抗人活化血小板表面α-颗粒膜蛋白GMP-140单克隆抗体SZ-51的研制应用(摘要)

血栓性疾病如急性心肌梗塞、脑血栓形成是危害人类健康的主要疾病,对它的早期特异性诊断和治疗是降低病死率的关键。活化血小板是血栓的主要组份之一,在血栓形成的病理生理中起重要的作用。它和血循环中的静止血小板相比,表面暴露着许多新出现的特异性抗原,成为血小板活化或血栓形成的特异性标记。因此,抗人活化血小板单克隆抗体(单抗)可作为血栓检测、诊断和治疗的有效工具。本研究包括国内第一株抗人活化血小板表面α—颗粒膜蛋白(GMP-140)单抗SZ-51的制备,以及应用这株单抗所建立的血小板活化程度检测方法和对多种病理状态下血小板体内活化程度进行的研究。SZ-51单抗的杂交瘤细胞株由本室改良的Kohler和Milstein法融合产生。单抗SZ-51识别的抗原位于静止血小板内α—颗粒膜上。

抗人活化血小板单克隆抗体SZ-51的研制及其在血栓研究中的作用

血小板的活化是血栓形成过程中一个重要的病理过程.本研究室利用杂交瘤技术制备了国内第一株抗人活化血小板单克隆抗体SZ-51,并利用这株单抗对血小板的活化及其在血栓形成和血栓性疾病的发病机理、诊断和治疗中的应用价值等方面进行了研究.现将我室七年来在SZ-51方面研究的科研成果归纳如下:

单克隆抗体SZ-51测定肝硬化患者血小板GMP-140初步观察

血小板α-颗粒膜蛋白（α-granule me-mbrane Protein简称GMP-140）,分子量为140KD2。当血小板活化脱颗粒时,血小板中的α-颗粒内容物释放,GMP-140与血小板质膜整合,并暴露在已活化的血小板质膜表面。测定血小板GMP-140可直接了解血小板活化程度,作为血栓性疾病的体外诊断指标。本文应用单克隆抗体SZ-51放射免疫法,测定了肝硬化患者的血小板GMP-140,现将结果报告如下。对象和方法一、对象: （一）经确诊的肝硬化患者63例（男53例,女10例）,平均年龄44.31岁（19～66岁）。所选病例既往无心、脑、血管及肾病史,病程中未用过潘生丁、非甾醇类药物。

SZ-51检测内皮细胞P-selectin表达及其对内皮与粒细胞粘附的影响

目的 观察单克隆抗体SZ - 5 1对内皮细胞P -selectin表达的检测效果及其对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响作用。方法 用流式细胞术检测活化内皮细胞P -selectin表达 ;用虎红染色法检测SZ - 5 1对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响。结果 SZ - 5 1能有效检出活化内皮细胞P -selectin表达 ,但对中性粒细胞与P -selectin、中性粒细胞与脂多糖活化的内皮细胞粘附无影响作用。结论 SZ - 5 1不是P

^(99m)Tc-SZ-51用于犬静脉血栓模型放射免疫显像的研究

目的 :观察 99m Tc标记抗活化血小板单抗 (99m Tc- SZ- 5 1)在犬血栓模型的体内代谢分布情况 ,以及检测静脉血栓的能力。方法 :制作犬静脉血栓模型 2 4h后注射 99m Tc- SZ- 5 1370 MBq,分别测定血液半清除时间 (T1 /2 ) ,不同时间的血栓 /血液和血栓 /肌肉比值以及血栓部位与对侧相应部位 (T/ NT)比值。结果 :99m Tc- SZ- 5 1的血液半清除时间分别为 ,快相 (15 .2 8± 9.2 5 ) m in,慢相 (7.76± 2 .2 5 ) h,肾脏摄取量显著高于其他脏器 ;4h血栓 /血液和血栓 /肌肉比值分别为 4.0和 6 6 .5 ,10 h达到 7.2和 16 3.3;注射显像剂后 1h活体显像 ,可见股静脉血栓局部有明显放射性聚集 ,4～ 6 h血栓显像更清晰。ROI定量分析显示 ,T/ NT比值在注射显像剂后 1h即可达到 1.5 2 ,4h达到最高点 2 .6 5。结论 :99m Tc- SZ- 5 1具有较快的血液清除率和较高的 T/ NT比值 ,活体显像可获得满意的显像效果 ,血栓最佳显像时间为 4～ 6 h。

SZ-51单链抗体与金属硫蛋白的融合基因构建及其在大肠杆菌中的表达

近年来，对活化血小板膜糖蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的单抗ＳＺ５１进行了系列基因工程抗体的研究，首先克隆出抗体的可变区基因［１］，从而获得了系列基因组抗体［２］，使鼠源性抗体对人体的免疫原性大大降低。我们利用金属硫蛋白（ＭＴ）的低相对分子质量（６０...