Advances in Pharmaceutical and Ecological Value of Sagina japonica(Sw.) Ohwi

Sagina japonica（Sw.） Ohwi is a traditional medicinal herb for the treatment of lacquer dermatitis, and its medicinal and ecological value needs to be further developed. Based on broad literature search, this paper summarized the identification, composition, pharmacology, clinical applications, ecological value, and cultivation technologies of S. japonica（Sw.） Ohwi, aiming at providing scientific information for further research and development of S. japonica（Sw.） Ohwi.

传统中药漆姑草(Sagina japonica)中的C-27甾体成分

利用Diaion HP20及硅胶柱层析进行化合物的分离,从乙酸乙酯萃取部位分离得到了4个化合物,借助多种光谱技术进行结构鉴定分别鉴定为(25R)-螺甾-5-烯-1β,3β-二醇1-O-{O-α-L-鼠李吡喃糖苷-(1→2)-O-[β-D-木糖吡喃糖苷-(1→3)]-β-D-岩藻吡喃糖苷}(ophiopogonin D,1),(25R)-ruscogenin1-O-[2-O-(乙酰基)-α-L-鼠李吡喃糖苷-(1→2)][β-D-木糖吡喃糖苷-(1→3)]-β-D-岩藻吡喃糖苷(2),(25R)-ruscogenin1-O-[3-O-(乙酰基)-α-L-鼠李吡喃糖苷-(1→2)][β-D-木糖吡喃糖苷-(1→3)]-β-D-岩藻吡喃糖苷(3),蜕皮甾酮(4)。所有化合物均为首次从该植物中分得。

高效液相色谱法测定漆姑草中芦丁和槲皮素含量

建立了漆姑草(Sagina japonica)中芦丁和槲皮素含量的反相高效液相色谱—二极管阵列检测法,采用乙醇—超声波提取,以Shim-pack VP-ODS(200 mm×4.6 mm)为色谱柱,以甲醇∶水(含0.2%磷酸)=60∶40(V/V)为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温为30℃,检测波长为255 nm。芦丁和槲皮素能得到较好的分离,分别在0.03～15.00μg/mL(r=0.999 0)和0.04～20.00μg/mL(r=0.999 4)的浓度范围内与峰面积成良好线性关系,检测限分别为12.6和15.2 ng/mL。本方法操作简单、准确度高、重现性好,可用于漆姑草药材的质量控制,为漆姑草质量标准的制定提供依据。

漆姑草氯仿提取物的化学成分分析

采用硅胶柱色谱法,以石油醚-乙酸乙酯系统对漆姑草(Sagina japonica(Sw.)Ohwi)氯仿提取物进行梯度洗脱,并采用气相色谱-质谱联用技术对其洗脱组分1和2分别进行化学成分分析。结果表明,从漆姑草氯仿提取物中鉴定出59种成分,主要为烷烃和酯类,其中有40种成分在该植物中首次检出。

漆姑草氯仿提取物化学成分分析(Ⅱ)

采用硅胶柱色谱,以石油醚-乙酸乙酯系统对漆姑草[Sagina japonica(Sw.)Ohwi]氯仿提取物进行梯度洗脱,对洗脱组分4进行气质联用分析。结果表明,从漆姑草氯仿提取物洗脱组分4中分析出48种成分,主要为酯类、烷烃和醇,其中以邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯和环阿屯醇含量较高。该结果将进一步丰富漆姑草氯仿提取物中低极性组分的研究。

漆姑草中酚性成分研究

目的研究漆姑草中的酚性化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RPC-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果从漆姑草中分得9个酚性化合物,经波谱解析分别确定为:E-对甲氧基肉桂酸甲酯(Ⅰ)、伞形花内酯(Ⅱ)、7-甲氧基香豆素(Ⅲ)、5,7-二羟基香豆素(Ⅳ)、5,7-二甲氧基香豆素(Ⅴ)、7-O-β-D-葡萄吡喃糖-6-C-β-D-木糖吡喃糖-5,4′-二羟基黄酮(Ⅵ)、5,7,2′-三羟基-8-甲氧基黄酮(Ⅶ)、5,7-二羟基-8,2′-二甲氧基黄酮(Ⅷ)、5,7,3′,4′-四羟基-6-甲氧基黄酮(Ⅸ)。结论所有化合物均为首次从该植物中分得。

漆姑草中微量元素的分析

目的测定漆姑草K,Na,Ca,Mg,Mn,Cu,Fe,Zn等8种微量元素的含量。方法原子吸收分光光度法。结果漆姑草中含有丰富的人体必需的微量元素。结论微量元素在漆姑草中起到到一定的药效作用。为漆姑草的进一步研究和综合开发利用提供了新的科学依据。

漆姑草中氨基酸成分分析

为漆姑草的进一步开发利用提供科学依据,采用水提、酸水解制备氨基酸测试液,用日立HITACHI835-50型氨基酸自动分析仪对漆姑草中氨基酸成分进行了检测。结果表明:漆姑草含有大量氨基酸,必需氨基酸、半必需氨基酸及药效氨基酸的含量较高;游离氨基酸含量为452.28mg/100g,人体必需及半必需氨基酸占总游离氨基酸的24.17%,药效氨基酸占43.37%;水解氨基酸总量为8 070.57mg/100g,人体必需及半必需氨基酸占总水解氨基酸含量的31.48%,药效氨基酸占62.37%。漆姑草中氨基酸含量丰富,有大量必需氨基酸及药效氨基酸,具有较高药用价值。

西藏无毛漆姑草的组织培养

以从西藏藏族自治区引种的无毛漆姑草带腋芽茎段为外植体进行组织培养试验,先后开展了初代培养筛选、继代增殖、生根和移栽等,以筛选出无毛漆姑草适宜的增殖、生根培养基以及移栽基质.结果表明:在丛生芽诱导阶段,细胞分裂素6-BA是主导因子,最适增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+30g/L蔗糖,增殖系数达5.12,丛生芽长势良好,适宜移栽;生根培养阶段,附加NAA的培养基生根率和根生长状况普遍较单独附加IBA的差,IBA质量浓度为0.5mg/L时根生长综合指数最高,最适生根培养基为MS+IBA0.5mg/L+20mg/L蔗糖;移栽阶段,根长≥2.5cm的组培苗在腐叶土∶蛭石=3∶1的混合基质中成活率最高,达100%.

漆姑草石油醚提取物化学成分分析及抗肿瘤活性筛选

[目的]对漆姑草[Sagina japonica(Sw.)Ohwi]石油醚提取物的化学成分进行分析鉴定,并对其抗肿瘤活性进行研究。[方法]采用GC-MS联用技术分析漆姑草石油醚提取物的化学成分;选用3种人癌细胞株(人白血病K562细胞株、人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株),采用MTT法和SRB法,对其抗肿瘤活性进行研究。[结果]从漆姑草石油醚提取物中分离鉴定出25种成分,其中脂肪酸含量最多,亚油酸含量达49.318%;漆姑草石油醚提取物对人白血病K562细胞株的生长具有微弱的抑制作用,对人宫颈癌Hela细胞株和人乳腺癌MCF-7细胞株均无抑制作用。[结论]该研究可为漆姑草资源在临床上的广泛应用奠定基础。

中药漆姑草化学成分的初步研究

采用试管法,对漆姑草的石油醚、水、醇、酸水提取液进行研究,通过多种指示剂和显色剂的沉淀反应或颜色反应,初步推断漆姑草中可能含有的化学成分。通过预实验,提示漆姑草中可能含有黄酮类、三萜皂苷、氨基酸、还原糖、有机酸、油酯、香豆素、内酯和生物碱等化学成分,为其生物活性成分的进一步研究提供了实验基础。

漆姑草挥发油化学成分的研究

采用水蒸气蒸馏方法提取漆姑草挥发油,测得漆姑草挥发油的含量为0.08%;利用GC-MS联用技术从漆姑草挥发油中分离并鉴定出28种化学成分,占总挥发油的69.635%;用峰面积归一化法通过化学工作站数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的相对百分含量。方法稳定可靠,为开发及综合利用漆姑草提供科学依据。

漆姑草中总黄酮提取工艺研究与含量测定

采用正交实验进行提取工艺优选,研究了漆姑草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量。用芦丁作对照品,硝酸铝做显色剂,测定波长508 nm,紫外分光光度法测定漆姑草中总黄酮的含量。最佳提取工艺条件是:80%甲醇,料液比为1∶20,浸提时间为4 h,提取温度为50℃。最佳工艺条件下,测定漆姑草中总黄酮的含量为11.768%。本提取工艺方法简单、合理,是漆姑草中黄酮类化合物的最佳提取工艺。

漆姑草挥发油色谱保留值的构效关系研究

用分子连接性指数(nXvt)和原子类型电性拓扑状态指数(Ei)对28个从漆姑草中分离出的挥发油成分的分子结构进行表征,通过多元线性回归及最佳变量子集方法,建立了漆姑草中分离出的挥发油成分的定量结构-保留相关模型(QSRR)。该模型的相关系数(R)、标准偏差(S)分别为0.997、0.769,计算值与相应试验值较好吻合。经Jackknife的逐一剔除法检验,该模型具有良好的稳定性与预测能力,对于天然植物化学成分的分离、分析、结构表征及其药用价值的开发等具有理论指导意义。

漆姑草提取物体外抗肿瘤活性的初步筛选研究

目的:对漆姑草提取物的体外抗肿瘤活性进行初步筛选研究。方法:首先选用3个人癌细胞株(人白血病K562细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人乳腺癌MCF-7细胞株),采用MTT法和SRB法对漆姑草5个不同溶剂萃取部位进行抗肿瘤活性筛选,并对溶剂极性较大部位中的皂苷和多糖进行针对人白血病K562和HL-60两种细胞株的筛选研究。结果:漆姑草皂苷对人白血病细胞株K562和HL-60均显示有一定的抑制作用,多糖对人白血病K562细胞可能有弱的抑制作用。结论:漆姑草皂苷是漆姑草体外抗白血病细胞的活性部位。

漆姑草醇提物对人急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用

目的:探讨漆姑草醇提物(HSJ)对人急性早幼粒白血病细胞(NB4)的诱导分化作用。方法:以NB4细胞为研究对象,设HSJ低(30μg/mL)、中(60μg/mL)、高(120μg/mL)剂量组和阴性对照组,共4组;HSJ作用NB4细胞48 h后,采用透射电镜法观察NB4细胞形态;硝基四唑氮(NBT)还原实验检测NB4细胞分化能力;流式细胞术检测NB4细胞周期分布;流式细胞术检测NB4细胞表面分化抗原CD14和CD11b细胞的表达率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测c-fos mRNA表达;Western blot检测c-fos蛋白表达。结果:与对照组比较,3个不同剂量HSJ处理组NB4细胞胞核均缩小,胞浆呈空泡状,核形呈肾形或蚕豆形;各HSJ处理组NB4细胞的NBT还原率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HSJ处理组NB4细胞中G2期细胞比例均高于对照组,而S期细胞比例均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);HSJ处理组CD14和CD11b阳性细胞表达率均高于对照组(P<0.05);HSJ低剂量组cfos mRNA和蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),HSJ中、高剂量组c-fos mRNA和蛋白表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HSJ可能诱导NB4细胞向成熟粒细胞方向分化。

漆姑草多糖的提取及其含量的测定

探讨了漆姑草多糖提取及含量测定的方法。采用蒸馏水溶解乙醇沉降法提取漆姑草中的多糖,用苯酚-硫酸法测定其含量。实验结果表明:该方法简单、方便、无污染,从漆姑草中提取的多糖含量高达20.19%。

大山包漆姑草的植物学特性及繁殖方法

通过对生长在云南省大山包黑劲鹤国家级自然保护区的漆姑草进行调查和研究,观察了其形态特征,探讨了其生态生物学特性,概述其利用价值及繁殖方法。为漆姑草的应用提供了理论依据。

漆姑草醇提物对白血病细胞K562的诱导分化作用

目的:研究漆姑草醇提物(HSJ)对人慢性髓系白血病细胞(K562)的诱导分化作用。方法:实验设HSJ不同浓度(250、125、62.5μg/mL)实验组,阴性对照组(等体积1640培养基),作用48 h后,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测K562细胞增殖抑制率;瑞氏-吉姆萨染色观察K562细胞形态;硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验法测定K562细胞分化能力;流式细胞术检测K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞的表达率;Western blot法检测K562细胞中珠蛋白转录因子1(GATA1)和造血转录因子1(PU.1)蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,各浓度HSJ均能有效抑制K562细胞的增殖(P<0.05);经HSJ作用后,各实验组K562细胞核浆比例减小,出现分叶状细胞核,部分细胞核凹陷出现明显的细胞分化形态;与阴性对照组相比,3个不同浓度HSJ组的NBT还原率均提高(P<0.05);CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞表达率均增加(P<0.05);GATA1和PU.1蛋白相对含量亦增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:漆姑草醇提物能诱导K562细胞向成熟细胞方向分化。

漆姑草水提物对K562细胞凋亡及细胞周期影响

目的探讨漆姑草水提物(HSJ)对人白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞周期影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSJ对K562细胞的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法观察HSJ对细胞生长曲线影响;流式细胞仪检测HSJ对K562细胞凋亡影响;DNA倍体分析法检测HSJ对K562细胞周期时相影响。结果 HSJ对K562细胞增殖抑制率随剂量增加而增加,作用48 h半数抑制浓度(IC50)为1.35 mg/m L;1.0、2.0、4.0 mg/m L HSJ处理后,K562细胞凋亡率分别为(8.39±0.81)%、(8.88±1.12)%、(13.42±2.04)%,均高于对照组的(4.60±1.09)%(P<0.05);HSJ能够引起细胞周期进程的改变,与对照组比较,HSJ增加K562细胞中G2期细胞比例(P<0.05),降低S期时相细胞比例(P<0.05),降低增殖指数(PI)(P<0.05),HSJ将K562细胞阻滞于G2期。结论 HSJ对K562细胞具有增殖抑制作用,其机制与诱导细胞凋亡和阻滞K562细胞在G2期有关。