sxt A的q PCR检测方法,与有毒塔玛亚历山大藻复合种(I型和IV型)的q PCR检测方法和麻痹性贝毒的高效液相色谱方法相结合,对2013年春季长江口邻近海域两条断面上有毒藻和藻毒素的分布及变动情况进行了分析。结果表明,基于sxt A的q PCR检测结果与IV型塔玛亚历山大藻复合种的数量存在较好的相关性(r2=0.52,P<0.05),说明IV型塔玛亚历山大藻复合种是采样期间长江口邻近海域麻痹性贝毒的主要来源;而样品中藻毒素含量与两种q PCR方法得到的有毒藻数量之间并没有明显相关性。可见,基于产毒基因的检测方法在长江口邻近海域有毒藻类检测中具有一定优势,但不足以准确反映该海域藻毒素的水平。

细菌整合性接合元件SXT／R391研究进展

SXT/R391家族是整合性接合元件中多样性最为丰富、成员最多的一个家族。SXT/R391包括保守的核基因以及可变区基因,SXT/R391保守的核心基因主要涉及SXT/R391的整合/剪切、自我接合转移、元件表达的调节。SXT/R391可变区基因的编码产物主要负责宿主对抗生素的耐药性、重金属离子抗性、生物膜形成和细菌运动能力的调节,编码毒素-抗毒素系统以阻止SXT/R391从宿主丢失。一些SXT/R391也编码限制性修饰系统、解旋酶、核酸内切酶。SXT/R391受SetCD正性调控,受SetR负性调控。SXT/R391接合转移过程不会导致其在原供体菌基因组丢失。SXT/R391可以阻止细胞获得其它密切相关的同类SXT/R391但不排斥异质性ICE获得,在SXT/R391自身编码的重组系统作用下获得的异质性ICE导致杂合ICE的产生。SXT/R391具有相当高的转移频率和宽广宿主范围,目前已经有超过40个不同类型的SXT/R391在不同种属的细菌中被发现,以弧菌为最多。已知的SXT/R391集中出现在非洲和亚洲沿海地区,且来源多为海洋细菌,表明海洋环境很可能是SXT/R391主要的贮藏库,并且经由海洋环境株向临床株扩散。日益增加的选择压力很可能加速了SXT/R391的传播。鉴于SXT/R391的转移和盛行带来的风险,卫生部门以及医学微生物科学家应对其扩散保持充分警惕。

抗生素对溶藻弧菌SXT/R391元件转移频率的影响

【目的】研究萘啶酸、诺氟沙星、卡那霉素3种抗生素对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)SXT/R391元件ICEVal A056-1转移频率的影响。【方法】利用PCR检测溶藻弧菌A056中ICEVal A056-1的自我剪切、转移潜力。通过溶藻弧菌A056与大肠杆菌菌株VB111的接合实验,研究溶藻弧菌分别在含不同浓度萘啶酸、诺氟沙星、卡那霉素的LB培养基中培养15 min或30 min后,ICEVal A056-1转移频率的变化规律。【结果】溶藻弧菌A056细胞中有环状形式的ICEVal A056-1分子存在,具有水平转移潜力;溶藻弧菌A056在含40μg/m L萘啶酸的LB中培养30 min后,ICEVal A056-1转移频率是对照组的19.59倍;在含50μg/m L诺氟沙星的LB中培养15 min后,ICEVal A056-1转移频率是对照组的31.25倍;在含不同浓度卡那霉素的LB中培养30 min后,ICEVal A056-1转移频率与对照组没有显著差别。【结论】部分抗生素的使用可以明显促进溶藻弧菌ICEVal A056-1向大肠杆菌的转移,因此海洋环境中抗生素的滥用及随意排放很可能加剧ICEs(integrating conjugative elements)从溶藻弧菌到其他细菌的传播。

基于重组酶聚合酶扩增技术快速检测霍乱弧菌中SXT元件

目的利用重组酶聚合酶扩增技术与测流层析相结合方法建立霍乱弧菌中SXT元件的快速检测方法。方法基于SXT元件的保守区设计重组酶聚合酶扩增方法的引物及探针,评价该方法的特异度及灵敏度。结果该方法可检测核酸浓度最低为20拷贝/μl,与实时荧光定量PCR方法的检测下限相近,且特异性较好。结论该检测方法操作简单,特异性良好,敏感度高且无需大型精密实验设备,适合现场使用。

一株同时携带SGI1和SXT/R391耐药基因岛的奇异变形杆菌

目的分析1株人源奇异变形杆菌CA151922的2个耐药相关基因岛SGI1和SXT/R391的基因结构和耐药基因。方法聚合酶链式反应(PCR)检测SGI1和SXT/R391基因岛特异性整合酶基因,采用二代测序方法测定CA151922基因组。分别以SGI1和SXT/R391基因岛的参考序列,从基因组序列中提取基因岛片段并组装。在线预测并注释开放读码框(ORFs)。基因岛的同源序列通过在线工具BLASTn获得,采用cd-hit获得非冗余的同源基因,利用R语言构建同源基因的聚类进化关系树。利用微量肉汤稀释法进行耐药表型检测。结果奇异变形杆菌CA151922同时含有SGI1(SGI1-B)和SXT/R391(ICEPmi Jpn1)2个耐药相关基因岛。SGI1-B和ICEPmi Jpn1与已知序列相似性分别为97%~99%和96%~99%。SGI1-B和ICEPmi Jpn1携带的耐药基因种类有所差异,但两者携带不同的编码β-内酰胺酶的基因。CA151922为多耐药菌株,耐药达18种,与基因岛耐药基因有关的耐药表型为氨苄西林和磺胺类药物,提示菌株耐药表型不完全由该耐药岛内的耐药基因决定。结论首次在奇异变形杆菌中发现,同时携带SGI1和SXT/R391耐药相关基因岛,增加了菌株耐药的复杂性和严重性,提示应加强对多耐药菌株耐药相关基因岛的监测。

霍乱弧菌多重耐药及SXT耐药相关基因初步研究

目的研究福建省霍乱弧菌多重耐药情况,分析耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1与复方磺胺甲噁唑耐药表型的相关性。方法选取100株1994-2005年福建省保留的霍乱弧菌菌株,采用WHO推荐的改良K-B纸片法进行21种抗生素的敏感性试验。PCR方法检测耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1。使用SPSS软件分析耐药基因与耐药表型的相关性,采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果福建省霍乱弧菌试验菌株对呋喃妥因、痢特灵、链霉素、多黏菌素B、磺胺甲噁唑、复方磺胺甲噁唑耐药严重,多重耐药率为63%。耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1与复方磺胺甲噁唑耐药表型相关。结论福建省霍乱弧菌的多重耐药率高,初步研究发现了复方磺胺甲噁唑相关的耐药基因,进一步需要研究更多的耐药分子机制。

霍乱弧菌O1群和O139群基因分型方法

构建SXT整合酶基因扩增BcII内切酶消化体系,建立霍乱弧菌O1群和O139群的快速检测,根据SXT基因设计合成引物,PCR扩增目的片断,对PCR产物用BcII限制性内切酶酶切分析。结果显示:50株菌株的检出率为100%,扩增产物及酶切片段与预期的靶序列长度和限制酶谱分析相一致。扩增霍乱弧菌O1群和O139群的SXT整合酶基因并经过BcII内切酶酶切分型的方法简易、快速、特异性好,为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。

一起O139群霍乱弧菌引起的食物中毒菌株的耐药性分析

目的:探讨多重耐药O139群霍乱弧菌形成的可能分子机制。方法:对杭州一起暴发的65株O139群霍乱菌株进行药敏试验,取其中20株多重耐药菌株进行结合性转座子样SXT元件标志基因intSXT和Ⅰ类整合子的PCR检测,并对Ⅰ类整合子基因盒区扩增产物应用限制性酶切和DNA测序分析携带的基因盒。结果:65株O139群霍乱菌株中,56株(86.2%)均呈同一耐药谱,对11种抗生素多重耐药,仅对诺氟沙星、环丙沙星及丁胺卡那敏感。20株多重耐药菌株中,SXT元件标志基因intSXT均阳性,Ⅰ类整合子5′保守区、基因盒区和3′保守区也均阳性。其携带基因盒为氨基糖苷腺苷酰基转移酶基因aadA2。结论:此次暴发的多重耐药的O139群菌株均携带有SXT元件,Ⅰ类整合子在多重耐药菌株的形成中起了一定的作用。

云南滇池海埂水域产毒蓝藻产毒基因的多样性研究

蓝藻水华是世界范围关注的重大环境问题,产毒蓝藻所产生的蓝藻毒素严重危害水生态安全和人类健康。为了解云南滇池产毒蓝藻产毒基因的多样性,针对产毒蓝藻特有的微囊藻毒素合成酶基因mcyE、鱼腥藻毒素合成酶基因anaC和麻痹性贝类毒素合成酶基因sxtA,采用常规PCR技术,于2017年3月—2018年2月对滇池海埂水域产毒蓝藻种类和产毒基因多样性进行研究。结果表明,在云南滇池海埂水域样品中均检测到蓝藻产毒基因mcyE、anaC和sxtA。通过TA克隆测序得到基因序列并构建进化树分析发现,滇池海埂水域中3种蓝藻产毒基因多样性较单一,mcyE基因主要由微囊藻属藻类产生,anaC和sxtA基因主要由束丝藻属藻类产生。

登高平台消防车在实训教学中的使用安全要求及操作方法

阐述SXT5260JXFDG32型登高平台消防车的性能、结构特点,提出使用安全要求,设计SXT5260JXFDG32型登高平台消防车在消防部队院校实训教学中的一套操作方法,便于引导操作员在实训教学中配合教员的讲解进行示范,从而使学员能够直观地了解高平台消防车的基本结构、理解登高平台消防车的性能,掌握登高平台消防车的操作方法,增强登高平台消防车的安全操作意识,为今后在灭火救援实战中运用登高平台消防车打下坚实基础.

骨关节炎关节置换术后诺卡氏菌感染的实验诊断与治疗

报告一例膝关节置换术后发生诺卡氏菌感染病例。患者于双膝关节置换术后一月出现右膝关节感染症状，经细菌培养结果示诺卡氏菌感染，行常规抗感染治疗，感染症状始终未控制。在试探性使用磺胺药物后控制了感染。患者连续多次培养出诺卡氏菌，值得临床和实验室工作人员重视。

新国科 新方向——访ABBA国科精工(上海)有限公司总经理王辉

MC记者：“New ABBA New Linear Tech”，SKF并购ABBA之后带来了哪些变化？王辉总经理（以下简称王总）：SKF作为全球最大的轴承工业集团，旗下拥有轴承和轴承单元、密封件、机电一体化产品、润滑及服务五大技术平台。并购ABBA以来，SKF集团一直以提升ABBA产品品质及品牌价值作为最重要的使命。

基于标准加入法和多水平的药代动力学综合分析疏血通注射液中不稳定的次黄嘌呤(潜在的质量标志物)

[目的]作为一种中药注射制剂,舒血通注射液用于治疗缺血性脑卒中。次黄嘌呤是其潜在的质量标志物之一。本研究的目的是通过对次黄嘌呤的定量和药代动力学行为分析为疏血通注射液的质量控制奠定基础。[方法]应用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)首次建立了基于标准加入法的疏血通注射液中次黄嘌呤的定量方法。另一方面,也成功建立了基于LC-MS/MS的大鼠给药后血浆样品中次黄嘌呤的测定方法。[结果]对于相同批次的疏血通注射液,采用常规的液质联用技术测出的次黄嘌呤的浓度大于LC-MS/MS联合标准加入法测出的次黄嘌呤的浓度。单次静脉注射疏血通注射液的低、中、高剂量比为1:2:4,AUC0-t分别为(848.34±324.53)μg·h/L、(1483.94±497.74)μg·h/L,(3074.84±910.29)μg·h/L,剂量呈良好的线性依赖关系。[结论]标准加入法的引入可校正目标化合物的浓度,进而消除内源性物质的影响。别嘌呤出可抑制次黄嘌呤的转化以保证药代动力学研究中检测的准确性。通过空白血浆前处理获得的“空白生物基质”成功区分了内源性和药源性的次黄嘌呤。静脉注射次黄嘌呤血药浓度与给药剂量呈良好的线性关系。同样,多次给药中剂量组也没有药物蓄积,这与单次给药中剂量组的药代动力学特征是相似的。

疏血通注射液联合磷酸肌酸钠治疗急性冠脉综合征65例临床疗效观察

目的:探讨疏血通注射液联合磷酸肌酸钠治疗急性冠脉综合征的临床疗效。方法:以130例急性冠脉综合征患者为研究对象,采取双盲、随机、双模拟和对照研究的方法,将其分为治疗组及对照组,各65例,两组患者均行常规处理,对照组患者单药疏血通注射液治疗,观察组患者应用疏血通注射液联合磷酸肌酸钠治疗,比较两组患者临床症状及生化指标改善情况。结果:治疗组患者临床症状、血浆生化指标改善均优于对照组,两组患者比较差异明显有统计学意义(P<0.05)。结论:疏血通注射液联合磷酸肌酸钠治疗急性冠脉综合征,可明显降低患者CRP、BNP水平,对于改善患者心肌缺血,提高患者生活质量有积极意义。

整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用

为了建立一种能同时检测1类整合子、4类超级整合子和1型插入序列共同区的多重PCR检测方法,根据Gen Bank中1类整合子整合酶基因int1、4类超级整合子整合酶基因intSXT和1型插入序列共同区转座酶基因ISCR1的序列,应用Primer Plex 2.61设计3对特异性引物,通过改变引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行了优化。此后,评价了所建立多重PCR体系的特异性和灵敏度,并应用于222株海水养殖源弧菌中3种整合子相关元件的检测。结果显示,设计的3对引物能分别单独且特异性地扩增出569 bp、430 bp和651 bp的目的条带;当int1、intSXT和ISCR13对引物(10 pmol/μL)的体积依次为0.3μL、0.6μL和0.6μL,退火温度为50℃时,多重PCR体系能特异性地扩增出3个条带清晰、区分度良好的目的条带,方法的灵敏度达到0.02 ng/μL弧菌基因组模板DNA;利用所建立的方法对222株临床分离弧菌进行3种整合子元件检测得到的结果与文献报道的单引物检测结果一致。从上述研究结果可以看出,该多重PCR方法能快速准确地检测Int1、SXT和ISCR1,适用于整合子相关元件流行监测及整合子相关的耐药性研究。