SYMPHONY^(■)琼脂与孟加拉红琼脂用于霉菌检测的比较研究

文章选取通过ISO 16140-2:2016标准验证,同时获得IFNOR认证BKR23/11-12/18的SYMPHONY^(■)琼脂与国标法孟加拉红琼脂进行标准定量菌株的计数一致性确定,并对比不同时间下菌落的生长形态,以确定SYMPHONY^(■)琼脂的计数准确性和判读优势。结果表明,SYMPHONY^(■)琼脂与孟加拉红琼脂均处于标准定量菌株的质控范围内,并且从菌落形态上来看,SYMPHONY^(■)琼脂抑制菌落过快生长的作用显著优于孟加拉红琼脂培养基,可以更好地减少判读误差,提高计数准确性。

牛羊布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验的建立与应用

【目的】建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品。【方法】建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2287份、非免疫地区252份牛、羊血清。【结果】建立了NH-AGID方法,检测稳定,重复性好,具有较高的特异性;对自然感染阳性动物检测敏感性低于80%,对排菌动物的检测敏感性高于90%,检出布病阳性抗体的阈值高于RBT。免疫地区血清NH抗体平均检出率17.8%,LPS抗体平均检出率52.3%;非免疫地区血清NH抗体平均检出率40.9%,LPS抗体平均检出率54.8%。【结论】应用NH-AGID方法可鉴别区分免疫地区牛、羊布病感染动物和免疫动物。检出NH抗体动物处于布鲁氏菌活动期或排菌期为布病感染动物,应及时剔除出群。

凹凸棒/琼脂复合气凝胶的制备及太阳能界面蒸发性能

太阳能界面蒸发是一种新兴的、可持续海水淡化和废水净化方法,在缓解淡水资源短缺方面具有巨大的潜力。本研究以凹凸棒和琼脂为原料,通过物理混合、冷冻干燥、交联反应等步骤制备得到凹凸棒/琼脂复合气凝胶(AACA),AACA具有分级多孔结构、优异的隔热性能以及超亲水性能。为了提高材料的光吸收性能,对AACA的表面进行聚吡咯(PPy)喷涂,制备得到了光热转换材料PPy-AACA,其在250~2500nm范围内的平均光吸收率可达到97.7%。以PPy-AACA作为太阳能界面蒸发器,在1个太阳的光照强度下(1k W/m^(2)),PPy-AACA的蒸发速率为1.5012kg/(m^(2)·h),能量转换效率为88.76%。PPy-AACA在循环蒸发实验和盐水蒸发实验中表现出优异的稳定性和抗盐性能。此外,该光热转换材料还证明了海水淡化和净化染料污水的能力,其盐离子和有机染料的截留率均大于99%。

扩散渗析回收琼脂生产废碱液工艺的响应面法优化

为了解决琼脂生产废碱液的资源化利用问题,利用扩散渗析装置对琼脂生产废碱液进行碱回收处理,并以料液流速、水/料流速比和温度为考察因素,以碱回收率和回收碱浓度为评价指标,进行3因素3水平的Box-Behnken中心组合实验设计,构建响应曲面模型,分析3个因素之间的交互作用对碱回收率和回收碱浓度的影响,确定扩散渗析法回收废碱液的最佳工艺条件。实验结果表明,当料液流速为0.75 L/(m^(2)·h)、水/料流速比为1.28、温度为65.5℃时,碱回收率达80%,获得的碱溶液浓度为1.14 mol/L,模型预测值与实验结果接近,模型可靠。这表明,扩散渗析能有效实现碱与有机物的分离,采用响应面法优化扩散渗析回收琼脂生产废碱液工艺是可行的。

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳综合实验设计

血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是生物化学实验课程中的经典实验,但因其操作单一、等待时间过长,学生的收获感不强,有必要进行综合设计。把上课时间分为三个时段,在各个时段设计多种学习活动:串讲原理、做练习题使相关知识融会贯通;阅读文献,提出疑问;设置试误样品组、做相关实验,启发学生顿悟。通过这些学习活动,学生不仅学会了电泳技术的基本操作,还深刻理解了实验原理,强化了勇于探索的科学精神,体会了顿悟的快乐。

基于琼脂糖微球金属螯合层析介质的制备及性能评价

以琼脂糖凝胶微球为研究对象,通过对微球进行化学交联与配体连接,制备系列金属螯合亲和层析介质,并测试其在模型蛋白中的吸附性能。首先,探究不同工艺条件对微球尺寸的影响。结果表明,在最优条件下,琼脂糖微球粒径集中在45~160µm之间,收率为95%,平均粒径为91.2µm。随后,以琼脂糖微球4B和6B为原料制备交联琼脂糖微球4FF(4FastFlow)和6FF(6FastFlow),调控交联剂滴加方式,探究不同因素对4FF微球机械强度的影响,所得4FF和6FF的最大流速分别达1190cm/h和2228cm/h。此外,本工作对制备的4FF微球进行复原性能测试及形貌表征,借助凝胶色谱法测定不同标准蛋白的保留体积,并计算有效分配系数。最后,以交联琼脂糖微球6FF为基质,制备葡聚糖接枝型金属螯合亲和层析介质,以单克隆抗体IgG为模型蛋白,探究不同条件对介质动态蛋白载量的影响。结果表明,介质的最高动态蛋白载量可达44.8mg/mL gel。本工作为琼脂糖微球的可控制备、改性,以及在生物蛋白分离纯化中的应用提供了新思路,也为后续扩大化生产奠定了基础。

甘油增塑剂浓度对羟丙基淀粉-琼脂复配软胶囊囊皮性能的影响

为寻求传统明胶软胶囊囊皮替代物,本研究以羟丙基淀粉(HPS)和琼脂(AG)为原料,甘油(G)为增塑剂,采用流延法成功制备了不同甘油含量的复配软胶囊囊皮;并探究甘油浓度对复配囊皮性能的影响,阐明其作用机理。红外结果表明,复配囊皮中HPS与AG之间存在氢键相互作用;热重结果表明甘油的添加使得HPS与AG相容性降低,随着甘油质量分数升高(0~20%,m/m),复配囊皮热稳定性提高;复配囊皮在600 nm处的吸光度先增大后减小,甘油含量10%(m/m)(10%G+HPS+AG)复配囊皮吸光度最大(0.60),遮光性好;复配囊皮水接触角(WCA)呈先增大后减小趋势,15%G+HPS+AG复配囊皮WCA最大(86.17°),疏水性好;拉伸测试结果表明,15%G+HPS+AG复配囊皮具备较好的杨氏模量(17.47 MPa),拉伸强度(3.17 MPa)和断裂伸长率(94.17%),满足稳定生产条件;与传统明胶囊皮相比,15%G+HPS+AG复配囊皮在干燥贮存条件下更加柔软,具备良好的储存稳定性,且原料均为非动物源,安全性更好。结果表明,HPS-AG复配体系在软胶囊囊皮领域表现出良好的应用潜力,为淀粉基软胶囊囊皮的工业化生产提供了理论基础。

巨大芽孢杆菌对江蓠植株琼脂直接脱硫工艺的建立及优化

为建立绿色便捷的琼脂脱硫工艺,以江蓠植株作为唯一硫源培养巨大芽孢杆菌进行琼脂脱硫。以脱硫菌的生长情况为评价指标,构建巨大芽孢杆菌对江蓠植株琼脂直接脱硫工艺,并优化江蓠植株脱硫工艺的灭菌方法、江蓠添加量和培养基各组分浓度。结果表明:江蓠植株琼脂在经过优化的脱硫工艺后,琼脂脱硫率达到37.985%,琼脂的凝胶强度由低于检测限提升至(200.263±7.121)g/cm^(2),发酵后的琼脂品质有明显的提升。

食品检验用木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂质量差异分析

为丰富我国食品微生物检验用培养基验收时的质控菌株,提高商品化培养基质量,该实验采用GB 4789.28-2013中规定的验收方法,以鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、福氏志贺氏菌CMCC 51572、金黄色葡萄球菌ATCC 6538和大肠埃希氏菌ATCC 25922为参照,选取6株鼠伤寒沙门氏菌、1株福氏志贺氏菌、4株金黄色葡萄球菌和5株大肠埃希氏菌对4个品牌的木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基(XyloseLysineDesoxycholateAgar,XLD)的外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标进行实验评价。结果显示A、B、C、D4个品牌培养基干粉颜色分别为粉红色,淡粉色、土黄色、粉白色;水分含量分别为5.55%,5.92%、5.46%、5.94%;配置100 mL添加量分别为5.54、5.89、5.69、5.70 g;pH值均符合7.4,6株鼠伤寒沙门氏菌和1株福氏志贺氏菌在4个品牌培养基上生长率均≥0.7,4株金黄色葡萄球菌均不生长,5株大肠埃希氏菌生长指数G均<5。综上,4个品牌的XLD培养基全部符合GB4789.28-2013,该实验所选菌株可用作验收XLD培养基质控菌株的补充菌株。

扩散渗析法应用于琼脂加工废碱液回收的研究

琼脂生产企业产生大量的废碱液,具有氢氧化钠和有机物含量高的特点。运用扩散渗析法从琼脂加工废碱液中回收碱,考察扩散时间、料液流速、水/料流速比、温度等因素对碱回收的影响。结果表明,碱回收率随料液流速的增大而逐渐下降,随水/料流速比的增大而增加,随温度升高而增加。当进料液中碱含量为1.5 mg/L、料液流速1.0 L/(m^(2)·h)、水/料流速比1.2、温度65℃、扩散时间为1.5 h时,碱回收率74.25%,可获得浓度为1.12 mol/L的碱液。研究表明,扩散渗析能有效实现碱与有机物的分离,所回收的碱液可重新用于琼脂生产。

基于营养琼脂培养基保温后浑浊问题与对策研究

营养琼脂培养基在50℃条件下保温18 h后,会出现浑浊现象,给无菌判定带来困难,同时也会影响菌落计数等微生物实验的准确性。为查明营养琼脂培养基在保温后出现浑浊现象的原因,以提高涉及该培养基的所有实验的准确性,文章通过复融法、磷酸盐沉淀法和初始菌控制法对其原因进行研究分析。实验结果表明,导致营养琼脂培养基在保温过程中出现浑浊现象的主要原因是培养基中初始菌含量过高,在121℃灭菌15 min的条件下无法全部灭活。针对验收过程中出现的保温浑浊问题,可以采用辐照灭菌的方法,将培养基以15~18 kgy的剂量进行辐照灭菌,降低初始菌含量,并在121℃的条件下灭菌15 min。

琼脂凝胶中气泡含量及间距对超声波衰减特性的影响

首先,基于声学探伤技术,采用透射法就琼脂凝胶中气泡对超声波传播的影响进行了试验研究;其次,用有限元分析软件对含气泡琼脂凝胶中的超声波传播进行了声学仿真。将试验结果和仿真结果进行对比,趋势一致结果符合良好,对琼脂凝胶中气泡尺寸、数量及间距对超声波衰减的影响分别进行了分析。结果表明:当气泡含量发生变化时,对超声波衰减起主要作用的是吸收衰减;当气泡含量一定时,气泡间距的改变对超声波的传播有着显著影响,随着间距的增加,声衰减逐渐增大,且随着频率增加声衰减逐渐减小。

琼脂糖微球凝胶制备、物理化学特性及其注射效果

为了解决目前市面上填充剂填充周期短以及注射风险高的问题,以琼脂糖为原料,采用乳化固化法制备出粒径均匀的琼脂糖微球凝胶,并探讨了上述微球凝胶的物理化学特性,评价其作为面部注射填充凝胶的可行性。在高频作用下,进行琼脂糖水溶液与油相的双相均质,得到小粒径琼脂糖微球,碱性条件下与固化剂进行固化反应得到可注射琼脂糖微球凝胶。利用平均粒径在25~40μm之间的小粒径微球进行凝胶制备,正交试验确认反应温度50℃,水浴振荡速率150 r/min,反应时间8 h为最优制备工艺。在30 mm/min条件下检测得到凝胶最大推挤力小于20 N,粘弹性测试结果表明凝胶形成了较为稳定的三维网络结构。同时,细胞毒性和家兔皮下植入后局部反应证明该凝胶作为填充剂具有良好的生物相容性,且降解速率慢,较透明质酸钠凝胶具有更长的填充周期。综合表明,琼脂糖微球凝胶作为一种新型的注射凝胶有望应用于整形美容领域。

胰酪大豆胨琼脂培养基比对研究

目的研究5个不同品牌胰酪大豆胨琼脂培养基产品信息标识差异,分析适用性检查结果,为提高检验检测效率,规范培养基生产和管理提供研究依据。方法比对5个不同品牌,各3个批号的胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装信息标识和自检项目,并按照《中华人民共和国药典》2020版四部和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》(GB 4789.28-2013),对培养基适用性进行研究分析。结果5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装标识信息存在较大差异,自检报告使用的检验依据和具体检测项目以及适用性判定标准都不相同,5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查结果均符合相关标准要求,但相同品牌不同批号间的检查结果均一性存在差异。结论培养基质量控制标准有待规范和完善,有利于培养基生产和使用。

胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法在病理检测的价值

目的探讨与分析胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法在病理检测的价值。方法选取2019年3月—2022年9月在乌鲁木齐市中医医院诊治的92例胸腹水患者作为研究对象,所有患者都给予胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法,都给予病理活检,判断诊断的价值。结果在92例患者中,胸腹水液基细胞学检测判断为恶性肿瘤54例,良性肿瘤38例,胸腹水液基细胞学检测诊断恶性肿瘤的敏感度与特异度分别为85.48%、96.67%。胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片检测判断为恶性肿瘤55例,良性肿瘤37例,胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片检测诊断恶性肿瘤的敏感性与特异性分别为88.71%、100.00%。胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片检测判断为恶性肿瘤61例,良性肿瘤31例,胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片检测诊断恶性肿瘤的敏感度与特异度分别为98.39%、100.00%。恶性肿瘤患者的人表皮生长因子受体2、突触素、嗜铬素A表达阳性率分别为40.32%、41.94%、43.55%,与良性肿瘤患者的10.00%、13.33%、10.00%相比有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法对肿瘤良恶性的诊断敏感性高于单项检测,差异有统计学意义(P<0.05),不同检测方法的诊断特异性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示,胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法对肿瘤良恶性的诊断曲线下面积为0.883。结论胸腹水液基细胞学检测联合胸腹水沉淀物琼脂石蜡双包埋切片法在病理检测中的应用能提高诊断敏感度,还可保持非常高的诊断特异度,对患者的原发肿瘤良恶性判定具有很好的价值。

布鲁氏菌病M5、S2疫苗免疫血清半抗原-琼脂扩散试验方法检测评价

目的应用NH-AGID方法对布鲁氏菌M5、S2疫苗株免疫血清进行检测,评价该方法适用性。方法选取3~5月龄羔羊74只,随机分为3组。分别以S2株1.0×1010 CFU、5.0×109 CFU灌服和皮下注射接种羔羊各25只,M5株以1.0×10^(9) CFU皮下注射接种羔羊24只。免疫后7 d~150 d采集羊全血,分离血清,经RBT初筛和SAT确诊免疫抗体阳性血清。评估NH-AGID方法对M5和S2株疫苗免疫抗体与感染抗体的鉴别诊断特异性。结果NH-AGID方法对M5株疫苗免疫阳性血清的LPS抗体检出率为100%,NH抗体检出率8.3%~29.2%,鉴别诊断特异性为82.8%。对S2株疫苗口服组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为31.2%~66.7%,NH抗体检出率为0%;皮下注射组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为45.4%~100%,NH抗体检出率为4.5%~20%。对S2株疫苗免疫血清的鉴别诊断特异性为96.5%。结论NH-AGID方法不完全适用于羊用布鲁氏菌疫苗M5株和S2株的鉴别诊断,该方法的鉴别诊断特异性与疫苗毒力、免疫剂量和途径等因素相关,应进一步研究明确该方法的适用范围及条件,以期合理应用于布病防控诊断工作中。

马丁琼脂培养基质量控制标准研究

为建立马丁琼脂培养基质量控制标准,系统评价马丁琼脂培养基适应性和促生长能力,运用多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌和链球菌类活疫苗活菌计数参考品,通过活菌计数统计分析,对新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂或改良马丁琼脂进行适应性和促生长能力系统测试。结果显示:新鲜马丁琼脂、干粉马丁琼脂和改良马丁琼脂均对多杀性巴氏杆菌、丹毒杆菌、链球菌的适应性和促生长能力差异显著,需同时选择巴氏杆菌类、丹毒杆菌类、链球菌类活疫苗计数参考品评价马丁琼脂培养基的适应性和促生长能力,表明活菌计数参考品用于建立马丁琼脂质量控制标准是可行的。

Ca^(2+)、琼脂及其协同效应对噬菌体分离的影响

为提高噬菌体的分离效率和保留分离噬菌体的生物多样性,试验以大肠杆菌为指示菌和噬菌体P1为模型,顶层培养基分为4个处理组,每组3个重复,采用2×2(Ca^(2+)×琼脂)试验设计,研究顶层培养基不同水平的Ca^(2+)和琼脂对菌斑生成量和形态特征的影响。顶层培养基Ca^(2+)的添加量分别为0、2m M,琼脂的添加量分别为0.35%、7.0%。结果表明:培养基中添加Ca^(2+)对菌斑生成量影响显著提高(P<0.01),而菌斑目测直径最大;培养基中琼脂浓度对菌斑生成量影响显著(P<0.01),琼脂浓度对菌斑生成量呈负效应,与生成量相同,菌斑目测直径也呈负效应;Ca^(2+)和琼脂的协同作用对菌斑生成量影响显著(P<0.01),也对菌斑目测直径具有影响。说明Ca^(2+)、琼脂及其协同对噬菌体P1的成斑状态具有显著的影响,可为今后噬菌体分离提供理论参考。

比较Epsilometer试验法和琼脂稀释法检测幽门螺杆菌对甲硝唑的敏感性

目的:以琼脂稀释法为金标准,评价Epsilometer试验(Epsilometer test,E-test)法检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对甲硝唑敏感性的一致性。方法:纳入2018年8月至2020年7月因消化不良症状就诊于北京大学第三医院行胃镜检查的H.pylori感染初治患者,取胃黏膜组织活检行H.pylori培养,分别采用E-test法和琼脂稀释法检测H.pylori对甲硝唑的敏感性,比较两种方法检测结果的一致性和相关性。结果:成功培养105株H.pylori,将最小抑菌浓度≥8 mg/L定义为耐药。琼脂稀释法检测甲硝唑耐药菌株68株,耐药率64.8%,E-test法检测耐药菌株66株,耐药率62.9%,其中,琼脂稀释法和E-test法检测均为耐药的菌株66株,均为敏感的菌株37株,两种方法的一致率为98.1%。2例菌株被琼脂稀释法评价为耐药,而E-test法评价为敏感,非常严重错误率为1.9%。没有菌株被琼脂稀释法评价为敏感,而E-test法评价为耐药(严重错误率为0%)。以琼脂稀释法为金标准,E-test法检测甲硝唑耐药的灵敏度为97.1%(95%CI:0.888~0.995),特异度为100%(95%CI:0.883~1.000)。Cohen’s kappa系数为0.959(95%CI:0.902~1.016,P<0.001),Spearmans相关性检测r=0.807(P<0.001)。采用Bland-Altman法进行一致性评价,结果提示较好,未出现一致性区间外的测值。E-test法比琼脂稀释法的成本更低,平均完成1例试验两者的成本分别为269.8元和356.6元。结论:E-test法检测H.pylori对甲硝唑的药敏试验与琼脂稀释法相比具有较强的一致性,E-test法省时、省力、价廉,可以作为H.pylori药敏试验的优选检测方法。

琼脂扩散法用于放线菌源生防菌剂筛选的活性影响因素

以灰霉病菌(Botrytis cinerea)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeobosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、西瓜猝倒病菌(Pythium aphanidematum)为模式靶标,探讨了放线菌源生防杀菌剂筛选的活性特征、影响活性稳定性和敏感度的因素。采用琼脂扩散法,测试了模式靶标、化合物标准样品和放线菌标准菌株的发酵液样品对杀菌活性测试的影响。结果表明,靶标的处理过程、靶标菌的含量、样品的类型以及样品的加入量与活性反应有直接关联。不同模式靶标菌对破碎处理的耐受程度不同,必须针对不同模式靶标进行个性化处理,以保证模式靶标菌在测试中的稳定生长状态。在琼脂扩散法中,不仅可以检测样品的杀菌活性强度,而且活性成分与靶标菌的不同作用方式也可以呈现。保留活菌的放线菌发酵液样品在加入量较宽的范围内都显示活性,而经过滤除菌处理的放线菌发酵液样品和标准化合物都只在样品加入量比较大时才显示出活性。