应用PCR检测食品中沙门氏菌前增菌程序的优化

为了探讨更为简便、快速的增菌程序,对4株食品中来源沙门氏菌进行增菌,比较振荡培养与静止培养,MM增菌液和BPW增菌液,以及以BPW为增菌液培养6、8、24h的增菌效果。结果显示对于4株食品中来源的沙门氏菌增菌6h和8h后,振荡培养相对于静止培养并不能够提高沙门氏菌的增菌效果(p>0.05),但增菌24h后振荡培养能够极显著的提高增菌效果(p<0.01);在增菌6h和8h后,使用MM增菌液相对于BPW增菌液并不能提高增菌效果(p>0.05),但增菌24h后,使用MM增菌液能够极显著的提高增菌效果(p<0.01);与使用BPW增菌液增菌8h比增菌6h的增菌效果达到极显著效应(p<0.01),增菌24h与增菌8h相比,增菌效果极显著(p<0.01)。结果表明:应用PCR检测食品中的沙门氏菌前对于沙门氏菌增菌的前8h,使用振荡培养和选择性培养液MM培养液增菌并不能提高增菌效果;使用BPW增菌液增菌8h与增菌6h相比增菌效果显著。由此可见在对食品中的沙门氏菌增菌时使用BPW液37℃静止培养增菌8h,是一种优化的增菌程序。

PNT—PCR检测食品中沙门氏菌方法的建立及应用

本文将自行研制的一种沙门氏菌强选择性增菌液PNT与PCR技术相结合,建立了快速、特异、敏感地检测食品中沙门氏菌的PNT—PCR技术。通过对食品样品、污水样品的检测,结果表明该检测系统可检出食品中10cfu的沙门氏菌。应用本检测系统检测各类食品及污水样品612份,PNT—PCR法检出沙门氏菌198份,而常规方法检出104份,本法在特异性、敏感性及实际样品检出率方面均显示了很强的优越性。

mini-MPN-STE-qPCR法快速定量检测食品中沙门氏菌

目的建立一种快速、简易、可定量检测食源性沙门氏菌定量PCR (quantitative PCR, qPCR)方法。方法依据沙门菌属invA基因序列设计染料法qPCR引物,建立沙门氏菌qPCR检测方法,并通过短时间增菌(short time enrichment, STE)的5管微型多管发酵计数法(mini-most probable number, mini-MPN)进行定量检测,构建mini-MPN-STE-qPCR法。使用人工污染的鸡肉混合液进行定量检测,检测结果与传统MPN计数法和平板计数法进行比较分析。结果建立的qPCR法特异性良好,方法灵敏度为50CFU/mL,结合48孔板min-MPN和4 h短时间增菌,建立的mini-MPN-STE-qPCR法可将整个检测流程缩短至7 h。人工添加沙门氏菌的鸡肉混合液检测结果表明方法检出限为-0.347logMPN/mL,Bland-Altman分析结果显示,此法与传统MPN计数法相关系数r2=0.994,与平板计数法相关系数r2=0.992。结论该方法准确、简单易行、成本低、灵敏度高,可用于食品中沙门菌的快速定量检测。

增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的比较研究

目的比较增菌-PCR法与传统方法检测禽肉中沙门菌的敏感性、特异性和时效性。方法以沙门菌invA基因为基础,选择特异性引物,采用30株沙门氏菌和18株非沙门菌建立并验证PCR法的特异性。选用肠炎沙门菌CMCC50041,参照GB4789.4—2010进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g样本1、10、102、103、104、105和106 CFU。分别在增菌0、4、8、12和18h取1ml培养液,提取DNA进行PCR检测,并同时划线接种选择性平板,用传统方法进行分离鉴定,比较两种方法检测的敏感性和特异性。采集16份市售整鸡样本,用这两种方法进行检测,进一步比较两者的阳性检出率。结果 30株沙门菌都检出阳性,而非沙门菌都检测为阴性,说明本研究建立的PCR法特异性好。人工染菌的样本在增菌12h后,PCR法检出限可达每25g禽肉样本1CFU,传统方法检出限为每25g禽肉样本10CFU。增菌-PCR法整个流程只需要1天,比传统方法需时提前4～6天。16份市售样本,增菌-PCR法的阳性率为43.75%(7/16),高于传统方法31.25%(5/16)。结论增菌-PCR法具有快速简便、敏感特异等优点,较传统方法大大缩短了检出时限,提高了沙门菌的检出率。

食源性沙门菌PCR检测方法的建立

目的进一步探索食源性沙门菌的快速检测方法。方法本研究通过现代免疫磁珠技术和PCR检测技术建立了一套"磁珠富集+PCR检测"的快速高效PCR检测系统。结果该系统的方法灵敏度可以达到103拷贝/μl,准确度为100%,与常规PCR检测方法相比,具有较高的准确度和检测灵敏度并且该系统通过免疫磁珠富集技术,将冗长繁琐的前处理时间缩短为8 h。结论该检测系统方法的建立,为探索解决食源性微生物检测中的前处理难题提供了新的解决思路,为开发具有更好市场应用潜质的快速检测试剂盒奠定了技术基础。

食品中热损伤沙门氏菌选择性增菌及实时荧光聚合酶链式反应检测

为了能够高效检测食品中的亚致死损伤沙门氏菌,首先采用热激胁迫的方法得到亚致死损伤沙门氏菌细胞,进而基于选择性增菌培养液SEL建立一种实时荧光聚合酶链式反应检测技术。结果表明:在SEL中经过20h增菌培养后,无论是否经过修复培养,1～2CFU/5mL SEL的亚致死损伤细胞都能得到完全修复并增菌至109CFU/mL水平;依此建立的实时荧光聚合酶链式反应检测技术的纯菌扩增效率为95.41%,检测限为4CFU/反应体系,在人工污染碎食品样品中的检测限为3CFU/10g碎牛肉,而且与传统培养检测方法的结果相吻合。本方法在24h内即可完成食品中热损伤沙门氏菌的修复、选择性增菌以及实时荧光聚合酶链式反应检测,可应用于食品中沙门氏菌污染状况调查及高效检测。