鸡源山夫登堡沙门菌分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】确定广东某肉鸡养殖场疑似沙门菌感染病例的病原及其药物敏感性,为制定有效的防控和净化措施及合理的用药方案提供科学依据。【方法】本研究对广东省某规模化鸡场若干份病鸡的肝脏和肠道样品进行沙门菌的分离培养、革兰染色、生化试验、invA特异性基因PCR鉴定、16S rRNA鉴定、血清学分型,采用K-B纸片法检测菌株对20种抗菌药物的敏感性,并通过PCR方法检测菌株的耐药基因和毒力基因。【结果】细菌分离培养可见无色透明、呈细小的露珠样菌落或光滑圆整、透明湿润、中心为黑色的菌落,疑似菌落革兰染色呈粉红色、散在分布、两端稍圆的短杆菌,无荚膜,无芽孢;分离菌生化试验呈产气、底层产酸、产硫化氢呈黑色且斜面产碱变红现象;对疑似菌落DNA进行PCR扩增,invA特异性基因扩增出大小约为285 bp的条带,16S rRNA基因扩增出大小约为1500 bp的条带,本研究共分离鉴定出8株山夫登堡沙门菌。药物敏感性试验结果显示,8株菌对头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、米诺环素、强力霉素、多黏菌素B均无耐药性,但对青霉素、头孢氨苄、万古霉素、红霉素、林可霉素、氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢曲松、头孢哌酮、链霉素、四环素的耐药率较高,介于87.5%~100%,且分离株均为多重耐药菌;有7株菌均检出qnrS和stcM耐药基因,有1株未检出任何耐药基因;毒力基因检测结果显示,毒力基因invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 1的检出率均为100%,sopB和ssaR基因检出率分别为50.0%和62.5%。【结论】本研究分离的鸡源山夫登堡沙门菌均具有多重耐药性,对头孢他啶、阿米卡星等7种药物敏感,invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 16种毒力基因的携带率均为100%。本研究结果补充了鸡源沙门菌病的流行病学资料,为临床沙门菌的防控和净化提供了理论参考。

上海市沙门菌血清型流行特征

目的建立本市沙门菌数据库,初步了解本地区部分沙门菌血清型的流行特征。方法以1999-2007年于从业人员体检、食品、腹泻病人质控(QC)和沙门菌监测对象分离的1078株沙门菌的血清型进行回顾性分析;其中2006年和2007年按照全球沙门菌监测(GSS)方案进行连续性腹泻病例监测。结果血清型谱显示本市不同来源的沙门菌型在分布上存在优势交叉,GSS分离菌株中有7个型为国内首次报告;通过分子分型证明本市2006年的山夫登堡和2007年的汤卜逊病例分别属于2个和1个克隆型。结论肠炎、鼠伤寒仍是本市优势致泻性血清型,山夫登堡和汤卜逊病例符合沙门菌性相对散发和集中暴发的分子流行特征。加强对沙门菌综合监测和准确及时的血清、分子分型能力有助于检索和追溯流行菌型。

不典型山夫登堡沙门菌流行菌株的鉴定

目的对新出现的硫化氢(H2S)阴性山夫登堡沙门菌流行菌株进行鉴定。方法比较腹泻患者分离的山夫登堡沙门菌落、生化、耐药表型和沙门菌毒力岛1(SPI-1)的编码基因表型(hilA、invA),使用Riboprinter(进行核糖体指纹图谱分型,脉冲凝胶电泳(PFGE)选用XbaⅠ限制性内切酶,聚类软件选用BioNumerics软件。结果 2006年30株山夫登堡沙门菌腹泻菌株中,确认12株属于H2S和hilA、invA基因均阴性的表型不典型菌株;所有菌株除对四环素有较高耐药性(75.6%)外,对其他测试抗菌药物均较敏感;Riboprinter(核糖体分型图谱证实不典型与典型山夫登堡沙门菌在遗传学上属独立的克隆;PFGE分型将34株腹泻株分成16个带型,11株不典型菌株间存在90%的遗传学同源,优势带型为6型(6株)和4型(3株);13株典型菌株间有80%的遗传学同源,优势带型为17型(5株)、23型(5株)和11型(3株),不典型与典型菌株分别聚类成2个克隆族。结论生化、基因表型和遗传学特征不典型的山夫登堡沙门菌构成了2006年上海市山夫登堡的多点暴发病例,建议使用经过优化的常规和分子生物学方法以避免临床实验室对表型不典型沙门菌株的漏检。

上海市动物源食品中山夫登堡沙门菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

【目的】了解上海市动物源食品中山夫登堡沙门菌Salmonella Senftenberg的流行情况、耐药性和分子分型情况.【方法】于2008—2012年在上海分离鉴定得到15株动物食品源山夫登堡沙门菌,通过琼脂稀释法进行最小抑菌浓度测定,并应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型研究.【结果和结论】15株山夫登堡沙门菌有7株对磺胺异恶唑具有耐药性(46.7%),除1株对链霉素耐药外(6.67%),对其他抗生素均较为敏感.PFGE分型分为10个基因型.部分不同来源的基因型(X3,X4,X5)具有高度的相似性(88.2%),表明这些不同来源的菌株可能存在流行相关性.

一起山夫登堡沙门菌食物中毒的检测与溯源

目的查明一起食物中毒事件的病原,并对其进行溯源分析。方法对4份患者样本和8份食品留样进行病原菌的分离、培养和鉴定,对分离株进行药敏实验和脉冲场凝胶电泳分子分型。结果 4份患者样本和1份食品留样中检出山夫登堡沙门菌,5株分离菌株均对磺胺甲恶唑耐药,其PFGE图谱相似性系数为100.0%。结论本起食源性疾病暴发疫情是由进食被山夫登堡沙门菌污染的食品所致。

多个地区不同来源山夫登堡沙门菌分子分型研究

目的研究不同地区、不同来源山夫登堡沙门菌之间的传播关系,并分析其耐药情况。方法对分离的70株山夫登堡沙门菌采用K-B纸片扩散法分析其耐药性,并通过脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分子分型技术进行山夫登堡沙门菌的聚类分析。结果 70株山夫登堡沙门菌对于大多数抗生素耐药性较低,但是对于磺胺异噁唑,耐药和中介耐药的菌株达到了60%以上。同时还出现了3株对头孢噻呋耐药的菌株。PFGE结果分析显示70株山夫登堡沙门菌可分为42个不同的PFGE带型。北京市、上海市、南京市的部分菌株,有人、食品和环境3种不同来源,表现出完全相同的PFGE带型,亲缘关系十分密切。结论山夫登堡沙门菌具有遗传多态性,可能在环境、食品和人之间相互传播,应该加强监测,防止其进一步扩散。

2021年新乡市一起山夫登堡沙门菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的分析2021年新乡市一起山夫登堡沙门菌食物中毒分离株的病原特征。方法对食物中毒事件进行流行病学调查;对采集的11份样本进行致病菌分离鉴定;对分离出的10株沙门菌进行血清学分型、药敏试验、5种毒力岛(SPIs)特征基因片段(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB)检测及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型分析。结果10株沙门菌血清抗原式均为1,3,19;g,s,t,即山夫登堡沙门菌。10株沙门菌对头孢唑啉、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星的耐药率为100%,其中从患者粪便中分离出的2株对氨苄西林、四环素、多西环素、氯霉素、复方新诺明的耐药率为100%。PFGE图谱聚类分析显示,10株菌(2株病例株,5株食品株,3株环境株)之间条带无差异,高度同源。10株菌中5种毒力岛特征基因片段均检出。结论本起食物中毒事件致病因子为山夫登堡沙门菌,该菌携带5种毒力岛特征基因片段,2株病例株沙门菌具有多重耐药性,建议相关部门高度关注。

脉冲场凝胶电泳技术用于两起山夫登堡沙门菌疫情溯源

目的:用脉冲场凝胶电泳技术对北京市两起沙门菌暴发疫情进行病原菌菌株之间的相关性分析。方法:对两起食物中毒事件中分离到的菌株进行PFGE实验,将得到的图谱利用BioNumerics软件UPGMA方法进行聚类分析。结果:两起食物中毒事件中分离到的9株山夫登堡沙门菌经过XbaI酶切后,得到同一种带型。结论:两起食物中毒均为同一带型山夫登堡沙门菌引起,提示可能有共同的传染源。

一株不典型山夫登堡沙门氏菌的鉴定及其16SrRNA序列分析

目的对一株从广州市食品从业人员肛拭子中分离的蔗糖发酵型沙门氏菌进行鉴定。方法应用培养特性试验、生化分析、血清型鉴定,及16S rRNA序列分析进行鉴定。结果该菌培养特性及生化特性符合沙门氏菌定义,但与普通沙门氏菌在蔗糖利用、硫化氢产生上存在差异。血清型鉴定为山夫登堡沙门氏菌(Salmonella enterica Subsp·enterica serovar Senftenberg),16S rRNA序列分析为肠道沙门氏菌亚种(Salmonella enterica subsp)。结论该菌为一株蔗糖发酵型、硫化氢阴性的不典型山夫登堡沙门氏菌。

一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻株的分子溯源

[目的]研究一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻菌株遗传克隆特征。[方法]收集、分析本地区参加全球沙门菌监测(GSS)腹泻病例中分离的山夫登堡沙门菌生化、编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)和耐药特征;应用Riboprinter(r)(RP)DNA指纹图谱系统比较表型典型与不典型菌株的核糖体分型;通过Pluse Net China数据库中同型菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱聚类比较分子型谱。[结果]2006年长宁区GSS监测病例分离出19株山夫登堡沙门菌,其中10株属于硫化氢阴性和SPI-1毒力岛缺失的表型变异菌株。RP分型证实发生变异的山夫登堡沙门菌与典型菌株间分属2个不同的克隆。Pluse Net China数据库将包括长宁区19株山夫登堡沙门菌在内的36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。长宁区的表型变异株优势型分属4型(2株)和6型(6株),典型菌株的优势型分属11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。聚类分析显示,表型变异株的克隆在遗传相似度上高于典型株。[结论]分子溯源证实,SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌变异菌株与典型菌株同样具有引发局部爆发的致病性。2006年长宁区分离的硫化氢阴性山夫登堡沙门菌变种腹泻株与2002年深圳市的1例食物中毒案例分离的2株SPI-1毒力岛缺失株存在同源性。

89株山夫登堡沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型及耐药性分析研究

目的分析2005-2011年杭州市下城区89株山夫登堡沙门菌的脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分子型别和耐药性,建立杭州市沙门菌指纹图谱数据库。方法 89株山夫登堡沙门菌用XbaⅠ酶切、PFGE获得电泳图谱,使用BioNumerisc统计软件聚类分析比较同源性。采用K-B法测定菌株对抗生素敏感性。结果以相似度≥85%为判定标准,89株山夫登堡沙门菌可分为10个PFGE带型,其中68株集中在一个PFGE基因型内。不同年份基因型无明显规律性。89株山夫登堡沙门菌对所选11种抗生素敏感性≥85.19%。结论杭州市下城区2005-2011年分离的89株山夫登堡沙门菌有明显的克隆株优势带型存在,对抗生素敏感性较高。