1994年～2004年杭州地区O139群霍乱弧菌携SXT元件和整合子的特征

目的了解杭州地区O139群霍乱弧菌菌株携带SXT元件和整合子的特征。方法对1994年～2004年杭州地区腹泻患者分离的ctxA阳性霍乱弧菌O139群菌株25株（1994年～2004年）、O1群菌株（1997年～2001年）18株，应用PCR进行SXT元件和Ⅰ类整合子检测，并对Ⅰ类整合子携带的基因盒进行核酸序列测定，同时检测菌株对10种抗生素的耐药谱。结果1994年分离的浙江省首株O139群菌株即开始携带SXT元件。1994年～2004年分离的25株O139群菌株中，SXT元件携带率为96．00％（24／25）；18株O1群菌株（1997年～2001年）均属O139群出现后分离的，SXT元件为83．33％（15／18）。Ⅰ类整合子最早出现于1998年分离的O139群菌株，总阳性率为60．00％（15／25）；在2000年以后检出的O139群菌株中，携带率为81．25％（13／16）；Ⅰ类整合子中的基因盒阵列有两种：一为aadA2，占93．33％（14／15）；另一为dfrAI2＋orfF＋aadA3c，占6．67％（1／15）。18株O1群菌株（1997年～2001年）中未发现有Ⅰ类整合子。结论SXT元件在O139群（1994年～2004年）和O1群（1997年～2001年）霍乱弧菌中有较高的携带率。Ⅰ类整合子在2000年以后检出的O139群菌株中有较高的携带率。携带的基因盒提示，O139群菌株与其他细菌可能通过Ⅰ类整合子途经交换对抗生素耐药基因。

基于重组酶聚合酶扩增技术快速检测霍乱弧菌中SXT元件

目的利用重组酶聚合酶扩增技术与测流层析相结合方法建立霍乱弧菌中SXT元件的快速检测方法。方法基于SXT元件的保守区设计重组酶聚合酶扩增方法的引物及探针,评价该方法的特异度及灵敏度。结果该方法可检测核酸浓度最低为20拷贝/μl,与实时荧光定量PCR方法的检测下限相近,且特异性较好。结论该检测方法操作简单,特异性良好,敏感度高且无需大型精密实验设备,适合现场使用。

一起O139群霍乱弧菌引起的食物中毒菌株的耐药性分析

目的:探讨多重耐药O139群霍乱弧菌形成的可能分子机制。方法:对杭州一起暴发的65株O139群霍乱菌株进行药敏试验,取其中20株多重耐药菌株进行结合性转座子样SXT元件标志基因intSXT和Ⅰ类整合子的PCR检测,并对Ⅰ类整合子基因盒区扩增产物应用限制性酶切和DNA测序分析携带的基因盒。结果:65株O139群霍乱菌株中,56株(86.2%)均呈同一耐药谱,对11种抗生素多重耐药,仅对诺氟沙星、环丙沙星及丁胺卡那敏感。20株多重耐药菌株中,SXT元件标志基因intSXT均阳性,Ⅰ类整合子5′保守区、基因盒区和3′保守区也均阳性。其携带基因盒为氨基糖苷腺苷酰基转移酶基因aadA2。结论:此次暴发的多重耐药的O139群菌株均携带有SXT元件,Ⅰ类整合子在多重耐药菌株的形成中起了一定的作用。