^(35)S标记SZ39导向治疗胶质瘤的实验研究

目的制备纯β射线放射免疫治疗制剂３５Ｓ标记单克隆抗体（ＭＡｂ）ＳＺ３９，并证实其对胶质瘤的特异杀伤作用。方法３５Ｓ以碳二亚胺法标记ＳＺ３９。采用ＭＴＴ法，以人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ４４为靶细胞，检测３５ＳＳＺ３９及其对照组３５ＳｎＩｇＧ、３５Ｓ加ＳＺ３９、３５Ｓ持续作用组的细胞杀伤率，求得５０％细胞抑制浓度；以荷瘤鼠为对象，以３５ＳｎＩｇＧ及ＰＢＳ为对照组，根据公式求得３５ＳＳＺ３９肿瘤抑制率；并以流式细胞计数仪分析３５ＳＳＺ３９的抑瘤效应。结果３５ＳＳＺ３９细胞杀伤力与３５Ｓ持续作用相近，较３５ＳｎＩｇＧ强４２倍，较３５Ｓ加ＳＺ３９强４０倍。１０３６ＭＢｑ３５ＳＳＺ３９对肿瘤可产生抑制作用，阻滞肿瘤生长１周左右，给药后２６ｄ，抑制率达５０％。经３５ＳＳＺ３９治疗后肿瘤细胞ＤＮＡ合成受抑，Ｓ期细胞蓄积，Ｇ１期细胞受阻，有细胞周期同步化趋势。３５ＳＳＺ３９有抑瘤作用，但对骨髓无明显毒副作用。结论３５ＳＳＺ３９能选择性杀伤胶质瘤细胞。

抗胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的GST融合表达

目的 以GST融合蛋白的形式表达SZ39(ScFv) PE40 ,为抗胶质瘤重组免疫毒素的下游研究与开发准备一条可供选择的途径。方法 将已构建的SZ39(ScFv) PE40基因克隆入大肠杆菌GST融合表达载体pGEX 5X 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中以IPTG诱导表达。结果 SDS PAGE分析显示表达产物以包涵体形式存在 ,分子质量为 95 0 0 0u左右 ,与融合蛋白GST SZ39(ScFv) PE40的分子质量理论推算值相符 ;Westernblot证实在相应的分子质量处出现特异性显色印迹 ;凝胶灰度扫描显示其表达量约占菌体总蛋白的 2 5 %。结论 重组免疫毒素SZ39(ScFv) PE40也可以与GST融合表达的形式在大肠杆菌中高效表达。

抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv)-PE40的基因构建及表达

目的 构建抗人脑胶质瘤重组免疫毒素SZ39(ScFv) PE4 0并在大肠杆菌中表达。方法 从质粒pVC85中克隆出PE4 0基因 ,与抗胶质瘤单链抗体SZ39 ScFv基因进行拼接 ,构建出重组免疫毒素SZ39(ScFv) PE4 0基因 ,并将其克隆于表达载体pET2 0b(+) ,在大肠杆菌Bl2 1(DE3)pLysS中以IPTG诱导表达。结果 SDS PAGE分析显示表达产物主要以包涵体的形式存在 ,分子量为 6 8kD左右 ,与SZ39(ScFv) PE4 0的分子量理论推算值相符 ;Westernblot显示在 6 8kD处出现特异性显色印迹 ;凝胶灰度扫描显示其表达量占菌体总蛋白的 2 0 %。结论 重组免疫毒素SZ39(ScFv) PE4 0可经原核表达载体 ,pET2 0b(+)在大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中以包涵体形式得到较高效率的表达。

^(186,188)Re-SZ39的药学性能研究

本工作对单克隆抗体 MAb- SZ39的铼标记物进行动物体内稳定性、免疫活性、细胞杀伤能力及对荷人脑胶质瘤裸鼠的抑制率等测试。结果表明标记物细胞杀伤能力强 ,体内较稳定 ,且能明显抑制肿瘤的生长 ,作为一种免疫治疗剂具有良好的应用前景。

Rhenium labeled McAb-SZ39 and colloid

Two kinds of rhenium labeled radiopharmaceuticals for therapy of the human brain glioma were prepared.Anti-human brain glioma monoclonal antibody (McAb-SZ39) was directly labeled with 186 ReO4^-.When ascorbic acid was used as reduction agent of antibody and the reduction of 186 ReO4^- was finished in sodium gluconate solution(pH=2.54),the labeling efficiency was 96.2%,After purification,the labeled products were tested in respect of immunoreactivity,in vitro stability as well as inhibitory efficiency against human glioma transplanted in nude mice,188ReO4^- labeled colloid was synthesized by using a two-step method.The size of radiocolloid particles was around 2-5μm,and the radiochemical yield was over 95%,Nude mice Experiments demonstrated that the inhibitory efficiency against human brain glioma of 188Re-collied and ^188 Re-McAb-SZ39 was 90% and 65% ,respectively.

^(186)Re对抗人脑胶质瘤单克隆抗体的标记条件及其体外稳定性研究

用１８６Ｒｅ对抗人脑胶质瘤单克隆抗体（ＭＡｂＳＺ３９）进行了标记。研究了影响标记率的多种因素：如不同转移螯合剂、不同反应时间、ｐＨ及不同的ＳＺ３９还原剂等，最终找到了最佳反应条件，选用低ｐＨ的葡萄糖酸钠－盐酸缓冲溶液，标记率高达９６．２％。通过测量相同反应条件下标记率，发现１８６Ｒｅ比活度太低明显降低标记率。标记物进行了高效液相分离与纯化，并对纯化物作了体外稳定性测试，测定了不同条件下放化纯度随放置时间的变化关系。