动态浊度法检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量

目的:建立一种用于检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量的方法。方法:应用细菌内毒素动态试管检测仪检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素含量,并对方法的标准曲线可靠性、准确度、精密度和耐用性进行验证。结果:细菌内毒素含量在0.125~2EU/ml范围内,标准曲线回归方程为LgTg=2.918-0.2760LgC(∣r∣=0.9964);干扰试验中,供试品细菌内毒素含量回收率为62.82%~101.04%;准确度试验中,供试品细菌内毒素含量回收率为64.54%~93.74%;精密度试验中,3名实验人员测试的平均反应时间相对标准偏差(RSD)均小于4%,18次测试的平均反应时间总RSD小于8%,供试品细菌内毒素含量回收率为76.66%~149.65%;使用不同厂家鲎试剂时,供试品细菌内毒素含量回收率为76.66%~112.68%。结论:动态浊度法可用于Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗及其中间产品中细菌内毒素的定量检测。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗对大鼠的免疫效果

目的比较不同浓度Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)3针免疫大鼠的中和抗体效价,为确定Sabin IPV的最佳免疫方案提供参考。方法用不同浓度的Sabin IPV对52只Wistar大鼠进行3针免疫,每针间隔1个月,每次免疫后30d采血并分离血清,采用微量中和试验测定血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型的中和抗体效价。结果大鼠经3针Sabin IPV免疫后,其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度均显著上升,2针免疫后抗体阳转率已经达到100%,且原倍疫苗与稀释疫苗免疫大鼠后,产生的中和抗体水平差异有显著意义。结论Sabin IPV在大鼠中有良好的免疫效果,经3针免疫可产生高水平的中和抗体。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗与不同剂型Ⅰ型+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗序贯接种的免疫原性和安全性观察

[目的]研究Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)与不同剂型Ⅰ型+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)序贯接种的免疫原性和安全性。[方法]选择2016年3月—2018年3月某院≥2月龄的婴儿作为观察对象,通过随机抽签法将其均分成糖丸剂型组与液体剂型组。两组均接受sIPV与bOPV序贯接种,其中液体剂型组使用液体剂型bOPV,糖丸剂型组则使用糖丸剂型bOPV。均严格根据0 d、28 d、56 d的免疫程序,前后共进行3剂接种。分别比较两组在免疫原性和安全性方面的差异。[结果]两组完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者在脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、脊髓灰质炎病毒Ⅲ型免疫后阳转人数占比方面比较差异无统计学意义(P>0.05);糖丸剂型组与液体剂型组完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者在脊髓灰质炎病毒Ⅱ型免疫后阳转人数占比方面比较,前者较低(P<0.05)。糖丸剂型组与液体剂型组在脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、脊髓灰质炎病毒Ⅲ型完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者免疫后抗体GMT水平方面比较,前者较低(P<0.05);糖丸剂型组与液体剂型组在脊髓灰质炎病毒Ⅱ型完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者免疫后抗体GMT水平方面比较,前者较高(P<0.05)。糖丸剂型组与液体剂型组完成全程免疫者接种后30 min、接种后14 d内、接种后28 d内、接种28 d后的不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]sIPV与不同剂型bOPV序贯接种均有较好的免疫原性以及安全性。

一次性生物工艺袋储存Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的稳定性研究

目的探讨一次性生物工艺袋存储Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)单价原液和三价半成品在不同环境下的稳定性。方法对储存在三个品牌的生物工艺袋中的s IPV原液及三价半成品在不同保存条件下不同时间点取样,观察样品外观并进行pH检测、无菌实验、细菌内毒素、D抗原含量、2-苯氧乙醇、游离甲醛、蛋白含量、DNA残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量、异常毒性和大鼠效力实验。结果三个品牌的生物工艺袋中单价原液在2~8℃下保存15个月内,D抗原回收率与当前储存条件相比无统计学差异;三价半成品在(37±2)℃、相对湿度(75±5)%加速至14天,(25±2)℃、相对湿度(60±5)%保存至6个月和2~8℃保存至24个月各项检测结果都在质量标准范围内,不同品牌间比较无统计学差异,并且各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求。结论sIPV单价原液和半成品阶段使用一次性生物工艺袋,制品的稳定性与使用传统的玻璃或不锈钢容器比较无显著性差异,检测结果均符合企业标准,在生产中可以考虑使用。

全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗获批上市

本刊讯2015年1月14日，国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（单苗）的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发，通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株（ Sabin株），经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒，结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的感染，它的上市将对我国彻底消灭脊髓灰质炎发挥至关重要的作用。

全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗获批上市

2015年1月14日,国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（单苗）的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株（Sabin株）,经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的感染,它的上市将对我国彻底消灭脊髓灰质炎发挥至关重要的作用。

二代测序技术在Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)生产质量控制中的应用

目的将二代测序(next generation sequencing,NGS)技术应用至Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine,sIPV)生产质量监控中,以期确保疫苗的安全性和批间一致性。方法将脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)Sabin株Ⅰ型、Ⅱ型和Pfizer株Ⅲ型工作种子批分别接种至生物反应器微载体培养的单层Vero细胞上,33℃培养3~4 d,获得疫苗代次病毒液,每个型别制备3批。提取各型别工作种子批毒种和疫苗代次病毒液RNA,用NGS技术分析基因突变频率、神经毒力决定位点、突变热点及批间一致性。结果3种型别PV工作种子批毒种经培养后,Sabin株Ⅱ型和Pfizer株Ⅲ型比Sabin株Ⅰ型更易发生突变,非编码区神经毒力决定位点突变频率明显上升(t=3.21~5.83,P均<0.05),编码区神经毒力决定位点突变频率变化较小(t=1.29~2.34,P均>0.05)或明显下降(t=6.01~9.62,P均<0.05);Sabin株Ⅱ型毒株的nt869位点及Pfizer株Ⅲ型毒株的nt2493位点各发生1个突变热点,突变方式均为C→T,其中nt2493既是神经毒力决定位点,也是突变热点。3种型别各3批疫苗代次病毒液均具有良好的批间一致性,基因组VP1区域各核酸位点突变频率批间拟合R2为0.947~0.995。结论NGS技术可高效检测sIPV生产过程中PV基因组的突变,且稳定可靠,可用于该疫苗的质量控制。

多次穿刺对5剂量西林瓶包装Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗质量的影响

目的 评价多次穿刺对5剂量西林瓶包装Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains,sIPV)质量的影响。方法 取3批储存约24个月的sIPV,室温平衡至少20 min,开盖取样,即为穿刺前样品;另取相同3批sIPV,于第0、7、14、21、28天分别进行第1~5针穿刺取样,每次取样前均于室温平衡至少20 min,每次取样后剩余样品均返回2~8℃保存。按企业注册标准(YBS01052021)的要求对穿刺前和第5针穿刺样品进行全项检测,其他4针穿刺样品进行pH、渗透压摩尔浓度、无菌试验、细菌内毒素、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量、外观、异常毒性检查、蛋白质含量、2-苯氧乙醇含量检测。计算每针穿刺样品的2-苯氧乙醇含量、蛋白质含量、渗透压摩尔浓度及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量的相对变化率,应用SPSS 20软件对各项指标的相对变化率进行单因素方差分析,评价多次穿刺对sIPV质量的影响。结果 sIPV穿刺前后样品的各项检测结果均符合企业注册标准。每针穿刺样品间2-苯氧乙醇含量、蛋白质含量、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量的相对变化率差异均无统计学意义(F分别为2.125、1.155、1.137、1.882,P分别为0.152、0.386、0.393、0.190);渗透压摩尔浓度及Ⅰ型病毒D抗原含量的相对变化率差异有统计学意义(F分别为4.750和4.010,P分别为0.021和0.034)。Duncan检验结果显示,与第1针比较,第2、3针穿刺样品的渗透压摩尔浓度相对变化率差异不显著,第4针差异显著,第5针又相对稳定;第1、2、4和5针穿刺样品间Ⅰ型病毒D抗原含量的相对变化率差异不显著,第3针与其他4针间存在显著差异。结论 28 d内5次穿刺对5剂量西林瓶包装sIPV的质量无影响。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗制剂处方优化后质量评价

目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin strains,sIPV)制剂处方优化后产品质量。方法对制剂处方优化(无酚红、无抑菌剂)后sIPV产品进行质量属性评估,并与已上市sIPV产品进行质量可比性分析;将制剂处方优化前后成品同时肌内免疫270只Wister大鼠(雌雄各半),检测大鼠血清中和抗体水平,进行免疫原性评价和可比性分析;将制剂处方优化后成品分别置37℃、室温(20~25℃)和2~8℃进行加速和长期稳定性试验,检测关键指标D抗原含量,进行稳定性评价,并与已上市产品历史数据进行可比性分析。结果制剂处方优化后的sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量、蛋白质含量、pH、Vero细胞蛋白质残留量、牛血清白蛋白残留量、Vero细胞DNA残留量、游离甲醛含量等各项检定结果均符合《中国药典》三部(2020版)要求和企业标准,工艺优化前后质量属性一致,免疫原性一致,加速及长期稳定性趋势一致。结论制剂处方优化后的sIPV不再含有酚红和抑菌剂成分,制剂安全性得到提升;与优化前相比,产品质量属性、免疫原性及稳定性高度相似;产品有效期内各项指标均符合要求,且具有良好的稳定性。

ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量的验证

目的验证ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)中Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量的适用性。方法用同一批ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量,验证其专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、范围、定量限和耐用性等指标。结果将样品用2种不同稀释液(样品稀释液和疫苗稀释液)稀释后,检测Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明该方法专属性强;同一检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL;不同检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明具有良好的重复性和中间精密度;准确度试验中回收率均在99%~106%,CV为2%;在12.5~400.0 ng/mL的线性范围内,标准曲线线性良好(R^(2)>0.98);定量限为50.0 ng/mL;显色时间在25~35 min内对实验无影响,显色温度在36~37℃内对实验无影响,耐用性良好。结论ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量具有较好的专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性和耐用性,可用于sIPV中Vero细胞HCP残留量的检测。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原国家标准品的建立

目的制备Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原国家标准品,并进行协作标定及稳定性检测。方法委托中国医学科学院医学生物学研究所按照国家批准工艺制备分装三价候选国家标准品,并考察其均匀性;组织5家实验室采用统一的D抗原ELISA检测方法对候选标准品协作标定,确定D抗原标示值,并对其稳定性进行初步检测。结果候选标准品分装精度变异系数(CV)为0.21%;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型CV值分别为7.39%、6.21%、7.75%;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在不同实验室间D抗原含量的CV值分别为4.03%~5.90%、3.48%~4.00%、3.03%~4.53%,抗原含量均一性良好;确定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型最终标准品效价分别为180、191、243 DU/m L。将标准品于4及-20℃放置4个月,3个血清型的D抗原含量均未发生较大变化;25℃放置约7周时,各血清型D抗原含量才出现下降趋势;37℃放置1周时开始下降,尤以Ⅰ型最为明显。结论制备的候选标准品满足国家生物标准物质的要求,可应用于Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗体外效力检测。

国产Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗接种后的安全性调查

目的评价国产Sabin株脊髓灰质炎(脊灰)灭活疫苗(Inactivated poliomyelitis vaccine,IPV)接种后的安全性,为中国脊灰疫苗免疫策略的调整提供依据。方法采用主动监测方法于2015年9月-2016年2月收集宁夏回族自治区同心县所有适龄儿童接种国产Sabin株IPV和三价脊灰减毒活疫苗(t OPV)后的不良反应,采取被动监测方法通过中国免疫规划信息管理系统收集2008-2016年宁夏全区国产Sabin株IPV、t OPV及其他免疫规划(EPI)疫苗的不良反应数据,比较分析不良反应发生率。结果主动监测显示接种国产IPV、t OPV后的一般反应发生率分别为2 464.33/10万剂、64.92/10万剂。被动监测显示,接种国产IPV的一般反应、异常反应发生率分别为51.68/10万剂、1.67/10万剂;接种t OPV后的一般反应、异常反应发生率分别为1.73/10万剂、0.22/10万剂。与其他EPI疫苗相比,国产IPV一般反应发生率最高,但其异常反应发生率低于麻疹减毒活疫苗、白喉破伤风联合疫苗、麻腮风联合减毒活疫苗、麻疹风疹联合减毒活疫苗和卡介苗,且无严重异常反应发生。结论接种国产Sabin株IPV安全性良好;主动监测的灵敏性高于被动监测。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗安全性及免疫原性

目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)的安全性和免疫原性。方法2017年8月—2018年4月,选择江苏省盐城市大丰区2月龄的常住健康婴儿,在Ⅰb期临床试验中,20名2月龄婴儿接种高剂量sIPV试验疫苗;在Ⅰ期临床试验中,60名2月龄婴儿按1:1:1的比例随机接种低剂量sIPV试验疫苗、sIPV对照疫苗或野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(wIPV)。对受试者进行安全性观察,并采集受试者免疫前和全程免疫后30 d的血清样本进行免疫原性观察。结果高、低剂量组、s IPV对照组和wIPV对照组中,总体征集性不良反应发生率分别为70.0%、55.0%、65.0%和50.0%,以1级(轻度)不良反应为主;Ⅰ型中和抗体几何平均滴度(GMT)分别为2007.47、2070.22、1580.56和364.70,Ⅱ型中和抗体GMT分别为700.26、477.52、220.98和159.75,Ⅲ型中和抗体GMT分别为366.21、522.75、289.64和306.74。结论低、高剂量s IPV试验疫苗在2月龄婴儿人群中具有良好的安全性,且免疫原性优于2个对照疫苗。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞残余DNA荧光定量PCR检测方法及其相应质量标准的建立

目的建立与国际接轨的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine made from Sabin strain,sIPV)Vero细胞残余DNA荧光定量PCR(q-PCR)检测方法及相应质量标准。方法按照《中国药典》三部(2020版)通则3407第三法,选择通则建议的Vero细胞核酸引物和探针,通过优化磁珠法提取核酸以及PCR反应体系和条件,采用q-PCR法Vero细胞DNA定量国家标准品,对sIPV产品进行线性范围、精密度和回收率验证。在此基础上,与国内5家sIPV生产研究企业和2家省药检院协作开展适用性验证的研究,并对检测结果进行统计分析,建立q-PCR法检测sIPV成品Vero细胞DNA残留量的可接受限度标准。结果优化的q-PCR方法在0.002~200 pg/μL范围内呈良好的线性关系,R2=0.999;精密度验证结果试验内、试验间变异系数分别为16.7%和27%;样品回收率在50%~150%范围内,RSD≤30%,符合《中国药典》三部(2020版)通则3407第三法相关要求。协作研究各企业sIPV成品Vero细胞DNA残留量平均为0.07~7.8 pg/剂,检测结果最大值<50 pg/剂,各实验室显示出良好的适用性;用q-PCR法检测已知50 pg Vero细胞核酸标准品(杂交法用),共获得55个有效检测值,统计计算结果为50.00 pg(95%CI:44.00~56.01 pg),与理论值差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立了sIPV产品适用的Vero细胞残余DNA q-PCR检测方法,该方法具有良好的适用性,可用于sIPV成品的质量评价,限度标准定为不高于50 pg/剂具有可行性。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗免疫原性研究

目的:评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine,s IPV)的免疫原性。方法:将130只大鼠随机分成13组,分别为无佐剂s IPV原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:10 DU/50 DU/30 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组、含佐剂s IPV原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:10 DU/50 DU/30 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组、野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Conventional inactivated poliomyelitis vaccine,c IPV)原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:40 DU/8 DU/32 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组和阴性对照组。每组10只,腿部肌内注射,0.5 m L·只-1,免疫两剂,免疫间隔时间为21 d。免疫前、第1剂免疫后21 d眼眶采血、第2剂免疫后21 d心脏穿刺采血,分离血清,采用微量细胞病变抑制法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型中和抗体效价,计算无佐剂s IPV和含佐剂s IPV ED50值、并与c IPV进行比较。结果:免疫1剂后,无佐剂s IPV、含佐剂s IPV和c IPV组Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型在不同稀释度时,除含佐剂s IPVⅠ型均为100%阳转率,其他几组均随着抗原稀释度的增加中和抗体的阳转率梯度下降。Ⅰ型无佐剂、含佐剂s IPV ED50分别是c IPV的0.02,0.004倍;Ⅱ型无佐剂、含佐剂s IPV ED50分别是c IPV的26.83,5.55倍;Ⅲ型无佐剂、含佐剂s IPV分别是c IPV的0.24,0.13倍。Ⅰ型含佐剂s IPV组1剂免疫后各剂量组大鼠血清中和抗体显著高于无佐剂s IPV相应剂量组(P<0.05),免疫两剂后,略高于无佐剂组,但没有统计学差异。Ⅱ型含佐剂s IPV各剂量组1剂免疫后大鼠血清中和抗体略高于无佐剂相应剂量组,但仅16.7 DU组存在统计学差异(P<0.05),免疫两剂后,仅50 DU组明显高于无佐剂组(P<0.05)。Ⅲ型含佐剂s IPV各剂量组1剂免疫后大鼠血清中和抗体略高于无佐剂相应剂量组,但均无统计学差异;免疫两剂后,30 DU组和1.1 DU组明显高于相应剂量组(P<0.05)。结论:s IPV免疫原性较好,其中Ⅰ型免疫原性明显优于c IPV、Ⅱ型低于c IPV、Ⅲ型略优于c IPV;Sabin株抗原含量和中和效价存在明显的量效关系;A1(OH)3佐剂可以减少抗原的使用量,提高s IPV疫苗的免疫原性。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗研究进展

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在消灭脊髓灰质炎的过程中发挥了极大的作用。在全球消灭脊髓灰质炎的关键时刻以及在后脊髓灰质炎时代,更需要价格低廉且安全性好的IPV,以减毒Sabin株制备的IPV应运而生。目前全球已有4个国家的研究机构研制的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗或百日咳-白喉-破伤风-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗完成或进入到临床试验阶段。而最近中国医学科学院医学生物学研究所研发的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗已完成生产注册申请,这将对我国乃至全球、特别是发展中国家消灭脊髓灰质炎病毒发挥至关重要的作用。本文主要以Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的临床试验研究最新进展做一综述。

生产过程中Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的灭活效果验证

目的对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin inactivated poliovirus vaccine,sIPV)在生产过程中的灭活效果进行验证及评价。方法分别制备Sabin株Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型脊髓灰质炎病毒连续5批纯化液,加入终浓度为92.5μg/mL的甲醛,37℃灭活12 d。收集灭活前(0 d)及灭活1~6、9和12 d样品,采用人喉癌上皮细胞(Hep-2)通过细胞病变法检测0~6 d样品的病毒滴度,ELISA法检测不同灭活时间样品的D抗原含量,并验证9及12 d样品的灭活效果。结果Sabin株Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型脊髓灰质炎病毒均在灭活第3天下降至0.00 lgCCID_(50)/mL,3种型别病毒同日的灭活速率差异无统计学意义(P>0.05)。灭活动力学曲线显示,0~3 d样品的病毒滴度呈直线下降,病毒灭活效果与灭活时间密切相关(Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型相关系数r分别为-0.995、-0.976及-0.996,R^(2)分别为0.991、0.952及0.992)。Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ型病毒12 d样品D抗原平均回收率分别为80%、85%和83%,抗原有一定的损失,但差异无统计学意义(P>0.05)。灭活9及12 d样品灭活验证结果均为阴性。结论Sabin株脊髓灰质炎病毒在目前的灭活工艺条件下,均可稳定地被灭活,且能收获含量较高的D抗原,保证了sIPV疫苗的稳定性及安全性。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗毒种的遗传稳定性

目的分析Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine,sabin strain,s IPV）毒种（亚主种子、工作种子）及疫苗代次病毒（SO＋4）的遗传稳定性。方法比较疫苗株SabinⅠ、Ⅱ型及PfizerⅢ型亚主种子、工作种子及疫苗代次病毒的感染性滴度及D抗原含量的变化情况,并对上述病毒进行全基因组测序。结果各代次Sabin株病毒滴度均维持在7.62-8.62 lg CCID50/ml,D抗原含量均维持在30-128 DU/ml。与Gen Bank上登录的SabinⅠ（AY184219.1）、Ⅱ（AY184220.1）、Ⅲ型（AY184221.1）减毒株原始种子（SO）基因序列相比,Sabin株亚主种子（SO＋2）、工作种子（SO＋3）及疫苗代次病毒（SO＋4）均未出现碱基突变。结论 s IPV毒种及疫苗代次病毒的全基因序列与原始种子相比,均未发生变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性。

第1代Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原含量国际标准品的国际协作标定

目的对第1代Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine prepared with Sabin strain,sIPV)D抗原含量国际标准品进行国际协作标定。方法13家协作单位分别采用NIBSC提供的统一检测方法及各单位自建方法,对以野毒株生产的脊髓灰质炎灭活疫苗(conventional inactivated poliolyelitis vaccine,cIPV)D抗原含量国际标准品12/104及其替代参考物质08/143、来自不同制造商的两种sIPV候选标准品17/130、17/160及其他3个sIPV样品进行D抗原含量检测,并分析试验有效性和实验室内、实验室间结果的一致性。结果无论采用何种方法,以sIPV候选标准品为参考标准时,有效试验的比例均较以12/104为参考标准时更高,且实验室内的变异度总体较低,D抗原含量几何平均值(geometric mean,GM)在实验室间有较好的一致性。结论两种sIPV候选标准品均适合作为国际标准,但17/160在试验有效性及实验室内、实验室间的一致性略好,选定为第1代sIPV D抗原含量检测的国际标准品。

Wistar大鼠皮内免疫Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫持久性及加强免疫效果研究

脊髓灰质炎野毒株消灭后,口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral polio vaccine,OPV)将被停止使用,脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)将全面替代OPV,但IPV成本过高,难以满足全球需要。皮内免疫可以降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,sIPV)的免疫剂量,本研究将观察sIPV疫苗皮内免疫大鼠后的免疫持久性及加强免疫效果。本研究采用sIPV,设皮内免疫组、全剂量肌肉免疫组和皮内免疫阴性对照组,接种Wistar大鼠,于3剂基础免疫程序完成后第1个月、12个月采血;第12个月采血后加强免疫1剂,并于加强免疫1个月后采血。中和试验检测各血清抗脊灰病毒中和抗体效价,评价皮内免疫sIPV的免疫持久性及加强免疫效果。Wistar大鼠3剂基础免疫后1个月,1/5、1/3剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到了100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。基础免疫后12个月,sIPV全剂量组各型阳转率均维持在80%以上,1/10剂量皮内免疫组在50%以上,1/5剂量皮内免疫组维持在70%以上,1/3剂量皮内免疫组维持在80%以上,除1/10剂量组Ⅱ型外其余各组各型别GMT均维持在1∶8以上。加强免疫后1个月,1/5剂量皮内免疫组、1/3剂量皮内免疫组及全剂量组的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型各组中和抗体阳转率均达到100%,并能够诱导产生远高于1∶8的抗体水平。本研究结果显示sIPV疫苗皮内免疫具有良好的免疫持久性及加强免疫效果。