不同pH和培养方式对海带配子体生长发育的影响

为了解决海带配子体人工高密度培养过程中因海水中游离CO_(2)减少及pH升高而导致生长受限的问题,本研究以海带’奔牛’(Sacchatina japonica)雌雄配子体为材料,以不用pH的富营养灭菌海水(10 mg/L N,1 mg/L P)为培养液,通过测量配子体长度,计算相对生长率,比较不同pH对配子体生长的影响,结果显示,pH(P<0.001)、性别(P=0.016<0.05)对海带’奔牛’配子体生长有显著影响,长期处在pH<7培养条件下的雌雄配子体相对生长率显著低于其他2组,雌配子体的相对生长率(4.61%)显著高于雄配子体(3.35%)。初始pH为7.0的处理组与对照组相比,雌雄配子体的相对生长率均无显著差异(P>0.05)。在此基础上,采用在通空气悬浮培养同时补充CO_(2)的方式进行配子体扩增培养,利用纯CO_(2)压力罐(出气量120 L/h),15 L培养液每2 d补充CO_(2)1~2 min,培养液pH范围即可控制在7.0~8.4,以此排除pH对配子体生长不利影响,并避免频繁测定pH对配子体可能造成的混种或杂藻等污染。结果显示,该培养方式下,雌雄配子体的特定生长率(♀15.42%,♂13.70%)显著高于其他2种培养方式。静置培养组雌雄配子体特定生长率(♀10.02%,♂8.12%)最低,其次为通空气悬浮培养组。在3种培养方式下,雌配子体的特定生长率显著高于雄配子体。海带’奔牛’雌雄配子体在3种培养方式下继代培养60 d后,将雌雄配子体按质量比2∶1混合后放于适宜条件下进行发育实验。结果显示,3种扩增培养模式下高密度培养的配子体均可在适宜的条件下正常发育,且发育率无显著差异(P>0.05)。以上研究结果可为利用补充CO_(2)进行海带配子体高密度扩增培养提供理论依据。

海带配子体低温冷冻保存研究

设置3个不同的温度组A(-80℃)、B(-40℃)、C(-20℃)和1个对照组D(未冻存配子体细胞),对不同品种的海带配子体细胞段或细胞簇进行低温冷冻保存,15 d后取出,在适宜条件发育培养了6个月。结果表明,不同冻存温度、雌雄差异,对海带配子体细胞段或细胞簇存活率有显著的影响(P<0.05),A组和B组冻存的配子体细胞存活率显著高于C组。相同冻存条件下,细胞簇的成活率显著高于细胞段的存活率。A组和B组冻存的细胞簇成活率均为34%~43%,而A组和B组冻存的细胞段成活率均<30%,其中901雄配子体成活率>20%,其他均<10%。在复苏培养过程中,各组存活细胞段或细胞簇的生长状态均与对照组无显著差异。在发育培养过程中,A组和B组冻存的配子体细胞的发育进程及最终发育率无显著差异。