基于网络药理学和分子对接探讨黄花柳抗氧化作用机制研究

黄花柳(Salix caprea)具有较强的抗氧化作用,但目前关于黄花柳抗氧化作用机制的研究尚未详尽报道。文章通过网络药理学和分子对接技术筛选得到黄花柳活性成分21种,预测到靶点320个,抗氧化相关靶点1056个,取交集得到的黄花柳与抗氧化相关靶点118个,GO富集分析得到基因功能354条,KEGG通路富集分析得到通路146条。分子对接结果显示,核心成分柚皮素、二氢杨梅素、香叶木素等可与核心靶点AKT1、MAPK3、PIK3CA等均具有良好的结合活性。初步验证了黄花柳可通过多成分、多靶点、多途径发挥抗氧化作用,为下一步实验研究提供验证依据和方向。

黄花柳基因组微卫星分离及多态性位点检测

以生物素标记的(CT)15和(GT)15为探针进行杂交,借助磁珠筛选出含微卫星的Sau3AI酶切片段,构建了黄花柳微卫星富集文库,获得960个阳性克隆。随机挑选360个阳性克隆进行测序,发现含有微卫星的克隆比例达45%,最后获得的44条非同源性克隆中共含有53个微卫星位点,其中(TC/AG)n,(GA/CT)n,(CA/GT)n比例最高,占74%。随机选取其中的18个微卫星位点设计引物,用5个种个体混合DNA组成模板池,检测引物种间的多态性信息,初步筛选出5对引物在柳属种间有很好的通用性。说明微卫星富集法开发SSR标记不失为一种有效的方法。

黄花柳3个无性系叶色及叶绿素荧光特性比较

[目的]了解黄花柳资源的变异特性。[方法]以黄花柳3个无性系为材料,通过柯尼卡CR-400全自动色差计对其叶色参数进行测定,通过乙醇提取方法对其叶绿素含量进行测定,使用Pocket PEA快速荧光仪对其叶绿素荧光特性进行分析比较。[结果]叶绿素含量与L、a均呈显著负相关;金枝黄花柳的叶色偏黄、叶绿素含量较低,但其潜在光化学活性最强,对强光胁迫具有较强的自我保护能力;普通黄花柳叶色偏绿、叶绿素含量较高,其潜在光化学活性也较强,但其对光能的利用率最低;红枝黄花柳的叶色较金枝黄花柳偏绿,较普通黄花柳偏黄,其叶绿素含量与光能利用率均介于二者之间。[结论]叶绿素含量越高叶片颜色越偏绿色且越明亮;金枝黄柳较其他2个黄花柳无性系叶片颜色更鲜艳,且其光化学活性最强,对光能的利用率最大。

黄花柳中总黄酮含量的研究

采用乙醇回流提取法,以亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠为试剂,芦丁为对照研究黄花柳花穗中黄酮类化合物的最佳提取工艺条件。用正交实验法对黄花柳花穗中的黄酮类化合物的提取工艺进行了优化研究,采用正交表L9(34),以乙醇浓度、回流温度、回流时间及料液比为因素,以总黄酮显色液的吸光度为指标进行实验。得到的黄花柳花穗中总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度为50%,料液比为1∶40,回流温度为70℃,回流时间为3 h,在最佳工艺条件下的黄酮含量为26.82 mg/g。实验方法简单、方便,结果准确、可靠,最佳条件适合批量生产中该药材的提取。

黄花柳花中黄酮类成分的薄层色谱分析及抗氧化活性研究

目的建立黄花柳花中黄酮类薄层色谱(TLC)鉴别方法,测定其抗氧化活性。方法采用聚酰胺薄膜层析色谱法对黄花柳花中的黄酮类成分进行鉴别,以75%微乳液-甲酸(9∶0.5)为展开剂,NP-PEG显色,紫外灯366nm下检视。采用薄层生物自显影技术测定黄花柳花对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)的清除能力。结果黄花柳花TLC色谱图中,在与芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品色谱图相应的位置上,均显示相同的亮黄色及绿色斑点;黄花柳花的黄酮类成分对DPPH清除能力IC50为2.4mg/mL,Vc的IC50为16.7μg/mL,黄花柳花的黄酮类成分清除DPPH自由基的能力低于Vc;薄层生物自显影实验发现芦丁和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在紫色背景下呈现白色斑点,证明二者具有抗氧化活性。结论薄层色谱方法的建立为黄花柳花质量控制提供了依据,为黄花柳花抗氧化活性的药效学研究奠定了基础。

响应面分析法优化超声波提取黄花柳总黄酮工艺

通过响应面分析法(Response Surface Method,RSM)对超声波提取黄花柳总黄酮的工艺条件进行了优化。在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合设计原理采用乙醇浓度、提取时间、料液比三因素的响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的影响因子,以黄花柳总黄酮含量为响应值作响应面和等高线,在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出黄花柳总黄酮含量的最佳工艺条件;结果表明:超声波提取黄花柳总黄酮含量的最优工艺参数为:乙醇浓度63.88%,超声提取时间21.45 min,料液比1:35.94。所选用的二次多项模型具有显著性。超声波强化提取具有提取时间短、收率高、无需加热的特点。

一测多评法测定黄花柳花中5个黄酮类成分

目的建立黄花柳花中5个黄酮类成分含量测定的一测多评方法。方法采用高效液相色谱法,以芦丁为参照对照品,计算其与木犀草素-7-О-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子,考察相关影响因素并确立相对校正因子。样品测定中以芦丁含量按相对校正因子直接计算出其他4个成分的含量,从而建立起以芦丁为对照品的一测多评法,并与外标法测得值比较验证。结果相对校正因子分别为f_(木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷/芦丁)=1.49(RSD=1.84%)、f_(芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷/芦丁)=2.26(RSD=2.26%)、f_(木犀草素/芦丁)=2.63(RSD=1.01%)、f_(芹菜素/芦丁)=2.86(RSD=1.55%),重复性良好。通过t检验,样品的一测多评法计算值与外标法测得值之间无显著性差异,实验所得的校正因子可信。结论建立的一测多评法同步测定黄花柳花中5个黄酮类成分的含量是可行的、准确的,可用于黄花柳花的质量评价。

金枝黄花柳回交子代枝条颜色与转录组研究

为了探究枝条颜色变异的原因,以金枝黄花柳回交子代及其亲本为材料,分析子代枝条性状遗传变异规律及性状与基因表达的关系。结果显示,金枝型回交子代枝条表现为黄色到橙色,普通型回交子代枝条表现为墨绿色至棕色,不同单株个体之间存在颜色差异。枝条转录组共检测到差异表达基因2499个,其中上调基因984个,下调基因1515个。功能注释和富集分析发现,卟啉与叶绿素代谢通路(KEGG&ko00860)中与色素合成有关的基因表达量存在差异,其中叶绿素/细菌叶绿素a合成酶(2.5.1.133;2.5.1.62)与叶绿素/细菌叶绿素a还原酶(1.3.1.111)基因表达上调,叶绿素酶(3.1.1.14)基因表达下调。基因差异表达会影响代谢通路,进而影响枝条中叶绿素的含量,导致枝条颜色存在差异。

新疆维吾尔医药材黄花柳花中无机元素的测定

目的:分析新疆黄花柳花中的无机元素,为新疆黄花柳花的合理药用提供依据方法:应用IRIS全谱直读等离子体发射光谱仪对新疆维医药材黄花柳花中无机元素进行了分析测定。结果:新疆维医药材黄花柳花中含有钾、钠、钙、镁、磷、锌、铁、锰、锶、铜、钡等11种无机元素,其中钙和钾含量最高,含有6利人体必须微量元素。结论:本研究所采用分析方法为电感耦合等离子发射光谱法,操作简单,方法灵敏,数据结果可靠。

3种黄花柳不同叶位叶色·叶绿素含量及其快速荧光研究

[目的]明确叶色参数、叶绿素含量和叶绿素荧光特性在不同叶位的分布规律,了解黄花柳生理信息和光合潜力。[方法]对3种黄花柳不同叶位(顶部、中部、基部)叶片的叶色参数、叶绿素含量和叶绿素荧光的变化规律进行比较分析。[结果]3种黄花柳叶色参数(L、a、b)中,金枝黄花柳顶部叶片的L值最高,叶片表现为光滑、光亮。普通黄花柳顶部叶位的a值为“+”值,叶片偏红。3种黄花柳各叶位叶片b值均为“+”值,叶色均偏黄。通过叶绿素含量分析,发现金枝黄花柳和红枝黄花柳的叶绿素总含量大小表现为中部叶>基部叶>顶部叶,而普通黄花柳的叶绿素总含量表现为基部叶>中部叶>顶部叶,金枝黄花柳和红枝黄花柳不同叶位间的叶绿素a/b无显著差异。在叶绿素荧光参数分析中,3种黄花柳F_(v)/F_(m)、F_(v)/F_(o)、ABS/RC、PI的变化在顶部叶较低,中部和基部叶相对较高。[结论]金枝黄花柳和普通黄花柳与普通绿色植物相比叶色富有特点,观赏价值高;3种黄花柳顶部叶片受到的光抑制程度显著高于中部和基部,叶片活性降低。

新疆维吾尔医药材黄花柳叶中总黄酮含量的测定

目的:新疆维吾尔医药材黄花柳叶中总黄酮含量的测定。方法:采用紫外可见见光光度法,乙醇回流提取,以亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠为试剂,芦丁为对照品,于503nm波长处测定黄花柳叶中总黄酮含量并选择最佳提取条件。结果:在最佳提取条件下黄花柳叶中总黄酮含量为4.17%。黄花柳叶中总黄酮的最佳提取条件为:乙醇浓度为50%,料液比1∶30,回流时间为1小时,回流温度为70℃。结论:该方法简单、快速,准确,最佳提取条件适合该药材的提取。

HPLC法测定黄花柳花中5个黄酮类成分的含量

目的:建立黄花柳花中芦丁、木犀草素-7-О-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的HPLC分析方法。方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长340nm,流速0.8mL/min,柱温30℃。结果:芦丁、木犀草素-7-О-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、芹菜素的线性范围分别为8.11~121.68μg/mL(r=0.9994),2.92~43.80μg/mL(r=0.9995),4.13~61.92μg/mL(r=0.9995),2.04~30.60μg/mL(r=0.9995),2.05~30.78μg/mL(r=0.9996);平均回收率(n=9)分别为100.25%(RSD=1.60%),98.24%(RSD=1.23%),101.57%(RSD=1.25%),98.45%(RSD=1.42%),101.30%(RSD=1.17%)。结论:本方法操作简便,快速准确,可以用于黄花柳花中黄酮类成分的定量分析。