利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位

目的 用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果 经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。 结论 实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。

快速检测O9抗原沙门菌免疫金标层析法的建立及其应用研究

目的:建立一种快速检测O9抗原沙门菌的新方法。方法:利用针对沙门菌O9抗原的两株特异性单克隆抗体,建立一种双抗体夹心检测O9抗原沙门菌的胶体金免疫层析试纸条(GICA)。结果:该试纸条对标准肠炎沙门菌LPS的最小检出量为0.15 ng/条,对肠炎沙门菌菌液的最小检出量为2×105cfu/条。蛋品、鸡肉、猪肉的人工污染试验显示,经增菌后免疫层析试纸条可检出1 cfu的肠炎沙门菌,在大肠杆菌与沙门菌比例为1000:1仍不干扰试纸条的检测。共对市场采集的鸡蛋、鸡肉以及猪肉样品577份进行免疫层析试纸的检测,试纸条与经典细菌分离鉴定法相比:敏感度为90.0%,特异性为98.6%。结论:检测O9抗原沙门菌的GICA法快速、特异、灵敏,在重要沙门菌病检测方面有着潜在、广阔的应用前景。