盐酸普鲁卡因对人肝癌HepG2细胞Syk基因甲基化的影响

为探讨盐酸普鲁卡因(procaine,PCA)对人肝癌HepG2细胞Syk基因甲基化的影响,应用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测盐酸普鲁卡因处理前后HepG2细胞中Syk基因启动子的甲基化水平;采用蛋白印迹技术观察Syk蛋白表达情况。结果显示,MSP检测到人肝癌HepG2细胞中Syk基因发生甲基化,随盐酸普鲁卡因浓度升高和时间的延长Syk基因甲基化水平逐渐降低;蛋白印迹结果表明,Syk蛋白在HepG2细胞中低表达,经盐酸普鲁卡因处理可以上调Syk蛋白的表达。人肝癌HepG2细胞中Syk基因启动子区域发生甲基化可能是肝癌发病的机制之一;盐酸普鲁卡因能降低Syk基因启动子区域CpG岛甲基化,并使Syk蛋白表达上调。

盐酸普鲁卡因对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响

旨在探讨盐酸普鲁卡因(procaine,PCA)对人结肠癌HT-29细胞Syk基因甲基化及表达的影响。应用巢式双重甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测盐酸普鲁卡因处理前后HT-29细胞中Syk基因启动子的甲基化水平。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术观察HT-29细胞内Syk基因表达情况。MSP检测发现人结肠癌HT-29细胞中Syk基因存在甲基化,经盐酸普鲁卡因处理能够使Syk基因甲基化水平下降。RT-PCR和蛋白印迹分析结果显示,人结肠癌HT-29细胞经盐酸普鲁卡因处理后Syk基因表达上调。人结肠癌HT-29细胞中Syk基因启动子甲基化导致基因表达沉默,盐酸普鲁卡因能逆转Syk基因启动子区域CpG岛甲基化,使Syk基因活化并表达上调,提示盐酸普鲁卡因具有治疗结肠癌的潜在应用价值。

Syk基因甲基化和肝癌术后复发转移关系的研究

目的探讨肝癌组织Syk基因启动子甲基化改变的特点,及其与肝癌术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法检测Syk基因启动子甲基化情况,结合随访结果,探讨Syk基因启动子甲基化和肝癌术后复发转移的关系。结果在64例肝癌组织标本中,有19例检测到Syk基因启动子甲基化,发生率为29.7%;在对应癌周正常肝组织中,只有2例检测到Syk基因启动子甲基化,发生率为3.1%。癌组织Syk基因启动子甲基化发生率显著增高(P<0.005)。在19例癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,有14例术后发生癌复发转移,发生率为73.7%;在45例癌组织未检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,只有19例术后发生癌复发转移,发生率为42.2%。癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者术后复发转移发生率显著增高(P<0.05)。结论Syk基因启动子甲基化可能是肝癌发生发展过程中重要的机制之一。肝癌组织Syk基因启动子甲基化可能是预测患者术后复发转移潜在的生物标记物。

Syk基因甲基化在肝癌中的研究进展及展望

脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)是一种造血细胞特异性的信号分子,被认为是一种候选抑癌基因。DNA甲基化是肿瘤发生发展过程中较常见的表观遗传学改变,它与肿瘤的关系己成为肿瘤发病机制研究中的热点。本文综述了Syk基因甲基化的研究现状和它在肝癌中的表达情况及其与肿瘤发生、发展、转移的关系。

Syk基因启动子甲基化与肝癌术后复发转移相关性研究

目的探讨Syk基因启动子甲基化与肝癌术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法检测Syk基因启动子甲基化情况,结合随访结果,探讨Syk基因启动子甲基化和肝癌术后复发转移的关系。结果在21例癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,有15例术后发生癌复发转移,发生率为71.4%;在56例癌组织未检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者中,只有21例术后发生癌复发转移,发生率为37.5%。癌组织检测到Syk基因启动子甲基化的肝癌患者术后复发转移发生率显著增高(P<0.05)。结论Syk基因启动子甲基化与肝癌术后复发转移密切相关。

胃癌组织中Syk基因甲基化状态及临床意义

目的探讨胃腺癌患者肿瘤组织、癌旁组织中Syk基因的甲基化状态与临床病理特征及预后的关系。方法应用Real—time甲基化特异性聚合酶联反应技术（MSP）检测92例胃腺癌患者肿瘤组织、配对的癌旁组织中Syk基因的甲基化状态，并分析其与临床病理因素及预后之间的关系。选取40例年龄对应的健康志愿者及48例非萎缩性胃炎患者胃镜获取的组织DNA作对照。结果胃腺癌患者肿瘤组织中检测到Syk基因甲基化有33．7％（31／92），明显高于癌旁组织54％（5／92）。健康对照者和胃炎患者均无Syk基因甲基化。Syk基因甲基化与肿瘤大小、生长方式、分化程度、是否有静脉或淋巴管侵犯、TNM分期有关（17〈005）。结论胃腺癌患者Syk基因甲基化与肿瘤的生物学行为有关，提示肿瘤进展，预后不佳。

结肠癌组织Syk基因表达程度与其临床意义

目的通过检测结肠癌组织中Syk基因表达程度,探讨其临床意义。方法收集58例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组化SP法(链霉素抗生物素一过氧化物酶),检测结肠癌组织及癌旁组织Syk基因表达程度,并分析其与年龄、性别、肿瘤分化及分期等临床病理、术后复发转移及5年生存率的关系。结果结肠癌组织中Syk基因表达率低于正常癌旁组织(<0.01)。不同TNM分期中Syk基因的表达程度差异有统计学意义(<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的表达差异有统计学意义(<0.01);不同分化程度、性别、年龄的Syk基因表达差异均无统计学意义(均>0.05)。结肠癌复发23例,阳性表达4例(17.4%),阴性19例(82.6%);无复发35例,阳性表达20例(57.1%),阴性15例(42.9%)。Syk基因在术后有复发和无复发的患者中表达程度差异有统计学意义(<0.01)。Syk基因表达组5年生存率为79.2%,Syk未表达组5年生存率为58.8%;两者整体生存率比较差异有统计学意义(=0.044)。结论 Syk基因的失表达与结肠癌的发生、TNM分期、术后复发转移和5年生存率显著相关。

Syk基因转染对人结肠癌细胞系影响的实验研究

目的构建Syk基因逆转录病毒载体,并观察其对人结肠癌细胞生物学特性的影响。方法通过RT-PCR扩增出Syk基因的部分cDNA片段,将其插入到逆转录病毒载体pLNCX上,构建成Syk基因的表达载体,并经酶切鉴定和测序确认。将Syk基因表达载体经脂质体介导转染人结肠腺癌细胞系LoVo,筛选出Syk基因稳定表达的细胞株,通过Southern blot检测Syk基因的整合;RT-PCR及DNA测序法检测Syk基因的转录;通过Western blot检测转染细胞Syk基因的表达;二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果 Syk基因已整合入细胞并获稳定表达,并显著抑制人结肠腺癌细胞LoVo的增殖。结论 Syk基因逆转录病毒载体通过外源Syk基因mRNA水平的表达,从而抑制人结肠腺癌细胞的生长。

SYK基因激活对人胃癌SGC7901细胞株VEGF表达的影响

目的利用去甲基化酶5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-CDR)对脾酪氨酸激酶(Syk)基因激活的作用,观察Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而研究Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响。方法检测用5-aza-CDR处理后的人胃癌SGC7901细胞株的生长情况、SYK基因的表达水平及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平,与未接触5-aza-CDR的对照组进行对比。结果经5-aza-CDR处理过的人胃癌SGC-7901细胞株的生长明显受抑;该细胞株SYK基因的表达水平较对照组明显升高,血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平较对照组明显减弱(P<0.05)。结论 Syk基因的表达能够抑制人胃癌SGC-7901细胞株生长,抑制该细胞株VEGF的表达。血管内皮生长因子(VEGF)的表达抑制可能是SYK基因的激活,从而抑制该细胞株的生长和转移的机制之一。

天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究

目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物。方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响。结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性。TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低。结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物。

B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区甲基化及5-aza-CDR对细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区5′CpG甲基化情况及甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-az-a-CDR)对淋巴瘤细胞的作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测人B淋巴瘤细胞株Raji和Ramos中Syk mRNA的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子区甲基化情况;采用MTT法检测5-aza-CDR对细胞增殖作用的影响,应用DNA凝胶电泳、流式细胞技术和电镜分析5-aza-CDR对B淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和超微结构的影响。结果:Raji细胞Syk基因呈阳性表达,Ramos细胞未检测出Syk mRNA表达。Raji和Ramos细胞中均未检测到Syk基因启动子区的甲基化状态。5-aza-CDR可明显抑制Raji和Ramos细胞增殖,P<0.05;并存在明显的量效和时效依赖关系。5-aza-CDR可诱导Raji和Ramos细胞凋亡,P<0.05。DNA凝胶电泳检测结果显示明显的"DNAladder",并且有明显的细胞凋亡超微结构变化。然而,5-aza-CDR对Raji和Ramos细胞周期未见明显影响。结论:在Raji和Ramos细胞中,Syk基因沉默可能与甲基化无关;5-aza-CDR能明显抑制B淋巴瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期无明显影响。

子宫内膜癌中Syk基因的表达及其甲基化分析

目的探讨Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达及其启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法采用RT-PCR方法检测52例子宫内膜癌及癌周组织、30例子宫内膜不典型增生、28例复杂型増生、30例单纯型增生和40例正常内膜组织中Syk mRNA的表达情况,同时采用MSP方法检测其基因启动子甲基化情况。结果在子宫内膜癌组、癌周组织、不典型增生组、复杂和单纯型增生及正常子宫内膜组中Syk基因表达依次增高,Syk基因甲基化程度依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syk基因表达水平及其基因启动子甲基化程度在复杂型增生、单纯型增生及正常子宫内膜间的差异无显著性(P>0.05);子宫内膜癌中Syk基因的阳性表达及甲基化程度与癌症的临床分期(χ2=4.65,P<0.01;χ2=4.33,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=10.68,P<0.01;χ2=5.86,P<0.05)、肌层浸润深度(χ2=5.82,P<0.05;χ2=3.90,P<0.05)相关,而与内膜癌组织学分级无明显相关性(χ2=0.03,P>0.05;χ2=0.94,P>0.05)。Syk基因启动子甲基化与Syk基因表达缺失明显相关(P<0.05)。结论 Syk基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌发生发展有关。

酪氨酸激酶Syk基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨酪氨酸激酶Syk基因表达与乳腺癌生成及转移的关系 ,以及与雌激素受体(ER)、孕激素受体 (PR)、p5 3、HER2 /neu基因的关系。方法 用半定量逆转录聚合酶链反应检测 4 0例乳腺癌患者癌组织及癌旁正常乳腺组织以及 15例良性乳房纤维瘤组织中SykmRNA的表达 ,并用免疫组化方法检测 4 0例乳腺癌组织中ER、PR、p5 3、HER2 /neu的表达的情况。结果 所有正常乳腺组织都有Syk基因的表达 ,而 4 0例乳腺癌组织中只有 9例表达 ,正常乳腺与乳腺癌组织中Syk基因表达率差异有显著意义 (χ2 =4 7 4 ,P <0 0 5 ) ,且乳腺癌组织中SykmRNA含量明显低于正常乳腺组织 (t =3 4 1,P <0 0 5 )。有淋巴结转移的 18例乳腺癌组织中 ,1例有Syk基因表达 ,有淋巴结转移的乳腺癌SykmRNA的表达率和表达水平显著降低 (χ2 =3 77,P <0 0 5 ,t=2 74 ,P <0 0 5 )。SykmRNA表达与 p5 3基因的表达呈正相关。

鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化与其mRNA和蛋白质表达情况之间的关系。方法:培养鼻咽癌细胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞株(NP69),采用MS-PCR和Q-RT-PCR及Western Blot方法检测各细胞株中Syk基因的甲基化和Syk mRNA及Syk蛋白表达。结果:MS-PCR法检出CNE-1和CNE-2细胞Syk启动子甲基化率分别为36%±3.6%和62%±4.5%,而NP69未检测到甲基化;Q-RT-PCR法检出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为42%±3.5%和28%±2%;WesternBlot法检出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为36%±4.5%和16%±2.5%。均有统计学意义(P<0.01)。结论:在分化程度较低的鼻咽癌细胞中,Syk基因启动子甲基化程度较高,则Syk基因mRNA与蛋白的表达较低。Syk基因mRNA和蛋白的表达与Syk基因启动子甲基化程度呈负相关。

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导鼻咽癌细胞株Syk基因启动子去甲基化的研究

利用5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用BS-PCR、Q-RT-PCR及Westernblot方法分别检测经5μmol/L的5-aza-CdR处理前后,各细胞株中Syk基因启动子甲基化状况及SykmRNA和蛋白质表达情况。探讨去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对鼻咽癌细胞株中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)启动子甲基化水平及其表达的影响。结果显示,Syk基因启动子甲基化水平与鼻咽癌细胞分化程度呈负相关,两种鼻咽癌细胞株的Syk mRNA和蛋白质表达水平显著低于NP-69细胞(P<0.01);经5-aza-CdR处理后两种鼻咽癌细胞株的Syk基因启动子甲基化水平降低,Syk mRNA及蛋白质表达升高(P<0.05);高分化鼻咽癌细胞株对药物敏感性高于低分化鼻咽癌细胞株(P<0.01)。由此可见,两种鼻咽癌细胞株中存在不同程度的Syk基因启动子甲基化状态,5-aza-CdR能有效逆转鼻咽癌细胞株Syk基因启动子的甲基化状态,升高Syk mRNA及蛋白质表达,同时鼻咽癌细胞分化程度越高恢复Syk基因表达的比率越高。

胃癌术后复发转移与抑癌基因Syk启动子甲基化的研究

目的研究胃癌组织中Syk基因启动子甲基化与术后复发转移的关系。方法采用甲基化特异性PCR法检测胃癌组织及癌旁正常胃组织的Syk基因启动子甲基化状态。结果在70例胃癌组织中,Syk基因启动子甲基化发生率为45.7%(32/70);在癌旁正常组织发生率分别为0(0/70);在胃癌组织中,Syk基因甲基化发生率明显高于癌旁正常组织(P<0.001)。检测到Syk基因启动子甲基化的32例病例中,有21例病例术后发生复发转移,发生率为65.6%(21/32);在未检测到Syk基因启动子甲基化的38例病例中,仅有7例病例术后发生复发转移,发生率为18.4%(7/38)(P<0.001)。结论 (1)Syk基因启动子甲基化与胃癌术后复发转移密切相关。(2)胃癌组织中Syk基因启动子甲基化的检测有助于胃癌术后复发转移的早期诊断及预后评估。

Syk基因启动子去甲基化对鼻咽癌细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨去甲基化药物5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-CdR)对鼻咽癌5-8F细胞Syk基因启动子去甲基化作用及其侵袭转移的影响。方法:利用5-aza-CdR处理体外培养的5-8F细胞,采用BS-PCR、Q-RT-PCR、Western Blot及Transwell方法分别检测药物干预前后5-8F细胞中Syk甲基化、Syk mRNA、Syk蛋白及穿膜细胞数的情况。结果:经5-aza-CdR处理后5-8F细胞株的甲基化水平降低(P<0.01),Syk mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),其侵袭及转移能力降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:鼻咽癌细胞Syk基因启动子甲基化导致其基因沉默,Syk基因失表达,从而引起鼻咽癌细胞的侵袭转移能力增加,5-aza-CdR可以使鼻咽癌细胞Syk基因启动子去甲基化,使因甲基化沉默的Syk基因重新表达,恢复其抑制肿瘤细胞侵袭转移的能力。

SYK基因是眼癌的一个治疗目标

眼癌是一种罕见的、侵略性的儿童期视网膜癌症，由RB1基因的失去引起。现在，对4个眼癌样本所作的全基因组测序表明，眼癌基因组是相对稳定的，在人类癌症中突变率是最低的之一，同时在其他肿瘤抑制因子或致癌通道中所发生的突变也很少。然而，RB1基因的失去与几个癌症通道由非基因因素（外成因素）造成的失控有关。