低温杀菌乳对人体口腔菌群的影响

为了研究低温奶对口腔菌群的影响,本试验采用随机对照研究,招募27名志愿者,随机分到低温杀菌乳组(FP)和高温杀菌乳(UHT)组,每日统一膳食,第4~10天增加不同乳品干预,第1、4、7、10天采集唾液后进行16S rRNA测序。结果显示,统一膳食3天后,两组口腔菌差异缩小;乳品干预后,两组之间α多样性无显著差异,β多样性指数差异显著;统一饮食并干预7 d后,FP组和UHT组间差异菌数量增加,FP组梭杆菌门(Fusobacteriota)、普氏菌属(Prevotella)、糖杆菌TM7x、口腔杆菌属(Stomatobaculum)、贫养菌属(Abiotrophia)、Clostridia-UCG-014、链杆菌属(Streptobacillus)等丰度显著高于UHT组,UHT组乳杆菌属(Lactobacillus)高于FP组。肠道菌功能预测表明,UHT组第10天的氨基酸代谢和信号转导功能丰度高于FP组。乳品干预显著改善了口腔菌,低温杀菌乳有助于提高具有潜在益生功能的Clostridia-UCG-014的丰度,高温杀菌乳有助于益生菌乳杆菌属(Lactobacillus)的丰度。

冠心病患者唾液菌群结构和组成研究

目的 探讨冠心病患者唾液菌群结构和组成。方法 回顾性收集2022年5至6月温岭市第一人民医院收治的10例冠心病患者以及19名同期本院健康体检者唾液样本,分别设为冠心病组、对照组。提取唾液样本总DNA,采用16S r DNA高通量测序技术检测唾液菌群结构和组成,比较两组研究对象唾液菌群相对丰度以及数据α多样性指数(包括Chao指数、ACE指数、Shannon指数、Simpson指数)。结果 门分类分析显示,两组研究对象唾液菌群相对丰度比较差异均无统计学意义(均P>0.05),但个体间差异大。属分类分析显示,冠心病组唾液韦荣球菌属相对丰度明显高于对照组(P<0.001),且个体间差异大;而嗜血杆菌属、密螺旋体属、沃林氏菌属相对丰度均明显低于对照组(均P<0.05)。种分类分析显示,冠心病组唾液罗伊氏乳杆菌、殊异韦荣球菌相对丰度均明显高于对照组(均P<0.01),但前者丰度较低,且个体间差异大。两组研究对象数据Chao指数、ACE指数、Shannon指数、Simpson指数比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 冠心病患者唾液殊异韦荣球菌明显升高,是特征性表达的口腔菌群。

肺癌患者唾液中细菌构成分析

目的探讨唾液中细菌构成与肺癌的关系。方法收集鳞癌和腺癌以及非肿瘤对照组唾液标本,每组10例。对唾液中大量的16s rDNA进行测序分析。结果经定量PCR(qPCR)证实,5个细菌集群在癌症和对照组样本间有显著差异。结论 16s测序和PCR相结合的研究显示,有两个细菌属(二氧化碳噬纤维菌属和韦永氏球菌属)水平癌症组要显著高于非癌症组。

气相色谱法快速分析人唾液中7种短链脂肪酸

建立了气相色谱法(GC)同时检测人唾液中7种短链脂肪酸(Short-chain fatty acids,SCFAs)含量的方法。唾液样品与乙醇溶液按体积比1∶1混合(含0.5%(V/V)浓HCl)涡旋混合,离心后取上清液进行GC分析。采用DB-FFAP毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)进行分离;氢火焰离子化检测器(FID)进行检测,内标法定量。实验结果表明,唾液中共检测到7种SCFAs(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸),7种SCFAs与内标物2-乙基丁酸的色谱峰峰面积比值与其浓度均呈现良好的线性关系(R^2≥0.999),检出限(LOD,S/N=3)和定量限(LOQ,S/N=10)分别为0.060~0.198μg/m L和0.180~0.594μg/mL,平均加样回收率为94.8%~109.7%(RSD≤4.3%)。本方法简单、快速、准确,可用于测定人的唾液中短链脂肪酸的含量。

老年高血压患者唾液微生物群落初步研究

目的:利用PCR-DGGE指纹图谱技术对老年高血压患者口腔唾液微生物群落结构进行初步研究。方法:在65-80岁老年人中采集高血压伴慢性牙周炎患者、全身健康慢性牙周炎患者、口腔健康高血压患者和健康对照4组人群唾液,提取细菌总DNA,扩增后经DGGE指纹图谱分析其微生物多样性。结果:高血压伴慢性牙周炎患者与口腔健康高血压患者和健康对照组相比,其唾液微生物群落的丰富度(S)和Shannon指数(H’)显著降低(P<0.05)。结论:菌群失调是老年高血压患者牙周炎发生发展的关键因素,良好的血压控制和口腔卫生保健是促进老年高血压人群口腔健康及全身健康的重要保障。

与重症低龄儿童龋病相关的唾液微生物群落研究

目的通过高通量测序技术研究重症低龄儿童龋病和健康者唾液的菌群结构及其差异。方法在青岛市崂山区儿童中,经口腔检查选取健康(H组)和重症低龄龋病(C组)儿童各24名,采取唾液样本,提取其DNA进行聚合酶链式反应扩增,利用454测序平台对16Sr RNAV1—V3区进行双端测序,对细菌群落结构及多样性进行差异分析。结果 C组唾液菌群物种丰度高于H组(P<0.05),两组唾液菌群结构的差异有统计学意义(P<0.01),且C组的群落结构更为相似和保守(P<0.001);鉴别出C组高表达的可疑致龋微生物(P<0.1)及H组高表达的健康相关微生物(P<0.1);基于唾液菌属图谱建立的龋病风险评估模型区分健康和龋病者的准确率可高达70%以上。结论唾液菌群和特定细菌种类,如比例升高的Prevotella菌属有助于评估和筛选低龄儿童龋病风险。

青少年唾液菌群结构的分析研究

目的研究青少年唾液的群落结构,预测物种的功能及代谢信息。方法本研究采集非活动性龋的青少年及成年人的非刺激性唾液,利用16S rRNA基因高通量测序进行物种组成、多样性及差异物种等分析。利用PICRUSt对16S rRNA基因进行功能预测。结果青少年唾液样本的物种α多样性比成年人低。青少年组放线菌属OTU55的相对丰度高于成年组,而卟啉单胞菌属OTU9,牙髓卟啉单胞菌OTU51,普氏菌属OTU315,中间普氏菌OTU 28,密螺旋体属OTU74,Filifactor OTU59的相对丰度成年组高于青少年组。在KEGG第三级通路上,半胱氨酸和甲硫氨酸代谢在成年组更高,且与卟啉单胞菌属OTU9,牙髓卟啉单胞菌OTU51,中间普氏菌OTU 28,密螺旋体属OTU74的相对丰度呈正相关关系。结论青少年唾液的群落结构及功能与成年人有差异,该研究为开展该年龄段的口腔微生物研究提供参考。

不同妊娠状态下女性口腔微生物的结构差异性

【背景】妊娠期妇女口腔微生物改变与口腔疾病及全身性疾病之间有显著相关性。【目的】比较不同妊娠状态下女性口腔微生物结构的差异,探讨该差异与不同妊娠状态间的关联性。【方法】选取18名孕妇和9名非孕妇为研究对象[(28.2±3)岁],分为妊娠期糖尿病组[gestational diabetesmellitus,GDM,年龄(28.9±3.6)岁,孕周(30.1±3.2)周]、妊娠期非糖尿病组[non-diabetic pregnantwomen,PW,年龄(27.9±3.0)岁,孕周(28.6±4.7)周]和非妊娠期非糖尿病组[non-pregnant women,NPW,年龄(27.7±2.1)岁],每组9名,收集口腔唾液(saliva,S)和龈上牙菌斑(supragingival dental plaque,D),采取Illumina NovaSeq测序平台针对细菌16S rRNA基因的V3-V4可变区进行测序,以SILVA为参考数据库使用朴素贝叶斯分类器对特征序列进行分类学注释,利用QIIME软件对样本进行生物信息学分析。【结果】三组中唾液及牙菌斑微生物差异比较显示:D-GDM中二氧化碳嗜纤维菌属检出量高于D-PW,而月形单胞菌属检出量显著低于D-PW;S-GDM中产气单胞菌属、拟杆菌属等厌氧菌属检出量高于S-PW,韦荣氏菌属检出量低于S-PW;D-PW中纤毛菌属、普氏菌属和月形单胞菌属检出量显著高于D-NPW;D-NPW中产气单胞菌属、放线杆菌属、二氧化碳嗜纤维杆菌属、奈瑟菌属、链球菌属和劳特罗氏菌属等检出量高于D-PW;S-PW中韦荣菌属、普氏菌属、链球菌属和卟啉单胞菌属检出量低于S-NPW;D-GDM中福赛斯坦纳菌属、纤毛菌属检出量高于D-NPW,劳特罗氏菌属检出量低于D-NPW;S-GDM中密螺旋体属、弯曲杆菌属检出量高于S-NPW,链球菌属低于S-NPW。在种水平上,S-GDM菌群中具核梭杆菌检出量显著高于S-PW,S-GDM菌群中牙龈卟啉单胞菌及福赛斯坦纳菌检出量与S-PW差异无统计学意义,产黑普氏菌检出量低于S-PW;S-PW中牙龈卟啉单胞菌、产黑普氏菌和福赛斯坦纳菌检出量均显著高于S-NPW。【结论】孕妇妊娠期糖尿病将增加口腔微生物群厌氧菌检出率,GDM与牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌和产黑普氏菌等牙周炎致病菌相关性不能确定。

龋病和牙周病患者唾液菌群和代谢产物的比较研究

目的明确龋病和牙周炎来源的唾液菌群在物种组成、功能及代谢产物上的特点,为寻找可用于临床判断龋病和牙周炎发生的生物标志物提供依据。方法收集2022年3至6月就诊于第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科的10例高龋[龋失补牙数(decayed-missing-filled teeth,DMFT)≥6]患者[高龋(high caries,HC)组],牙周科的10例Ⅱ期A级~Ⅲ期C级牙周炎患者[牙周炎(periodontitis group,PG)组]和10名口腔健康个体[健康对照(healthy individuals,HH)组]的唾液样本。采集受试者的人口学基线、口腔内龋、牙周健康情况等信息,利用宏基因组测序和液相色谱质谱联用检测样本内微生物及其代谢产物。对测序数据进行分析获得各组样本的微生物物种分类学组成、功能基因及代谢产物的信息。各组受试人群的口腔基本情况及唾液样本采集均由同一名牙体牙髓病科主治医师完成。结果各组受试人群在年龄、性别等基线特征上差异均无统计学意义(P>0.05)。HC组DMFT(9.0±1.7)显著高于HH组和PG组(均为0)(F=243.00,P<0.001)。菌群分析显示,各组唾液菌群物种分类学组成在门水平均以变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和梭杆菌门为主。在属水平,则主要由链球菌属、奈瑟菌属、罗氏菌属、普雷沃菌属等成员组成。差异分析显示,与HH组相比,HC组和PG组在属、种水平的物种分类学组成差异均有统计学意义(P<0.05)。在属水平,HC组和PG组相对丰度改变最显著的均为普雷沃菌属。而在种水平,HC组改变最显著的为苍白普雷沃菌;PG组改变最显著的为牙龈卟啉单胞菌。代谢产物分析显示,HC组共检出133种与HH组差异表达的代谢产物,其中差异最显著的代谢产物为3-羟基-1,5-二苯基戊烷-1-酮(P=0.001)。在PG组中,共检测出102种与HH组差异表达的代谢产物,其中差异最显著的代谢产物为N1-乙酰精胺(P=0.002)。HC组与PG组相比,代谢产物上差异最显著的代谢产物为D-氨基葡萄糖6-磷酸(P=0.006)。菌群代谢功能分析显示,HC组菌群糖代谢相关的功能基因丰度最高,其次为HH组,PG组的糖代谢相关功能基因最低。此外,与HH组相比,PG组内ABC转运体和磷酸转移酶系统等涉及糖转运相关的功能基因的丰度显著降低(P<0.05),在HC组中则显著升高(P<0.05)。结论唾液菌群在龋病、牙周炎及健康人群中存在显著异质性,且菌群的糖代谢能力改变与龋病和牙周炎的发生存在一定关联。苍白普雷沃菌及3-羟基-1,5-二苯基戊烷-1-酮可能作为龋病的潜在生物标志物;而牙龈卟啉单胞菌及N1-乙酰精胺可能作为牙周炎的潜在生物标志物。

溃疡性结肠炎薄白苔和黄腻苔患者的唾液菌群特征分析

目的:研究溃疡性结肠炎(UC)薄白苔患者、黄腻苔患者和健康者的唾液菌群特征,以探讨UC患者舌苔与唾液菌群之间的关系及其分布差异。方法:选取符合纳入标准的门诊及住院UC薄白苔患者35例,UC黄腻苔患者35例,健康者(薄白苔)35例,收集其唾液标本。采用16S rDNA基因测序分析技术和生物信息学方法研究UC不同舌苔患者唾液菌群的多样性和丰度。结果:UC薄白苔组、UC黄腻苔组和健康对照组唾液菌群物种丰富度和多样性差异无统计学意义。健康对照组唾液菌群数量最多,UC薄白苔组唾液菌群数量其次,UC黄腻苔组最少。与UC薄白苔组比较,UC黄腻苔组唾液菌群在门水平放线菌门明显增多,在属水平放线菌属、丛毛单胞菌属等增多,罗氏菌属等减少。结论:UC薄白苔患者和UC黄腻苔患者在唾液菌群组成和细菌丰度上差异有统计学意义,黄腻苔患者唾液中存在有益菌的减少和促炎菌的增多,猜测UC黄腻苔患者唾液菌群失调更为严重。UC患者唾液菌群失调类型和功能差异,为探索舌苔形成提供了微生态学依据。

牙周炎患者唾液菌群对小鼠色氨酸-芳香烃受体信号轴的影响

目的研究牙周炎患者唾液菌群对牙周炎小鼠色氨酸-芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)信号轴的影响,为牙周炎对全身代谢的影响提供理论依据和新思路。方法于2020年6至12月在南京大学医学院附属口腔医院·南京市口腔医院收集12名牙周健康者及14例牙周炎患者唾液。根据随机数字表法将24只8周龄雄性C57/J小鼠随机分为3组:Sham组(对照组,给予无菌磷酸盐缓冲液灌胃)、P组(牙周炎患者唾液菌群灌胃组)及H组(牙周健康者唾液菌群灌胃组),每组8只。所有小鼠均用丝线结扎法诱导牙周炎,将磷酸盐缓冲液、牙周健康者和牙周炎患者唾液菌群分别对牙周炎小鼠灌胃2周。通过酶联免疫吸附测定检测小鼠血清中炎症因子水平,通过液相色谱-质谱法检测肠道和血清中的色氨酸及吲哚类代谢物的含量,使用免疫组化、荧光定量PCR检测小鼠肠道中AhR的表达,利用16S rRNA基因测序检测小鼠肠道菌群的组成。剩余的唾液样本用于检测人唾液中色氨酸及吲哚类代谢物的含量。结果P组小鼠血清中白细胞介素-1β[(162.38±39.46)pg/ml]显著高于H组[(82.83±20.01)pg/ml](t=4.40,P=0.001),TNF-α[(361.16±123.90)pg/ml]也显著高于H组[(191.66±106.87)pg/ml](t=2.54,P=0.030),P组小鼠结肠(1.18±0.05)和回肠中AhR的表达(0.80±0.13)均显著低于H组小鼠结肠(1.83±0.47)(t=3.09,P=0.015)和回肠AhR的表达(0.80±0.13)(t=4.93,P=0.001)。P组小鼠血清色氨酸[(18.1±3.8)×10^(7)]和吲哚乳酸含量[(1.9±0.7)×10^(7)]均显著低于H组血清色氨酸[(26.6±6.6)×10^(7)](t=2.49,P=0.037)和吲哚乳酸[(3.7±0.6)×10^(7)](t=4.49,P=0.002)。牙周炎患者唾液样本中色氨酸及吲哚类代谢物含量均高于牙周健康者,其中P组唾液样本吲哚丙酸检测值[(1239.39±818.72)nmol/L]显著高于H组[(56.96±38.33)nmol/L](t=2.83,P=0.022)。吲哚乳酸代谢在唾液、血清及肠道中的表达一致,牙周炎患者唾液菌群导致小鼠肠道中吲哚乳酸产生菌相对丰度下降。结论牙周炎患者唾液菌群可能通过下调肠道色氨酸-AhR信号轴的表达影响全身炎症状态。

唾液菌群特征分析对儿童龋齿复发的预测价值

目的探究唾液菌群特征对儿童龋齿复发的预测价值。方法收集2017年1月至2018年1月在中铁十七局集团有限公司中心医院诊断及治疗的龋齿患儿94例,在进行龋齿治疗后第4周搜集唾液样本,并根据12个月后的龋齿发生情况分为复发组及未复发组,对比两组微生物检测结果,并使用ROC曲线评估微生物指标对龋齿复发的预测效能。结果本研究随访结束时,龋齿复发23例(25.84%)。龋齿复发与未复发组的唾液微生物组成存在显著差异:复发组的变形链球菌(Streptococcus mutans)、内氏放线菌(Actinomyces naeslundii)、普雷沃氏菌属(Prevotella)、二氧化碳噬纤维菌属(Capnocytophaga)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)、放线菌属(Actinobacillus)的相对丰度显著高于未复发组(均P<0.05),未复发组在纤毛杆菌属(Leptotrichia)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、链球菌属(Streptococcus)的相对丰度显著高于复发组(均P<0.05)。纤毛杆菌属、内氏放线菌、普雷沃氏菌属、变形链球菌载量预测龋齿复发的AUC值分别为0.753、0.715、0.680、0.940,其中变形链球菌的AUC值显著高于其他三种菌属(均P<0.05)。结论分析唾液菌群对儿童龋齿的复发具有一定的预测价值,其中变形链球菌的预测效能较好。

上消化道癌高危人群年龄与其唾液和粪便菌群结构的相关性分析

目的探讨上消化道癌高危人群年龄与唾液菌群和粪便菌群相对丰度的相关性。方法基于“农村上消化道癌筛查和早诊早治项目”,于2019年8月在河南林州市选择38名居民纳入研究。通过问卷调查收集研究对象的基本信息,同时收集唾液和粪便标本,并进行16S rRNA测序和生物信息学分析,并采用Spearman秩相关分析年龄与唾液菌群、粪便菌群的α多样性(Observed ASVs和Shannon指数)以及各菌群(菌门、菌属和菌种)相对丰度的相关性。结果38名研究对象的年龄M(范围)为54(43~69)岁;男性16名(42.1%)。唾液菌群的Observed ASVs与年龄呈负相关,rs值为-0.35(P<0.05);粪便菌群的α多样性与年龄没有相关性。唾液中密螺旋体属(r_(s)=‒0.44,P<0.05)、异普雷沃菌属(r_(s)=‒0.42,P<0.05)和卟啉单胞菌属(r_(s)=‒0.41,P<0.05)与年龄相关;菌种牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis)、坦纳异普雷沃菌(Alloprevotella tannerae)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、牛眼莫拉菌(Moraxella bovoculi)、Prevotella sp.oral clone ID019和Prevotella sp.oral clone ASCG10的相对丰度与年龄呈负相关,相关系数rs分别为-0.50、-0.40、-0.38、-0.35、-0.33和-0.33(均P<0.05)。粪便中肠杆菌属(r_(s)=-0.35,P<0.05)、埃希杆菌属(r_(s)=-0.33,P<0.05)和双歧杆菌属(r_(s)=0.33,P<0.05)的相对丰度与年龄相关;菌种沉积物龙包茨菌(Romboutsia sedimentorum)、穆氏柠檬酸杆菌(Citrobacter murliniae)和单形拟杆菌(Bacteroides uniformis)的相对丰度与年龄相关,相关系数rs值分别为-0.42、-0.37和0.36(均P<0.05)。结论上消化道癌高危人群年龄与唾液和粪便菌群相对丰度相关。