VP4基因鉴定非EV71非CoxA16手足口病病原体漏检的研究

目的探讨肠道病毒VP4基因通用引物PCR诊断非肠道病毒71型(EV71)非柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)手足口病(HFMD)病毒方案的准确性。方法通过肠道病毒VP4基因通用引物PCR鉴定阜阳地区非EV71非CoxA16HFMD病毒时,显示两例病毒分离株为Sabin-1(命名为Fy-01和Fy-02株)。分别采用引物EVP4/Q8和VP1特异性引物对Fy-01和Fy-02分离株进行鉴定。结果采用VP4基因PCR扩增产物测序证实,两例病毒分离株为Sabin-1,而采用EVP4/Q8引物PCR扩增Fy-01分离株却存在异常的扩增条带,PCR扩增产物测序结果为柯萨奇病毒A组10型(CoxA10);将VP4基因PCR产物制备成克隆载体挑选多个单克隆测序结果显示,Fy-01分离株既存在Sabin-1 VP4基因,又存在CoxA10 VP4基因,证实为两种毒株混合感染。结论临床诊断为非EV71非CoxA16 HFMD的病例,如病原学诊断仅采用VP4基因PCR产物测序,特别是针对多种肠道病毒混合感染引起的HFMD,其结果并不完全可靠。

人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达

目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。

基于脊髓灰质炎假病毒的中和抗体检测方法的初步应用

目的初步评价基于野生型脊髓灰质炎(简称脊灰)假病毒的中和抗体检测方法应用于脊灰疫苗临床评价的适用性。方法采用本实验室建立的脊灰野毒株Mahoney、MEF-1和Saukett型假病毒中和抗体检测方法,对共207对Sabin株脊灰灭活疫苗(sIPV)Ⅱ期临床配对血清样品[包括sIPV高、中、低剂量免疫组各52对和野毒株脊灰灭活疫苗(wIPV)对照免疫组血清51对]进行交叉中和效果评价,计算各免疫组血清抗体阳转率及中和抗体几何平均滴度(GMT),并与同实验室采用传统细胞病变抑制法,使用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型Sabin株的检测结果进行比较和分析。结果采用两种方法检测各免疫组血清抗体阳转率结果相同;高中低滴度抗体检测结果趋势较一致;sIPV免后血清pseudoMahoney假病毒检测结果低于Ⅰ型Sabin株细胞病变法检测结果,平均约为4倍;pseudo-MEF-1和pseudo-Saukett型假病毒检测结果高于Ⅱ和Ⅲ型Sabin株细胞病变法检测结果,分别平均约为2和1.5倍,与前期方法验证结果趋势非常一致。结论基于野毒株假病毒建立的中和试验方法具有较高的适用性、生物安全性和灵敏度,是评价脊灰疫苗效力的有效方法。