TDZ对非洲紫罗兰叶外植体体细胞胚发生的效应

研究了不同浓度TDZ对两个非洲紫罗兰品种Elizabeth和Nilson Blue叶片外植体愈伤组织形成、类型以及体细胞胚形成与发育的影响。结果表明,Elizabeth与Nilson Blue在培养反应、再生潜力及形态发生途径上均存在显著差异。TDZ提高叶片愈伤率,促进愈伤组织生长,适宜浓度为0.5~1.0 mg.L-1;TDZ与NAA组合能高效诱导Elizabeth胚性愈伤组织形成和体细胞胚发生。扫描电镜观察表明：随TDZ浓度增加,体细胞胚发育加快,同步化程度高。Elizabeth叶片外植体体细胞胚诱导最适培养基为MS＋0.2 mg.L-1NAA＋1.0 mg.L-1TDZ。

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立

研究3种叶型的非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)组培快繁的最佳激素配比、炼苗移栽技术,以满足规模化生产的要求。以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,比较不同浓度和不同种类的生长激素对愈伤诱导、不定芽的萌发、试管苗生芽生根的影响,并比较了不同移栽方式对存活率等指标的影响。结果表明:非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L和MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L继代1次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。成功建立了3种叶型非洲紫罗兰组织培养快繁技术体系。

非洲紫罗兰组织离体培养及快速繁殖

以MS为基本培养基研究了离体条件下非洲紫罗兰叶片外植体的快速繁殖技术。结果表明 :6 -BA诱导外植体出芽的效率明显优于KT和ZT ,其中 6 -BA 0 .5mg·L-1+NAA 0 .5mg·L-1的组合诱导效率最高 ,诱导频率可达 10 0 % ;1/2MS附加NAA 0 .2mg·L-1并添加 0 .2 %活性炭的培养基诱导生根最为适宜 ,生根率达 10 0 %。

适于AFLP分析的非洲紫罗兰DNA提取方法研究

以非洲紫罗兰同一植株的叶片和茎段为试材,采用新鲜组织提取、烘干组织提取、冷冻干燥组织提取的3种不同预处理方法,并采用DNA Kit、CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ3种提取方法,比较分析了DNA片断大小及不同方法提取DNA的纯度与得率,以期确定适用于多酚、多糖、水分含量高的非洲紫罗兰的DNA提取方法。结果表明:采用冷冻干燥组织提取法,经改良的CTAB?Ⅱ法,即在2次抽提步骤中,加入一步利用CTAB沉淀液沉淀DNA的方法最适合非洲紫罗兰DNA提取。这样得到的基因组DNA可作为后续分子水平研究的优良PCR模板。

TDZ诱导三种植物叶切块离体培养植株再生

以0.01μmol/L浓度附加到MS固体培养基上的TDZ,诱导三叶半夏叶切块产生愈伤组织和形成球状体的能力显著超过附加2μmol/L BA的,且所诱导形成的球状体经转移培养后能正常形成再生小植株.在诱导非洲紫罗兰叶切块出芽和植株再生方面,0.005μmol/L TDZ的效力即与0.5μmol/L BA的相当.0.5μmol/LTDZ诱导蟆叶秋海棠叶切块出芽和植株再生方面的效力与5μmol/LBA相当.以上结果表明很低浓度的TDZ就可代替BA用于某些植物的离体微型繁殖中.

非洲堇无根苗的生根方法研究

[目的]建立非洲堇无根苗的生根技术体系。[方法]以非洲堇的无根苗为试材,研究组培法、水培法、扦插法和滤纸桥法4种生根方法对非洲堇生根的影响。[结果]4种生根方法均能诱导非洲堇无根苗生根,水培法产生不定根的平均根长(2.5cm)和平均生根数(42条)均显著高于其他方法。扦插法产生的不定根直径大、长势旺,移栽后成活率高达99.3%,可以应用于大规模生产。40ml营养液的生根数量最大,但植株高度和根的长势均劣于30ml营养液无根苗,应选择适宜的营养液体积。[结论]以珍珠岩为基质在试管外扦插非洲堇生根是可行的,具有广阔的应用前景,对于降低非洲堇大批量生产的成本有重要意义。

不同花色品种非洲紫罗兰花色素成分初步分析

通过对不同花色花瓣色素组成的分析,可以为花色显色机理研究提供依据。本文通过对14种不同花色非洲紫罗兰的特征显色反应和紫外-可见光谱扫描进行分析,结果表明:所选非洲紫罗兰花色品种中的色素由类黄酮组成,白色非洲紫罗兰仅含黄酮类化合物,其它花色品种主要由花色素苷和黄酮类化合物组成。本试验为非洲紫罗兰花色素成分的进一步分离和鉴定以及其作为花色模式植物的研究奠定了基础,同时对花色分子育种和改良提供了信息。

非洲紫罗兰组织培养体系的建立

以紫色白边单瓣花的非洲紫罗兰叶片为试材进行了组织培养技术的研究。结果表明:以叶片为外植体进行组织培养时,愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,培养3周左右诱导率达100%;继代增殖时最适培养基为MS+0.02 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA;无需生根培养,直接瓶外炼苗,栽植于以m(草炭土)∶m(珍珠岩)=1∶1的基质中生长最好,成活率可达95%以上。

非洲紫罗兰花瓣细胞pH值测定及F3'5'H基因片段克隆

以白色和蓝色品种的非洲紫罗兰舌状花瓣为材料,测定其细胞液pH值,并利用RT-PCR技术,以NCBI上登记的马铃薯、矮牵牛、龙胆草、金鱼草和瓜叶菊的F3'5'H基因片段保守区域为模板,克隆F3'5'H基因片段,为花色显色机理研究提供理论依据。实验结果表明:蓝色品种非洲紫罗兰细胞液的pH值大于白色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值,随着花期的延长,两个品种非洲紫罗兰细胞液的pH值变化不断增大,且白色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值变化大于蓝色品种非洲紫罗兰花瓣细胞液的pH值;其范围均在3.0～7.0之间,呈弱酸;在两种花色品种非洲紫罗兰中,都得到了F3'5'H因片段的cDNA序列长度为392 bp,与马铃薯、矮牵牛、龙胆草、金鱼草和瓜叶菊的F3'5'H基因保守区域片段的同源性分别为63.0%、55.4%、52.8%、49.0%和47.7%。

抗生素对非洲紫罗兰不定芽再生的影响

以非洲紫罗兰无菌幼叶为试材,分别研究了3种抑菌抗生素(头孢霉素、头孢氨苄、羧苄青霉素)和3种筛选抗生素(硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、G418)对非洲紫罗兰离体叶片不定芽再生的影响。结果表明:羧苄青霉素和头孢霉素是非洲紫罗兰遗传转化过程中适宜的抑菌抗生素,其适宜浓度均为300mg/L,而头孢氨苄对非洲紫罗兰离体叶片的毒害作用较大,不适宜作为其转化过程中的抑菌抗生素;硫酸卡那霉素和G418对非洲紫罗兰不定芽再生有较强的抑制作用,可以作为筛选抗生素,其适宜的筛选浓度分别为50mg/L和5mg/L,而硫酸新霉素不适宜作为非洲紫罗兰遗传转化的筛选抗生素。

非洲紫罗兰叶片再生体系的建立

以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外殖体，以MS为基本培养基，添加不同浓度6-BA、NAA、GA等，探讨了外源激素对其愈伤形成、不定芽分化、增殖与不定根形成的影响。试验表明，采用MS＋6-BA0．1～2．0mg／L（单位下同）＋NAA0．01～0．5培养基，愈伤诱导率在20％以上；采用MS＋6-BA0．1～1．0＋NAA0.01～0.5＋GA0．1～1.0培养基，对芽的生长及增殖效果好，并指出GA有提高不定芽长势和成苗率的作用；采用1／2MS＋NAA0．1～0．5或IBA0．1或IAA0．1～0．5，20d内生根率可达97%以上。在腐叶土：珍珠岩=5：3的基质中驯苗，成活率可达90％以上。

非洲紫罗兰的核型分析

将低渗技术引入染色体压片法,首次对非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)缟花品种"Sunray Trail"进行了核型分析,并摸索了适用于该试材的预处理方法,为与之有关的细胞学分类、分子育种、新品种培育及转基因的细胞学检测等方面提供了细胞学依据。结果表明,供试材料为4倍体品种,其核型公式为2n=4x=28=16 m+8 sm+4 T;核型类型属于2B型;核不对称系数为63.3%;最佳预处理方法为在4℃下用0.05%的秋水仙素处理根尖2 h。

非洲紫罗兰和花叶芋的组织培养和快速繁殖

试验表明 ,非洲紫罗兰叶片组织培养 ,无论是诱导分化或继代繁殖 ,都以MS +BA 0 1mg/L+NAA 0 1mg/L培养基为好 培养中外植体极性反应明显 ,以不定芽为再生方式 ,可 1次成苗 提高试管苗移栽成活率的关键在于移栽后必须近月的高湿度生长环境 以花叶芋的叶片和叶柄作为离体繁殖的外植体 ,在MS +NAA 0～ 1 0mg/L +KT 0～ 1 0mg/L培养基上培养 ,叶片的增殖效果明显好于叶柄 在最佳配方 (MS +NAA 0 2mg/L +KT 0 2mg/L)培养基上获得的愈伤组织呈颗粒状 ,分散性好 ,胚性细胞多 ,试管苗增殖率在 6倍以上 ,其再生植株率为 10 0 % 另外 。

三种不同花色品种非洲紫罗兰的耐阴性研究

非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha)具有较高的观赏价值,适宜在阴处生长,但其耐阴性研究还很少见。本文对非洲紫罗兰进行遮荫处理,研究光强对叶绿素含量以及生物量等方面的影响。通过人为控制光强,对非洲紫罗兰在温室内全光照100%、50%、30%、10%条件下的叶绿素含量以及生长性状进行了研究。结果表明,非洲紫罗兰适合的光强为全光照的30%,叶面积和叶片数增长较快,其他生物性状没有太大变化,所以非洲紫罗兰适合生长在背荫处,但在开花季节需要一定的散射光的照射。

非洲紫罗兰转基因过程中的抑菌分析

以农杆菌介导法将白桦花发育相关基因Bp1AGL对非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha Wendl)进行遗传转化,通过设置单一变量研究转基因过程中的抑菌方法。结果表明,在暗培养60 h,侵染时间为6 min,农杆菌活化菌液OD600 nm为0.5,暗培养覆盖无菌纸膜的条件下,抑菌效果良好,转基因效率更高。

非洲紫罗兰试管苗移栽技术研究

[目的]研究了非洲紫罗兰试管苗移栽前后的配套技术。[方法]非洲紫罗兰试管生根苗经壮苗、炼苗后移栽到由珍珠岩、蛭石、腐殖土不同配比的基质中,观察其成活率。[结果]以20%多菌灵可湿性粉剂500倍液处理的腐殖土∶蛭石(2∶1)混合的基质,成活率高达90%。[结论]该技术可以在生产中推广应用。

同基因型非洲堇不同开花表型间DNA甲基化状态的MSAP分析

采用72对MSAP选择性扩增引物分别对16个经双酶切后的非洲堇DNA样品进行全基因组甲基化分析,其中49对引物组合扩增出的条带清晰、丰富且重复性好.通过对所扩增出的带形进行分析发现,有近1/4的DNA其甲基化状态存在差异,其中包括同一个体中茎段和叶片之间以及同基因型不同个体之间在CCGG位点上的甲基化差异.结果表明,同一个体中叶片的甲基化水平高于茎段;同基因型不同个体中通过茎段扦插方式繁殖的后代,保持了母本组织中DNA的甲基化状态,而通过叶片扦插繁殖的后代DNA甲基化状态发生了重建,且后代叶片组织中的甲基化水平总体呈略下降的趋势.

非洲堇叶片试管快繁体系技术研究

以引进的13个品种非洲堇的叶片为外植体,探索了非洲堇外植体的消毒方案和诱导、增殖、生根培养方案,初步建立了非洲堇叶片试管快繁体系。研究表明:0.1%HgCl_(2)作用5 min和10%84作用8 min,非洲堇无菌外植体获得率分别为67.9%和72.8%;愈伤出芽诱导培养基:MS+蔗糖30 g·L^(−1)+卡拉胶6.5 g·L^(−1)+6-BA 0.15 mg·L^(−1)+NAA 0.1 mg·L^(−1);较佳增殖配方:MS+蔗糖30 g·L^(−1)+卡拉胶6.5 g·L^(−1)+6-BA 0.2 mg·L^(−1)+NAA 0.1 mg·L^(−1)+IBA 0.15 mg·L^(−1),平均有效增殖系数可达6.43;较佳生根配方:1/2MS+蔗糖15 g·L^(−1)+卡拉胶6.0 g·L^(−1)+IBA 1.0 mg·L^(−1)+NAA 0.05 mg·L^(−1),平均生根率92.67%。

非洲紫罗兰组培技术研究

以非洲紫罗兰幼嫩叶片为外植体,用MS作基本培养基,添加不同浓度BA、NAA、GA等探讨对其愈伤组织诱导、不定芽分化、继代增殖及不定根形成的影响,并筛选了适宜的激素水平范围。试验表明:采用MS+0.1～2.0m gL/6-BA+0.01～0.5mgL/NAA培养基,愈伤诱导率在20%以上;采用M S+0.1～1.0mgL/6-BA+0.01～0.5mgL/NAA+0.1～1.0mgL/GA培养基对芽的生长及增殖效果好,并提出GA具有提高不定芽长势和成苗率的作用;采用1/2M S+0.1～0.5mgL/NAA或0.1mgL/IBA或0.1～0.5mgL/IAA,20d内生根率可达97%以上。在腐叶土∶珍珠岩=5∶3的基质中驯苗,成活率可达90%以上。

秋水仙素离体诱导对非洲紫罗兰形态的影响

以非洲紫罗兰丛生芽为外植体,研究了秋水仙素在不同浓度(5、102、0 mg/L)及不同处理时间(102、03、0 d)对其形态的影响。结果表明:以10 mg/L秋水仙素处理30 d的丛生芽诱变频率最高,达32.5%。诱导苗在叶长、叶厚、叶宽、叶色等外部形态上与对照苗相比具极显著差异,其叶下表皮内的气孔和保卫细胞长、宽与对照相比差异极显著,且单位面积气孔数减少。