6-羟基多巴模型大鼠salsolinol氮甲基转移酶活性检测

目的应用6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制作帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型,并对大鼠外周血淋巴细胞中salsolinol氮甲基转移酶(SNMT)的活性进行测定。方法利用单侧双点注射6-OHDA损毁大鼠纹状体,构建PD模型并对模型进行行为学评价;从模型大鼠外周血淋巴细胞中提取SNMT粗酶液,建立酶反应产物N-methyl-salsolinol(NMSal)的高效液相色谱串联三重四极杆质谱检测方法,以NMSal的生成量表征SNMT的活性。结果 18只经过6-OHDA注射的大鼠共有7只经阿朴吗啡诱导后表现为恒定向未损毁侧旋转(>7 r/min),建模成功率为38.9%。建立了基于多反应监测技术的SNMT活性的高选择性、高灵敏度、高重复性的表征方法。该方法中NMSal的检出限和定量限分别达到49 pmol/L和98 pmol/L,日内和日间精密度均在6.0%以下。检测结果显示PD组大鼠外周血淋巴细胞中SNMT的活性与假手术组、正常组相比差异有显著性(P<0.01,n=5),而正常组和假手术组之间差异无显著性(P>0.05,n=5)。结论外周血淋巴细胞中SNMT活性可能反映出PD发病状况,有望成为诊断的指标之一。

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对宫颈癌细胞生长及其甲基化转移酶和甲基结合蛋白DNA转录的影响

目的:检测5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基化转移酶(DNMT)及甲基CpG结合蛋白(MeCP)的DNA转录水平的影响,探索其对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:5-Aza-CdR(终浓度为5.0μmol.L-1)与肿瘤细胞共培养72h后,用PI染色及流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期;利用qRT-PCR鉴定药物组与空白组细胞DNMT及MeCP的mRNA浓度。吖啶橙(AO)细胞荧光染色法鉴定药物组与空白组细胞形态学上的差异及凋亡的程度。结果:FCM检测结果显示两组肿瘤细胞的细胞周期呈现明显差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,sub-G1峰明显。AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象且伴随少量的细胞坏死现象。qRT-PCR结果显示,空白对照组和药物组中均有一定量DNMT及MeCP的mRNA产物,但其mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。结论:5-Aza-CdR能够诱导体外培养的HeLa肿瘤细胞凋亡,而对于肿瘤细胞中甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的DNA转录无显著的影响。

5-脱氧杂氮胞苷抑制肝癌细胞DNA甲基转移酶转录

目的 明确 5- Aza- cd R对 DNA MTase转录水平的抑制作用。方法 用 5× 1 0 -7M的5- AZa- cd R处理肝癌细胞株 SMMC- 772 1和 H2和 Hep G2 ,就用 RT- PCR技术检测经药物处理前后 2株肝癌细胞 DNA MTase m RNA表达水平。结果 经 5- Aza- cd R处理后 ,2株肝癌细胞 DNAMTase m RNA表达量显著下降。结论 5- Aza- cd R能抑制肝细胞 DNA MTase转录 。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肝癌DNA甲基转移酶1及上皮钙黏附素表达的影响

目的：研究5-氮杂-2＇脱氧胞苷（5～Aza—CdR）对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1（DNMT1）及上皮钙黏附素（E-cadherin）表达的影响。方法：免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌（26例）及癌旁组织（20例）中的表达。用终浓度10μmol／L的5-Aza-CdR处理培养的肝癌细胞株GQY-7703作为实验组，未处理细胞为对照组；DNMT1基因和上皮钙黏附素基因（CDH1）的转录产物及表达蛋白分别使用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测；CDH1的甲基化状态使用甲基化特异性PCR（MSP）检测。结果：相比较癌旁组织，肝癌组织中上皮钙黏附素表达显著下调。5-Aza-CdR降低了GQY-7703细胞中DNMT1在转录水平和翻译水平的表达；CDH1CpG岛的甲基化水平降低；上皮钙黏附素mRNA和蛋白表达量明显增高，对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异具有统计学意义。结论：5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达，改变了CDH1基因的异常甲基化状态，进而恢复上皮钙黏附素的表达。

DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷的抗胃肠道肿瘤机制研究

目的 观察DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-2＇-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对胃癌细胞生长的影响.方法 将野生型P53人胃癌细胞株AGS细胞,加入不同浓度的5-Aza-CdR,体外培养至不同时间.MTT法检测细胞增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测细胞长期增殖活性（0 ～2.5 μM）;流式细胞仪检测细胞周期变化（25 μM,0、12、48、96 h）;Annexin V/PI双染实验检测细胞凋亡情况（2.5 μM,0、12、48、96 h）;比色法检测Caspase-3活力、Western blot检测Caspase-3前体蛋白及PARP（poly ADP-ribose polymerase,PARP）蛋白的含量（2.5 μM,0、12、48、96 h）.结果 随着5-Aza-CdR浓度增加,对肿瘤细胞的抑制作用亦增强,在50 μM作用72 h时,细胞存活率达最低值（31.9％）;随着药物处理时间的延长,胃癌AGS细胞凋亡增多,96 h的2.5μM 5-Aza-CdR作用下,细胞的生长抑制达到了最高峰（44.4％）,且其抑制作用表现为浓度和时间依赖性.5-Aza-CdR对肿瘤细胞长期生长有影响,克隆形成抑制率呈线性增加.流式细胞仪分析结果显示,随5-Aza-CdR作用时间延长,G2期细胞比例从0h的（5.7±0.2）％增加到96h的（28.5±0.2）％.随着药物作用时间的累加,其凋亡率逐渐增加,各时间组的细胞凋亡率与空白对照组之间的差异均具有统计学意义（P＜0.05）.与空白对照组比较,Caspase-3活力在药物处理48、96 h后显著提高（P＜0.05）,但12 h AGS细胞的Caspase-3活力无变化;48 h Caspase-3前体比12h和未用5-Aza-CdR时明显减少,96 h减少最为明显;PARP在AGS细胞内经5-Aza-CdR作用48 h后亦被活化,96h后几乎检测不到PARP的存在.结论 5-氮杂-2＇-脱氧胞苷,能增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性,可作为一种有效的抗胃肠道肿瘤药,.

DNA甲基转移酶类在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用

目的:探索DNA甲基转移酶类(DNA methyltransferases,DNMTs)在坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)发病机制中的作用。方法:腰段鞘内置管成功的27只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组+生理盐水组(sham+NS组)、CCI+NS组及CCI+5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-AZA)组(CCI+5-AZA组),每组9只。CCI术后第3天至第14天,sham+NS组和CCI+NS组每天鞘内注射1次NS,CCI+5-AZA组每天鞘内注射1次10μmol/L 5-AZA。分别于术前及术后第3,5,7,10,14天测定各组大鼠术侧后足机械痛阈和热痛阈。术后第14天各组大鼠于深麻醉下处死,取脊髓腰膨大,采用RT-PCR,Western印迹和免疫组织化学测定DNMT1,DNMT3a和DNMT3b的表达。结果:术后第3天至第14天,CCI+NS组的机械痛阈和热痛阈均较sham+NS组明显下降(均P<0.05)。术后第5天至第14天,CCI+5-AZA组的机械痛阈和热痛阈均较CCI+NS组明显上升(均P<0.05),但仍低于sham+NS组(均P<0.05)。DNMT1,DNMT3a和DNMT3b在大鼠脊髓腰膨大背角处有致密表达,且以胞核分布为主。术后第14天CCI+NS组的DNMT1,DNMT3a和DNMT3b表达较sham+NS组均明显上升(均P<0.05)。CCI+5-AZA组的DNMT1,DNMT3a和DNMT3b表达均较CCI+NS组明显下降(均P<0.05),但仍高于sham+NS组(均P<0.05)。结论:DNMTs在脊髓腰膨大处的表达上调很可能在CCI大鼠NPP发病机制中起重要作用。DNMTs抑制剂5-AZA可下调DNMTs的表达和缓解CCI诱导的NPP,可能成为NPP的潜在治疗药物。

去甲基化和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂对K562细胞增殖和肿瘤相关基因表达的影响

为观察去甲基化和组蛋白乙酰化对白血病细胞系K5 6 2增殖及肿瘤相关基因表达的影响 ,本研究将处于对数生长期的K5 6 2细胞系与 5 杂氮脱氧胞嘧啶 (DAC)和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂—曲古抑菌素 (trichostatin ,TSA)共同培养 ,观察细胞生长指数并利用流式细胞术检测细胞周期变化 ;利用Atlas774 2 1基因芯片筛查给药前后的基因表达差异。结果表明 ,DAC和TSA的联合应用能够抑制K5 6 2细胞的增殖 ,使大多数细胞阻滞在G0 期 ,并促进多个基因的表达上调及少数基因表达下调。结论 :去甲基化药物及组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂联合应用具有抗白血病作用 ,与基因芯片联合应用可以用来筛查白血病抑癌候选基因。

5-Aza-CdR对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响

目的:研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycitydine,5-Aza-CdR)处理肺癌细胞株A549后,DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,Dnmts)转录水平及其活性的变化,以及细胞生长状态的改变。方法:5-Aza-CdR处理A549细胞株,半定量RT-PCR检测癌细胞Dnmts的mRNA转录水平;酶活性连续循环比色法检测Dnmts的催化活性;流式细胞仪(FCM)及MTT法检测细胞的生长状态。结果:Dnmts的转录水平5-Aza-CdR处理前后水平分别为:Dnmt1(1.23±0.253,1.15±0.166)、Dnmt3b(0.760±0.164,0.649±0.181),两组无显著性差异(P>0.05)。两组Dnmts催化活性分别为:Dnmt1(0.195±0.030,0.153±0.041)、Dnmt3b(0.172±0.029,0.116±0.050),药物组催化活性下降(P<0.05)。FCM结果提示细胞周期阻滞于G1/G0期,两组凋亡率分别为0.62±0.56,7.60±1.92,凋亡率明显增加(P<0.01)。MTT结果示药物组细胞生长受抑制。结论:5-Aza-CdR抑制A549细胞株增殖,促进凋亡,对Dnmts的抑制作用是通过降低催化活性实现,不影响其转录水平。

甲基转移酶抑制剂对KG1a细胞系的增殖抑制作用

为探讨甲基转移酶抑制剂通过干扰DNA甲基化发挥抗白血病作用的可能性，采用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)和细胞分化剂CDAⅡ体外处理因高甲基化致p15基因表达失活的髓系白血病细胞系KG1a，经细胞形态学，甲基化特异性PCR（MSP）技术，^3H标记同位素微量分析法，限制性内切酶，流式细胞术及间接免疫荧光等技术对加药前后培养细胞的生物学特征进行观察分析。结果发现，两种药物对KG1a细胞均有时间和（或）浓度依赖性的增殖抑制作用，5-Aza-CdR和CDAⅡ对细胞分别表现了诱导凋亡和诱导分化的可能以及G2和G0/G1期阻滞，与此同时DNA甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度下降，p15蛋白表达部分恢复，结论：通过抑制甲基转移酶活性，干扰DNA甲基化以发挥抗白血病作用的途径是可能的，值得进一步探讨。

探究5-Aza-CdR对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响

目的探究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌A549细胞DNA甲基转移酶活性的影响,观察DNA甲基转移酶转录水平和活性及细胞生长状态的改变情况,以此为临床肺癌疾病的基因治疗提供相关依据。方法选取A549细胞株经5-Aza-CdR处理后,采用半定量RT-PCR、活性酶连续循环比色法、流式细胞仪(FCM)和MTT法分别对Dnmts的m RNA转录水平、Dnmts的催化活性、细胞生长状态进行检测,分析A549细胞Dnmts转录水平及活性、A549细胞系增殖及周期变化和凋亡与5-Aza-CdR的关系。结果对照组和药物组Dnmt1和Dnmt3b的m RNA表达水平的对比,差异无统计学意义(P>0.05);两组细胞Dnmt1和Dnmt3b活性的对比具有统计学差异(P<0.05);两组吸光度值的对比,差异具有统计学意义(P<0.05);两组G0/G1期和S期细胞数的对比,差异具有统计学意义(P<0.05),凋亡率的对比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 5-Aza-CdR对A549细胞株的增殖具有抑制作用,可促进细胞凋亡,其通过降低催化活性发挥对Dnmts的抑制作用,对其转录水平无影响。

蛋白质精氨酸甲基转移酶与相关疾病

蛋白质精氨酸甲基转移酶家族(protein arginine methyltransferase,PRMTs)催化精氨酸残基甲基化,参与许多重要的细胞过程,包括DNA修复、RNA加工、转录调控和信号转导。此外,PRMTs还是内源性一氧化氮合酶抑制物非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的重要来源。大量研究证实,PRMTs与心血管疾病、呼吸系统疾病、肿瘤、病毒感染、自身免疫性疾病密切相关。

类甲基化转移酶3(METTL3)在免疫细胞和造血干细胞中的作用研究进展

腺嘌呤第6位氮原子上发生的甲基化修饰(m6A)是真核生物mRNA中最常见的甲基化修饰,m6A作为一种动态可逆修饰,参与众多生物学过程.类甲基化转移酶3(METTL3)是构成m6A甲基转移酶复合体的核心组分,负责催化RNA发生m6A修饰.近年的研究发现,METTL3通过调控m6A水平,调节T淋巴细胞的分化和功能的维持、巨噬细胞的活化和极化以及树突状细胞的激活等过程,进而调控免疫反应和有关疾病的发生和发展;同时很多研究也报导,METTL3在内皮造血转化、造血干细胞的自我更新、增殖分化以及细胞周期调控方面也具有重要作用,这为临床上治疗血液系统的有关疾病提供了新思路.

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^(-1))5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^(-1);5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。

甲基化修饰对宫颈癌细胞凋亡相关蛋白激酶表达的调控

目的 :探讨在 DNA甲基转移酶抑制剂 5 -氮胞苷 ( 5 - azacytidine)的化学干预下 ,宫颈鳞癌细胞 Si Ha和宫颈腺癌细胞 He La中凋亡相关蛋白激酶 ( DAPK)基因与甲基化调控的关系。方法 :培养 Si Ha、He L a,以 1 0μmol/L浓度的 5 -氮胞苷干预细胞。提取细胞RNA,用逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)方法检测凋亡相关蛋白激酶基因 m RNA的表达。结果 :He La细胞的 DAPK基因用 5 -氮胞苷干预前后无明显变化。 Si Ha中 DAPK基因表达缺失 ,用 5 -氮胞苷处理后 ,Si Ha中 DAPK基因可重新表达。结论 :在不同类型宫颈癌细胞中 DAPK基因的调控有明显差异。 DAPK基因在宫颈鳞癌细胞中的表达受 DNA甲基化调控 。

5-氮杂-2-脱氧胞苷对里氏木霉产纤维素酶的影响

为探究脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)甲基化修饰对丝状真菌里氏木霉(Trichoderma reesei,T.reesei)产纤维素酶基因表达的表观遗传调控机制,利用不同浓度(0~1.0 mmol/L)的化学修饰剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza)培养T.reesei QM9414.通过测定滤纸酶活性(filter paper enzymatic activities,FPA)和羧甲基纤维素钠酶活性(carboxymethyl cellulose-Na enzymatic activities,CMCA)确定纤维素酶活性的变化;利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测0.1 mmol/L 5'-Aza培养的T.reesei QM9414中纤维素酶基因cbh1、egl1、酶激活因子xyr1基因以及分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的表达水平;通过甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MS-PCR)分析cre1、ace1、cbh1、egl1和xyr1基因上游序列的甲基化状态;利用Western blot和DNA甲基化定量测定分析了DNA甲基转移酶和DNA的甲基化水平.结果显示,0.1mmol/L 5'-Aza处理后的T.reesei QM9414菌株的FPA和CMCA最高,比出发菌株T.reesei QM9414分别高30%和53%;RT-q PCR结果显示,处理后的T.reesei QM9414菌株中纤维素酶基因cbh1、egl1与酶激活因子xyr1基因的相对表达量均高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1和ace1基因的相对表达量与出发菌株无明显差异;MS-PCR结果显示,cbh1、egl1和xyr1基因的非甲基化状态高于出发菌株,而分解代谢阻遏因子cre1与ace1基因的非甲基化状态也无明显差异;Western blot和DNA甲基化定量测定结果分别显示,5'-Aza处理后菌株的DNA甲基转移酶表达比出发菌株明显降低,全基因组DNA甲基化程度也有下降.研究结果表明,5'-Aza处理T.reesei QM9414菌株后,纤维素酶活性明显增加,纤维素酶基因cbh1、egl1和激活因子xyr1基因表达水平的增加可能是通过DNA甲基转移酶影响DNA甲基化水平,最终调控基因的表达.

丹参提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究

目的探讨丹参提取物丹参酮ⅡA对肝癌HepG2细胞DNA甲基转移酶1基因(DNMT1)表达的抑制作用。方法采用MTT法检测丹参酮ⅡA、5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-cdR)对HepG2细胞的增殖抑制作用,根据回归方程求出半数抑制浓度(IC50)。以IC50含药量的丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞,并以5-Aza-cdR处理作阳性对照,处理72 h后用RT-PCR技术检测肝癌HepG2细胞DNMT1 mRNA表达水平。结果经丹参酮ⅡA处理后肝癌HepG2细胞DNMT1 mRNA表达水平明显下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),但5-Aza-cdR组下降更显著,丹参酮ⅡA组与5-Aza-cdR组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA能抑制肝癌HepG2细胞DNTM1 mRNA表达,作用弱于5-Aza-cdR,DNA去甲基化作用可能是丹参酮抗肿瘤作用机制之一。

5-Aza-CdR对人结肠癌Caco-2细胞系P16基因甲基化状态及其生物学表型的影响

目的观察人结肠癌Caco-2细胞系P16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导高甲基化失活的P16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞系,MSP法检测用药前后P16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测P16基因mRNA表达。MTT法观察细胞生长速度,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果 P16基因在人结肠癌细胞系Caco-2中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,P16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达。CpG岛去甲基化后能明显地抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论 5-Aza-CdR能够逆转P16基因甲基化状态,调控P16基因表达并有效地抑制肠癌细胞增殖。

DNMT在胃癌中的表达及DNMT抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对胃癌的影响

目的:研究DNA甲基化转移酶(DNMT)各亚型DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L在胃癌与胃黏膜中的表达特点,并分析DNMT抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌和胃黏膜细胞的影响。方法:免疫组化法对60例胃癌与癌旁组织行5种DNMT表达研究。免疫荧光法和Western免疫印迹法对SGC-7901、MKN-45(胃癌细胞)和GES-1(胃黏膜细胞)行5种DNMT表达研究。噻唑蓝比色法和流式细胞术分析5-氮杂-2'-脱氧胞苷对SGC-7901、MKN-45和GES-1增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果:胃癌与癌旁组织均有5种DNMT不同程度表达,但胃癌组织DNMT1和DNMT3A表达显著低于癌旁组织(P<0.01),DNMT2和DNMT3L表达也低于癌旁组织(P<0.05),只有DNMT3B在胃癌与癌旁组织中无显著差异(P>0.05)。胃癌细胞(SGC-7901和MKN-45)与胃黏膜细胞(GES-1)亦有部分DNMT表达,除DNMT3B在胃黏膜细胞表达较强外,余DNMT在胃癌与胃黏膜细胞中无显著差异。5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌与胃黏膜细胞的增殖率、周期分布和凋亡率并无显著影响。结论:DNMT在胃癌中表达呈降低趋势,抑制DNMT对胃癌细胞的增殖和凋亡无显著影响。

5-脱氧杂氮胞苷抑制肝癌细胞株生物学行为的机制

目的 DNA甲基化模式的改变伴随着永生性细胞系的确立,生长调控基因CpG岛的重新甲基化可能导致了其转录的不活跃,在体外培养的情况下,使得肿瘤细胞选择了有利于生长的条件,我们用DNA甲基转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷处理两株肝癌细胞,研究其对肝癌细胞的影响,探讨DNA甲基化异常与肝细胞癌间的相关性及5-脱氧杂氮胞苷对肝癌细胞株恶性生物学行为的影响及其机制。 方法 用5-脱氧杂氮胞苷处理肝癌细胞株SMMC-7721和HePG2,然后采用相差显微镜观察药物处理前后细胞的形态变化,采用MTT法观察细胞的生长速度变化,采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、P16蛋白表达的变化,采用RT-PCR法比较p16和甲基转移酶mRNA表达量的变化,比较裸鼠致瘤性的大小。 结果 5-脱氧杂氮胞苷处理后细胞形态趋于规则,生长速度减慢,SMMC-7721细胞,G1期细胞增加了8.5％,而S期和C_2/M朗细胞分别减少了47.8％和10.4％,HePG2细胞,G_1期细胞增加了3.5％,S期减少了46.2％,G_2/M期增加了23.7％,两细胞凋亡率分别增加了91.6％和133.3％,P16蛋白表达分别增加了23.4％和20.9％,p16 mRNA表达增高,而DNA甲基转移酶mRNA表达明显降低,裸鼠皮下移植瘤生长减慢。 结论 肝细胞癌的发生与DNA甲基化异常有关,甲基化酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷可能通过抑制甲?

1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾对HT22细胞增殖和周期的影响

目的探讨1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾〔BPV(phen)〕是否通过调节DNA甲基转移酶(DNMT)的表达,调控细胞周期相关基因表达,进而影响细胞周期。方法 BPV(phen)0.3和3.0μmol·L-1处理HT22细胞24 h,MTS法检测细胞存活;流式细胞术方法检测细胞周期;ELISA法检测DNMT活性;实时荧光定量PCR检测p21,DNMT1,DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平;Western印迹法分别检测相应蛋白表达水平。结果与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1对细胞存活率无显著影响,BPV(phen)3.0μmol·L-1组细胞存活率显著降低(P<0.05)。细胞周期结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组各细胞周期百分比无显著差异,BPV(phen)3.0μmol·L-1组S期细胞显著增加,为(76.1±1.6)%(P<0.05),G2期细胞显著降低(P<0.05),为(2.1±1.5)%。与DMSO对照组相比,BPV(phen)3.0μmol·L-1组细胞DNMT活性显著增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组p21,DNMT1,DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平无显著差异,BPV(phen)3.0μmol·L-1组各基因表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与DMSO对照组相比,BPV(phen)0.3μmol·L-1组各蛋白表达水平均无显著性差异,只有BPV(phen)3.0μmol·L-1组DNMT3B和P21蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论 BPV能够通过改变DNMT的表达,调节下游与细胞周期相关基因的表达,进而影响HT22细胞的生长和增殖。