自组装脂质体纳米载体对骨肉瘤细胞Saos-2靶向递送及凋亡的影响

目的以天然脂肪酸月桂酸和硬脂酸为骨架,利用它们在二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)中的自组装构建了一种脂质体纳米载体并负载阿霉素,对其靶向人骨肉瘤细胞Saos-2及凋亡情况进行考察.方法采用自组装制备了负载阿霉素的脂质体纳米载体,采用激光共聚焦考察了其靶向人骨肉瘤细胞Saos-2能力,采用Annexin V-FITC染色技术考察了脂质体纳米载体对人骨肉瘤细胞Saos-2凋亡的影响.结果自组装脂质体纳米载体与人骨肉瘤细胞Saos-2孵育48h时,荧光强度最高,绿色荧光的自组装脂质体纳米载体会围绕在骨肉瘤细胞Saos-2周围,相对于同剂量DMF的对照组,自组装脂质体纳米载体组的细胞无论是早期凋亡还是晚期凋亡的比例均有所增加.结论负载阿霉素的脂质体纳米载体能准确地靶向人骨肉瘤细胞Saos-2,并加速人骨肉瘤细胞Saos-2的凋亡.

氧烛对高原夜间睡眠呼吸暂停及SaO_2的影响

目的研究在高原利用氧烛建立富氧室对夜间睡眠呼吸暂停及血氧饱和度(SaO2)的影响。方法8名受试者在海拔3 700 m和5 200 m夜间睡眠,监测常氧和富氧(氧浓度为24%～25%)条件下的呼吸、脉率、SaO2和呼吸暂停次数及暂停时间。结果在海拔3 700 m和5 200 m富氧较常氧下睡眠SaO2增高,脉率降低,有显著性差异(P<0.05或0.001),呼吸频率无统计学意义(P>0.05)。3 700 m和5 200 m常氧下睡眠各有6人出现呼吸暂停,暂停次数依次为3、6、2、10、3、17和2、5、3、7、44、6(次/30 min);呼吸暂停时间,最短分别为6和9 s,最长为15和14.8 s,而富氧条件下未出现呼吸暂停现象。结论高原富氧下睡眠可显著改善周期性呼吸及呼吸暂停,使SaO2显著增高。氧烛在高原供氧有着广泛的社会效益和军事用途。

苦参碱通过下调STAT3信号通路抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖的实验研究

目的观察苦参碱对成人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的调节作用及其与STAT3活化水平的联系。方法将成人骨肉瘤Saos-2细胞分为对照组(Control组)、低剂量苦参碱干预组(MAT-L干预组)及高剂量苦参碱干预组(MATH干预组)3组。使用MTT法对不同时间点(0、24和48h)各组Saos-2细胞活性进行检测;使用qPCR对干预24小时后Saos-2细胞的survivin mRNA水平进行分析,使用western blot法对干预24小时后Saos-2细胞STAT3的活化水平及survivin蛋白表达水平进行分析。结果与对照组相比,给予苦参碱干预的Saos-2细胞活性呈时间依赖性和浓度依赖性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);给予Saos-2细胞不同浓度的苦参碱干预24小时后,survivin mRNA和蛋白的表达水平及STAT3的活化水平呈浓度依赖性降低,差异均有显著统计学意义(均P<0.05)。结论苦参碱可以通过下调STAT3的活化抑制成人骨肉瘤Saos-2细胞survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖。该研究为苦参碱应用于骨肉瘤及其他恶性肿瘤的临床治疗提供了实验基础。

高原594例移居健康人SaO_2变化与移居时间关系调查

目的 :了解移居时间长短对动脉血氧饱和度 (SaO2 )的影响。方法 :对移居海拔 4 5 0 0m以上 5 94例健康人群 ,按移居时间分成≥ 3年 (观察组 )和 <3年 (对照组 )两组 ,用SaO2 监测仪逐个测定SaO2 ,就其变化情况进行统计分析。结果 :发现观察组人群SaO2 降低例数明显低于对照组 ,两组比较 ,具有非常显著性差异 (χ2 =10 5 2 7,P <0 0 1)。结论 :在海拔5 2 0 0m以下 ,随着移居时间的延长 。

人成骨样细胞SaOS-2向成骨分化过程中GNAS1基因的表达变化

目的:对成骨分化过程中GNAS1基因的表达进行研究.方法:对人成骨样细胞Sa OS-2进行成骨定向分化,采用茜素红染色、实时定量PCR和免疫印迹检测成骨分化效果和分化过程中GNAS1的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示,RUNX2基因在成骨分化第3天表达最高,之后呈下降趋势,而实时定量PCR和免疫印迹均检测到GNAS1基因在成骨分化第3天表达最低,之后呈升高趋势.结论:GNAS1基因在成骨分化过程中表达存在差异,提示对成骨细胞分化具有调控作用.

RNA干扰下调MBP-1对骨肉瘤Saos-2细胞生物学的影响

目的探讨c-myc启动子结合蛋白1(MBP-1)基因沉默对人骨肉瘤Saos-2细胞生长的影响。方法实验分为3组:正常对照组(未转染骨肉瘤细胞)、阴性对照组(转染错义序列组)和沉默组(转染MBP-1 sh RNA组)。设计2条MBP-1基因的RNA干扰片段及1条阴性对照si RNA,并与p SIREN-retro Q质粒连接。将重组p SIREN-retro Q质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染骨肉瘤Saos-2细胞。实时PCR和Western blot分别检测MBP-1表达。CCK-8法对MBP-1沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长进行检测。Western blot检测对照组和沉默组cyclin D1和cyclin E的表达。结果通过PCR扩增及测序,说明已成功构建MBP-1沉默及对照重组p SIREN-retro Q质粒。实时PCR结果显示,沉默组MBP-1 m RNA相对表达量与对照组相比显著下调(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默组MBP-1蛋白表达量与对照组相比也显著下调。CCK-8法结果表明,沉默组细胞在48、72和96 h时增殖能力均比对照组显著升高(P<0.05)。沉默组cyclin D1和cyclin E的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 MBP-1基因沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长被明显促进,为寻找骨肉瘤基因治疗新靶点打下基础。

甲状旁腺素对人成骨肉瘤细胞株SaOS-2内cAMP,IP3,Ca^(2+)的作用研究

目的通过研究ｈＰＴＨ（１～３４）对人成骨肉瘤细胞株ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ、ＩＰ３、Ｃａ２＋的影响，来阐明ＰＴＨ与其膜上特异受体结合后的胞浆内主要信息传递途径。方法利用蛋白竞争结合法测定胞浆内ｃＡＭＰ，以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为荧光指示剂，激光共聚焦显微系统显示ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，离子交换层析法测定ｈＰＴＨ（１～３４）作用下胞浆内ＩＰ３的改变。结果ｈＰＴＨ（１～３４）可使ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ明显升高且与其浓度呈正相关，其最佳作用时间为１０ｍｉｎ。ｈＰＴＨ（１～３４）能迅速提高ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ，而且作用３０ｓ时ＳａＯＳ－２胞浆内ＩＰ３升高即达最高峰，未发现百日咳毒素对此现象有抑制作用。

新型矿化胶原膜对人成骨肉瘤细胞株Saos-2生物学行为的影响

目的:探讨新型矿化胶原膜(the mineralized collagen membrane)对人成骨肉瘤细胞株Saos-2生物学行为的影响。方法:将人成骨肉瘤细胞Saos-2接种于矿化胶原膜表面,光镜观察细胞形态;制备胶原膜的浸提液,以正常培养基为阴性对照,Bio-gide的浸提液为阳性对照,检测三组细胞的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性。采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果:矿化胶原膜和Saos-2细胞共培养时,细胞伸展良好;随着培养时间的延长,对照组和浸提液组细胞数量不断增加,1、4、7d时三组OD值之间无显著性差异,10d时阴性对照组OD值明显高于Bio-gide组和矿化胶原膜组,但Bio-gide组和矿化胶原膜组之间无显著性差异;7d时阴性对照组ALP活性最低,Bio-gide膜组较高,矿化胶原膜组表达最高,三者间差异有统计学意义。结论:矿化胶原膜具有良好的细胞相容性。

进藏青年在3658m与5374mSaO_2、Pulse对照研究

目的了解进藏青年在不同海拔高度环境中的脉率(Pulse)、血氧饱和度(SaO2)的变化。方法采用韩国产脉搏血氧饱和度监测仪(Pulse.OXIETER-MP110)对同一组人员在不同高度进行追踪监测。结果于3658m的高度监测得Pulse(80.530±9.062)次/min,SaO2(89.800±2.500)%;于5374m测得Pulse(98.00±16.670)次/min,SaO2(80.200±3.514)%。结论从拉萨3658m的高度进入5374m的高原环境3周后,SaO2测值明显低于3658m的测值:高原5374m的Pulse测值明显高于平原,测值自身对照差异显著P<0.01。高原5374m SaO2的异常降低并低于正常值。

不同官能团对骨肉瘤Saos-2细胞生物学特性的影响

目的肿瘤假体置换是目前治疗骨肉瘤的常用手段,功能化假体的设计和应用是目前研究的热点方向。肿瘤细胞周围微环境对肿瘤的增殖、活力和凋亡等行为起重要作用。探讨不同的官能团对细胞生物学特性影响。方法通过自组装技术在金片表面接枝不同的化学基团(-CH_3、-COOH、-NH_2、-OH),测定接触角和X线光电子谱确定其表征,采用早期扫描电镜、DAPI、CCK-8法、死/活细胞染色、流式细胞检测仪等方法观察不同官能团对骨肉瘤Saos-2细胞的黏附、增殖、活力、凋亡的影响。结果 -CH_3、-NH_2、-OH、-COOH基团的表面接触角分别为(103.0±10.1)°、(58.5±5.7)°、(13.5±0.5)°和(19.1±2.8)°。电镜下可见骨肉瘤Saos-2细胞在含有-NH_2和-COOH基团的材料表面伸展较大,细胞贴壁展开,形态不规则,大多呈梭形和盘状,细胞间突起相互连接紧密;细胞在含有-OH基团的材料表面铺展面积相对较小,细胞形态基本正常,而含有-CH3基团的材料表面细胞的黏附数量明显较少,不同的官能团对Saos-2细胞黏附、增殖率影响的顺序从大到小依次为-COOH≥-NH_2>-OH■-CH_3;而对Saos-2细胞凋亡率和毒性的顺序-CH_3■-OH>-NH_2>-COOH;不同的官能团对细胞凋亡的影响从大到小依次为-CH_3(19.1%)■-OH(7.2%)>-NH_2(4.3%)>-COOH(2.9%)。结论含有-CH_3基团的材料不利于细胞的黏附和增殖,并对细胞的凋亡有一定的促进作用。

原花青素对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的影响及机制研究

目的研究原花青素体外对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养人骨肉瘤Saos-2细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;PI染色法检测细胞凋亡率;ELISA法检测Caspase-9、Caspase-12、Survivin含量;Bradford法检测SOD、M DA含量。结果 PC在48 h和72 h对Saos-2细胞的体外增殖均具有抑制作用,并具有浓度和时间依赖性;40、80、160μg/m L浓度的PC均诱导Saos-2细胞凋亡;促进Caspase-9和Caspase-12蛋白表达,抑制Survivin蛋白表达;增加细胞内SOD的活性,降低M DA的含量。结论 PC可抑制Saos-2细胞的增殖,可能与其增加机体的抗氧化功能及启动死亡受体通路、内质网通路、线粒体通路这三条途径诱导细胞凋亡有关。

骨肉瘤Saos-2细胞Set7/9基因沉默及基因治疗靶点构建

目的:构建沉默的人Set7/9的真核表达载体,筛选其稳定转染的骨肉瘤Saos-2细胞株,评价干扰效果以及对骨肉瘤相关基因表达和细胞增殖的影响,为临床骨肉瘤基因治疗提供新靶点。方法:依据靶向序列,构建人Set7/9基因的sh RNA和对照载体,稳定转染骨肉瘤细胞Saos-2。应用Real-time PCR以及Western-blot方法检测其基因和蛋白质水平,确定该基因的沉默情况。结果:构建载体Set7/9-sh RNA,Real-time PCR和Western-blot结果显示,沉默后Set7/9基因和蛋白表达明显被抑制,而与其相关的Sirt1、Suv39h1蛋白表达水平提高,细胞增殖率增加。结论:沉默Set7/9基因后,上调与其相关的Sirt1和Suv39h1蛋白表达水平,Set7/9基因在骨肉瘤Saos-2细胞系中可能调控其的表达。此外,细胞增殖效率增加表明Set7/9具有抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖的作用。

银杏内脂B对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用研究

目的探讨银杏内脂B(GB)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响以及潜在机制。方法将人骨肉瘤Saos-2细胞分别在含300、600和1200μmol/L GB的培养液中培养24、48和72 h,采用CCK-8法检测Saos-2细胞的增殖情况,流式细胞仪检测Saos-2细胞凋亡率,Transwell小室迁移与侵袭实验检测GB对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响;提取GB处理后Saos-2细胞的mRNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9的基因及蛋白表达水平,Western blotting法检测Erk和Akt磷酸化及cleaved-caspase-3水平。结果 GB能明显抑制Saos-2细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性,600和1200μmol/L GB可诱导Saos-2细胞凋亡,GB对Saos-2细胞的迁移及侵袭的抑制作用呈浓度依赖性;GB可升高Bax mRNA和蛋白水平,但降低Bcl-2、MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白水平;高浓度GB能抑制Erk和Akt的磷酸化且升高cleaved-caspase-3水平。结论 GB具有抑制Saos-2细胞增殖及迁移侵袭和诱导细胞凋亡作用,其机制可能与抑制Erk和Akt磷酸化有关。

ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性

目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞 ,以Saos -2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞 ,进行体外杀伤实验 ,比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为 3 0∶1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。

石棉工人运动试验前后SaO_2变化的研究

为了探讨石棉工人运动与血氧水平的关系，作者对一批石棉作业工人（简称石棉工人）和对照组进行了运动试验前后ＳａＯ２（动脉血氧饱和度）的监测。结果显示，与对照组相比，石棉工人组运动后ＳａＯ２出现明显下降（Ｐ＜０．０５）；石棉工人组内比较，ＡⅡ组运动后的ＳａＯ２平均下降了９．８％，ＡⅠ组运动后ＳａＯ２平均下降了２．６％，Ａ０组运动后ＳａＯ２平均下降１．５％。运动前后ＳａＯ２的下降值与ＦＶＣ、ＦＥＶ１、ＭＶＶ、ＤＬＣＯ等肺功能指标呈负相关。提示石棉工人运动时摄氧能力减退、血氧水平降低，导致运动能力下降。

肺心病酸碱失衡血气值与SaO_2偏移度的临床分析

目的 :探讨肺心病不同类型酸碱失衡的SaO2 偏移度及其临床意义 .方法 :为 78例肺心病患者测定动脉血气 ,根据酸碱失衡的不同类型分为 9组 ,应用氧离曲线方程计算出标准SaO2 ,再用血气实测SaO2 -标准SaO2 ,得出SaO2 偏移度 ,对各血气值及SaO2 偏移度进行统计学处理 ,计算出各值的均数及标准差 .结果 :呼酸、代酸、呼酸并代酸、代酸并呼碱时SaO2 偏移度为负值 ;呼碱、代碱、呼碱并代酸时SaO2 偏移度为正值 .结论 :临床上计算酸碱失衡紊乱时肺心病患者的SaO2 偏移度 ,判定氧离曲线的偏移状况 ,可正确评估重要脏器的真实氧供情况 。