富含多糖的芜菁根皮中磷酸化蛋白的Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析技术和质谱鉴定方法

介绍了利用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料分析磷酸化蛋白在芜菁根皮中的表达。比较了酚法、SDS法、Tris-HCl法、TCA-丙酮法、裂解液直接裂解法和改良的酚2h沉淀法所提取芜菁根皮中总蛋白的浓度和纯度。最后用改良酚法提取了芜菁的总蛋白,双相电泳分离后,用Pro-Q Diamond/SYPRO荧光染料染色对磷酸化蛋白进行染色分析,并对磷酸化蛋白点做了质谱鉴定。

健康人肝组织麦胚凝集素亲和型糖蛋白表达谱分析

目的分析健康人肝组织麦胚凝集素(wheatgermagglutinin,WGA)亲和型糖蛋白表达谱。方法从30例健康人肝组织混合样本的总蛋白中用WGA凝集素亲和层析分离纯化糖蛋白,再利用双向电泳结合SYPRO Ruby荧光染色进一步分离WGA亲和型糖蛋白。目的蛋白质点经质谱鉴定后对其进行生物信息学分析及功能分类。结果初步建立WGA亲和型糖蛋白的双向电泳图谱,图谱均点数为(650±50)个,质谱鉴定并去冗余共获116个蛋白。经生物信息学分析104个蛋白具有不同程度的N糖基化位点,最后按Gene Ontology的分类原则进行功能分类。结论凝集素亲和层析结合双向电泳荧光染色、质谱鉴定是一种高通量的检测方法,WGA亲和型糖蛋白表达谱的初步构建为后续研究奠定了基础。

快速凝胶荧光染色法在尿液蛋白电泳分析中的应用

尿蛋白变化通常是肾脏或其他脏器系统实质性损伤或功能性改变的反映。目前,在临床实验室中一般仅检测尿总蛋白水平[1],但这不能反映出尿蛋白的选择性情况。实际上,在肾小球滤过增加、肾小管重吸收减少以及肾小球、肾小管损伤释放或主动分泌等条件下,尿蛋白都会升高,并且在尿蛋白成分上出现一定的特征性。因此,除尿蛋白水平外,其成分分析对病因判断具有重要意义。

肝质膜蛋白质组研究中染色方法比较及优化

对肝脏质膜蛋白质组进行了5种染色方法比较实验,发现荧光染的质谱鉴定准确性高于快速银染(Blum银染),快速银染又高于普通银染(Plus OneTM).考染中G-250的效果比R-350好,且背景低、快速.对考染后切取了高丰度蛋白质点后的胶块再进行快速银染,可以既提高鉴定的准确性也不丢失低丰度蛋白质.