生物短期试验(Ames试验法)用于柴油机排气微粒直接致突变性的研究

运用生物短期试验 (Ames试验 )探讨了柴油机排气微粒的直接致突变性 ,并对发动机不同工况下微粒的直接致突变性变化进行了评估。所用的菌种为 TA98和 TA10 0 ,主要考察碱基对置换突变和移码致突变。试验结果表明 ,柴油机排气微粒 Ames试验显阳性 ,具有强烈的致突变性 ;菌落回变数同柴油机微粒质量及排气体积线性关系不明显 ;除了多环芳香烃外 ,还有其它有机物质对柴油机直接致突变性影响很大 ;大气微粒的单位质量致突变性同柴油机相当 ,而单位体积的致突变性 。

曲克芦丁原料药在Ames实验中的抗突变作用研究

目的:探讨曲克芦丁原料药对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行评价。方法:采用直接平皿掺入法,将曲克芦丁原料药以5、1、0.2、0.04、0.008mg曲克芦丁/皿为终浓度,在活化与非活化条件下,分别与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株,37℃接触48小时,计数回变菌落数。结果:在5～0.008mg曲克芦丁原料药/皿的不同测试浓度,+S9与-S9两种测试系统条件下,其作用的5种测试菌株的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,回变菌落背景正常,未显示其有抑菌作用,且无剂量-反应关系。结论:曲克芦丁原料药在本试验所确定的5mg/皿剂量范围内,对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性。

Ames试验与HPRT试验两种方法对6种氧化型染发剂的检测

目的:通过细菌回复突变试验(Ames试验)和体外哺乳动物细胞基因突变试验(HPRT试验)两种方法检测氧化型染发剂,并对其结果进行分析比较,探讨两种方法在检测氧化型染发剂致突变性中的应用。方法:Ames试验采用一组营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌检测6种氧化型染发剂。各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从312~10 000μg/皿,通过计算受试物回复突变菌落数,判定受试物的致突变性。HPRT试验采用体外培养的V79细胞,各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从4.88~5 000μg/mL,研究6种氧化型染发剂致细胞HPRT位点突变的频率,通过计算受试物引起的V79细胞的突变频率,判定其致突变性。结果:在Ames试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,受试物在2 500~10 000μg/皿剂量范围均存在回变菌落数超过溶剂对照组两倍的情况,并有剂量-反应关系,表明Ames试验检测6种氧化型染发剂均为阳性结果。而在HPRT试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,各受试物在>2 500μg/mL时具有明显毒性作用,在9.75~2 500μg/mL剂量范围细胞突变频率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,表明HPRT试验检测6种氧化型染发剂均为阴性结果。结论:由于氧化型染发剂有明显的细胞毒性,导致HPRT试验无法设计更高的剂量,从而无法反映受试物致突变性的真实水平。而Ames试验具有简单、快速、经济等优点,可作为检测氧化型染发剂致突变性的首选方法。

玉米胚芽抗氧化肽的急性毒性和致突变性

研究玉米胚芽抗氧化肽在小鼠体内的急性毒性及致突变性,为其开发应用提供安全保障。采用最大耐受量法、小鼠精子畸形实验、骨髓微核实验和Ames实验对玉米胚芽抗氧化肽进行急性毒性和致突变性研究。结果表明:玉米胚芽抗氧化肽对小鼠的急性经口最大耐受剂量(maximum tolerated dose,MTD)大于34 g/kg(以体质量计);3项致突变实验结果均为阴性,故玉米胚芽抗氧化肽无急性毒性和致突变性。

骨水泥的遗传毒性研究

目的检测医疗器械进口产品骨水泥的遗传毒性。材料与方法以骨水泥粉体浸提液与其液体混合液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验采用平板掺入法,检测了25、50、100 ml/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌(E.coli)WP2 uvrA的回变菌落数;MLAT采用微孔法检测了终浓度0.125%、0.25%、0.5%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发L5178Y细胞tk+/-基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果 Ames试验,50、100 ml/皿剂量组在加入磷酸缓冲液或S9混合液后略有沉淀产生,并对TA100、TA1535、WP2 uvrA产生不同程度的抑菌作用,无抑菌剂量诱发五株菌的回变菌落数对比DMSO溶媒(阴性)对照组,均无明显增加;MLA,各浓度组在三种处理条件下诱发的MF、SC%与其溶媒(阴性)对照组比较,无明显增加(P>0.05)。结论本实验条件下,骨水泥对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,对测试细胞tk+/-及染色体无明显损伤作用。

寿胎丸对TA97、TA98、TA100、TA102菌株基因回变菌落的影响

目的探讨寿胎丸对TA97、TA98、TA100、TA102菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行研究。方法采用直接平皿掺入技术,设寿胎丸不同剂量组,并对TA97、TA98、TA100、TA102系列菌株进行体外染毒,观察其回变菌落增长状况。结果在0.8至200.0 mg/皿的不同测试浓度,+S9与-S9两种测试系统条件下,其作用的4种测试菌株的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,回变菌落背景正常,未显示其有抑菌作用,且无剂量-反应关系。结论寿胎丸药液在本试验所确定的200.0 mg/皿剂量范围内,初步认为对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性。

养精种玉汤对TA系菌株基因回变菌落影响的研究

目的：探讨养精种玉汤对TA97、TA98、TA100、TA102菌株基因回变菌落的影响，对其遗传安全性进行研究。方法：采用直接平皿掺入技术，设养精种玉汤不同剂量对TA97、TA98、TA100、TA102系列菌株进行体外染毒，观察其回复突变菌落增长状况。结果：在0．8～200．0mg／皿的不同测试浓度，＋S9与-S9两种测试系统条件下，其作用的4种测试菌株的回变菌落数与溶剂对照相比均无明显增加，回变菌落背景正常，未显示其有抑菌作用，且无剂量一反应关系。结论：养精种玉汤药液在本试验所确定的200．0mg／皿剂量范围内，初步认为对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性。

细菌回复突变试验标准菌株分子质控方法的研究

目的建立细菌回复突变试验标准菌株的分子生物学质量控制(质控)方法。方法使用分子生物学方法(16s rDNA、种属特异性鉴定PCR、组氨酸操纵子关键突变位点序列分析、凝胶电泳和多位点序列分析方法)鉴定细菌回复突变试验标准菌株,并与传统生物学特性的质控方法进行比对。结果细菌回复突变试验标准菌株的生物学特性结果符合标准要求;16S rDNA序列比对为沙门菌,且种属特异性扩增结果为鼠伤寒沙门菌;标准菌株均具有组氨酸操纵子区原始构建的突变位点;脉冲场凝胶电泳带型均不一致,最低相似度为82%;多位点序列分析可分为ST19和ST3438两个ST型。结论建立了细菌回复突变试验标准菌株的分子生物学质控方法,该方法具有操作性强和重复性好等特点,与传统生物学特征方法具有很好的一致性,特别是针对相应his基因突变位点的检测手段,确保了细菌回复突变试验标准菌株检测的遗传稳定性和准确性。

鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验中通过吸光度值测定菌液浓度的方法研究

目的:研究鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)中菌液浓度和吸光度值[D(λ)值,λ为波长数值]的关系,开发通过吸光度值测定菌液浓度的方法。方法:选取Ames试验中常用的营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA102作为试验菌株,严格控制菌液扩增条件,对比分析540和600 nm波长下菌液的吸光度值的高低以确定最佳测定波长,对比分析菌株扩增0、2、4、6、8、10、12、14 h后的菌液浓度以确定最佳扩增时间。在最佳测定波长和最佳扩增时间下,测定菌液吸光度值,并通过平板菌落计数法测定菌液浓度,获得菌液浓度和吸光度值的回归方程。结果:菌株TA102的最佳测定波长为540 nm,最佳培养条件为37℃、100 r/min、10 h,菌液浓度和D(540)值的直线回归方程为y=4×10^9x[方程中x为D(540)值;y为菌液浓度,单位为个/mL]。结论:应用上述菌液浓度和D(540)值的直线回归方程,可通过测定D(540)值实时控制菌液达到要求浓度,从而确保试验菌液的质量。

一种检测污染水体致突变性的快速简便方法

采用鼠伤寒沙门氏菌TA98菌株为测试菌株,二氨基芴为阳性物,通过分析菌液体积分数、S9体积分数、阳性物质量浓度的配比关系,确定了用于污染水体致突变性检测的微量波动法的最佳反应条件。在最佳反应条件下测试TA97、TA100、TA102菌株在河流水样检测中的反应情况,确定了适用于鼠伤寒沙门氏菌系列菌株在污水检测中的反应条件。

牡丹籽油软胶囊回复突变试验的研究

[目的]采用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames)对牡丹籽油软胶囊进行安全性毒理学试验。[方法]试验选用鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100和TA102菌株,将牡丹籽油软胶囊配制成浓度为5.0、1.0、0.2、0.04 mg/皿4个剂量,和阳性对照组(叠氮钠、2-氨基芴、敌克松)进行比较,观察各菌株的回变菌落数。[结果]牡丹籽油对4个菌株诱发的回变菌落数均未超过对照组2倍,为阴性结果。[结论]牡丹籽油对鼠伤寒沙门氏菌无直接致突变作用。

脱细胞异体真皮基质的遗传毒性研究

目的:检测医疗器械注册产品脱细胞异体真皮基质的遗传毒性。材料与方法:以产品浸提液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验采用平板掺入法,检测了50、100、200μl/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌WP2 uvrA的回变菌落数;MLA检测了终浓度2.5%、5%、10%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发的L5178Y细胞TK基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果:未经复水处理所得样品浸提液诱发五株菌的回变菌落数,对比氯化钠注射液溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/3 h处理条件下诱发的MF明显增加(P<0.01),且具有浓度相关性;复水处理后所得样品浸提液,在-S9/3 h、24 h条件下诱发的MF均无明显增加。结论:脱细胞异体真皮基质对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,未经复水处理时在-S9条件下对测试细胞tk-+/-及染色体具明显损伤作用,经复水处理后无明显损伤作用。产品在非代谢活化条件下表现出的阳性结果可能与其附加的冷冻保护剂有关。

应用菌株YG1024对吸烟者尿致突变性的研究

应用鼠伤寒沙门氏菌株ＴＡ９８及其富含硝基还原酶的衍生菌株ＹＧ１０２１和富含０－乙酰转移酶的衍生菌株ＹＧ１０２４检测了吸烟者尿的致突变性。结果表明，在有鼠肝Ｓ９存在时吸烟者尿样对菌株ＹＧ１０２４的致突变作用明显高于ＴＡ９８，而相同条件下菌株ＹＧ１０２１的回变性与ＴＡ９８大致相同。证明菌株ＹＧ１０２４在检测吸烟者尿致突变性上比传统的＂敏感＂菌株ＴＡ９８更为敏感。同时也提示吸烟者尿中的致突变物主要是芳香胺类物质。

骨水泥的遗传毒性研究

目的检测医疗器械进口产品骨水泥的遗传毒性。方法以骨水泥粉体浸提液与其液体混合液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9)和代谢活化(+S9)条件下检测。Ames试验检测了25、50、100μL/皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌(his-)TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌(trp-)WP2uvrA的回变菌落数;MLA检测了0.125、0.25、0.5%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h三种处理条件下诱发的L5178Y细胞tk-+/-基因突变频率(MF)和小集落突变百分率(SC%)。结果 +/-S9条件下,剂量组诱发五株菌的回变菌落数对比DMSO溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/24 h处理条件下0.5%(V/V)浓度组诱发的MF明显增加(P<0.01),但未达到阳性评判标准。结论骨水泥对试验菌的his-/trp-无明显诱变作用,对测试细胞的tk+/-及染色体无明显损伤作用。

通乳丹对TA系菌株基因回变菌落影响的研究

目的观察通乳丹对TA97、TA98、TA100、TA102系列菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行研究。方法采用直接平皿掺入技术,设通乳丹不同剂量对TA97、TA98、TA100、TA102系列菌株进行体外染毒,观察其回复突变菌落增长状况。结果在150-400mg/皿浓度下,并在-S9测试系统条件下,其作用的TA97、TA98、TA100测试菌株的回变菌落数与溶剂对照相比有明显增加,且成剂量-反应关系。结论通乳丹药液在本试验所确定的150-400mg/皿剂量范围内,初步认为对TA97、TA98、TA100系列测试菌株有一定的致DNA碱基置换及移码突变性。

杭州市区四个单位应用艾姆斯试验的八年回顾

本文总结了浙江医科大学等单位近8年来用艾姆斯(Ames)试验检测各类化学品和混合物58种,发现其中12种为诱变剂或含诱变成分物质(胺菊酯、三氯杀虫酯、2,5-二氯硝基苯、非氨化焦糖、氨化焦糖、茶色素、电烤鸡和鸭、炭烤鸭、熏鱼和叉烧硷提物,高效液体冰箱除臭剂);监测古运河杭州段水源,发现其中有诱变剂污染,并进行诱变与SOS反应相关的研究.同时介绍了测试中遇到的一些问题(如含组氨酸、易挥发、难溶性样品,菌株变异,标准诱变剂选择等等),并提出相应对策.

用菌株YG1024对液化石油气燃烧产物接触者尿诱变性的检测

对硝基多环芳烃及其衍生物特异性敏感的菌株已有许多。应用新引进的ＹＧ１０２１和ＹＧ１０２４菌株及传统的＂敏感＂菌株ＴＡ９８检测了液化石油气（ＬＰＧ）燃烧产物接触者尿的致突变性，并对三菌株的敏感性进行了比较。结果显示，在有鼠肝Ｓ９存在时，尿样对菌株ＹＧ１０２４的致突变作用明显高于ＴＡ９８（约为７倍），而相同条件下菌株ＹＧ１０２１的回变数与ＴＡ９８相差不大。揭示芳香胺是ＬＰＧ燃烧产物接触者尿中的主要致突变物，菌株ＹＧ１０２４有希望成为监测各种燃料燃烧产物接触人群尿致突变性的一个较敏感的指示菌。

槐实的诱变活性试验

本文介绍了诱变活性(Ames)试验的原理和方法。为了解槐实的致畸性,并以此试验对其进行了诱变活性的鉴定,同时对细菌学试验中的一些问题进行讨论。槐实含有各种水溶性维生素、还原糖、蛋白质和芦丁等成分,具有降低血管阻力、改善冠状动脉循环、降低血清转氨酶和消炎的作用,故该品有保肝和治疗痔疮的效果。试验证明槐实无诱变活性,表明其安全可靠。

互隔交链孢霉毒素AME和AOH合成物的诱变性

对互隔交链孢霉毒素——交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)和交链孢酚(Alternariol.AOH)的合成物进行了细菌回复突变试验.检测其诱变性。结果表明:AME和AOH提取物和合成物(不加S_9)对鼠伤寒沙门氏菌TA102菌株和大肠菌ND-160菌株.均显示致突变效应.而后者对AME和AOH更为敏感。用相同剂量.AOH对大肠杆菌ND—160菌株诱变比值(MR)比AME高2～7倍,表明AOH的诱变性更强。合成物与提取物相比,合成物的诱变作用较强。

赤灵芝的致突变性试验

使用赤灵芝的水提取液、乙醇（３０％）提取液进行鼠伤寒沙门氏菌回复、小鼠骨髓多染红细胞微核和雄小鼠精子畸变等三种致突变试验。剂量为１０００μｇ·皿^（－１）和５０００μｇ／皿^（－１）的鼠伤寒沙门氏菌回复试验的结果为阴性。小鼠在服用７５００ｍｇ·ｋｇ^（－１）的水提取液或２５００ｍｇ·ｋｇ^（－１）的醇提取液时，微核试验和精子畸变试验结果均为阴性。