丹参抗LDL的脂质过氧化和脑缺血损伤的研究

给新西兰大白兔分别喂１％ 胆固醇食（ｎ＝ １９）和标准食（ｎ＝ １５）共５ 周，测定了血脂和低密度脂蛋白（ＬＤＬ）中的脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量，并制成氧化型ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ），提取ｏｘＬＤＬ中的脂质进行薄层层析，并制成脑缺血模型，观察丹参抗脑缺血损伤的作用。结果：胆固醇食组兔血清胆固醇（ＣＨ）、磷脂（ＰＬ）、游离脂肪酸（ＦＦＡ）以及血浆和ＬＤＬ中ＬＰＯ 含量均显著高于标准食组（Ｐ＜ ０．０１）；胆固醇食兔ＬＤＬ和Ｃｕ２＋ 透析后的ｏｘＬＤＬ中的脂质成分发生变化，Ｘ 带增加，ＦＦＡ 带增高，而胆固醇酯（ＣＥ）带及ＴＣ带显著减少，而且丹参透析组脂质成分变化不显著，丹参组缺血后海马超微结构损伤较盐水组轻。表明，长期高胆固醇饮食可引起较多的ＬＰＯ和ｏｘＬＤＬ生成，从而加速动脉粥样硬化的形成；Ｘ 带可作为脂质过氧化的一个指标，丹参具有拮抗ＬＤＬ 氧化的作用，这是其对抗脑缺血损伤的机制之一。

丹参组织培养材料的染色体显微鉴定技术

染色体是遗传基因的主要载体。生物的遗传、变异、繁殖和发育都与染色体的结构和行为有密切联系。染色体的倍数性变化是导致植物发生遗传变异的主要途径,这也为育种工作者创造选择优良品种的机会。有关丹参的染色体显微鉴定技术。

丹参诱导鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞优化方案及电生理研究

分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),采用丹参对4～5代MSCs进行反复多次诱导分化及再分化,将其诱导分化为神经样细胞,倒置显微镜下连续观察形态学变化,通过免疫荧光细胞化学检测神经样细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(neurofiliament,NF)、突触(小)泡蛋白(synaptophysin)的表达,采用细胞膜电位特异的荧光探针DiBAC4(3)标记细胞,激光扫描共聚焦显微镜动态监测细胞受高钾刺激前后的荧光强度变化,观察细胞电生理反应。结果显示:MSCs第1次经过丹参诱导2h后,MSCs伸出突起,向神经性细胞形态转变,此时巢蛋白表达率为(95.1±2.1)%(-x±s,n=3),基本不表达NF;随着诱导分化及去分化过程的次数增加,细胞分化为神经样细胞的时间缩短,突起拉长并交互缠绕呈复杂网状,MSCs第4次经过丹参诱导1h后,NF表达率(95.3±1.6)%(-x±s,n=3),并表达突触(小)泡蛋白,5h后突触(小)泡蛋白表达更为广泛;激光共聚焦扫描显微镜显示第4次诱导5h后的细胞在高钾刺激下发生去极化,胞内荧光强度瞬时增强,而MSCs空白对照对高钾刺激无反应。本优化诱导方案可以高效率地诱导MSCs分化为具有电生理特性的神经样细胞。

丹参基因组SSR位点的特征分析及引物开发

丹参为唇形科鼠尾草属多年生落叶开花植物,以根与根茎部位入药,广泛用于多种疾病的治疗。本研究采用生物信息学方法,从丹参基因组框架图序列中发掘出4 832个长度超过40 bp的基因组SSR位点。结果表明,二核苷酸重复基元和三核苷酸重复基元是构成丹参基因组SSR位点的主要类型,分别占全部SSR位点总数的37.3%和61.3%。此外,富含A/T碱基的SSR位点,包括AT/TA、AAT/ATT、ATA/TAT、TAA/TTA,分别占全部SSR位点总数的30.5%,21.6%,17.1%,20.4%,在数量上明显高于其他类型。以基因组SSR位点为基础,共设计基因组SSR引物序列1 079对。这些引物可用于基因组多样性分析、遗传图谱构建、分子标记筛选等工作,为后期丹参群体遗传学与基因组学研究奠定基础。

一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(GuanidineThiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法,以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%～20%)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT-PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。

丹参在缺血再灌注时的神经保护作用──成纤维细胞生长因子上调

丹参作为传统中药治疗缺血性脑血管病具有良好的疗效，本实验研究丹参是否通过影响成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）起修复作用。用大鼠线栓法缺血再灌注模型及免疫组化方法，发现大鼠缺血９０ｍｉｎ、再灌流４８ｈ后，缺血侧皮层、尾壳核及海马区ｂＦＧＦ样免疫反应增加及神经细胞变性；缺血后给予丹参（１５ｇ／ ｋｇ）大鼠，ｂＦＧＦ样免疫反应加强，并且缺血对应侧脑区也可见轻度的ｂＦＧＦ样免疫反应改变，且神经细胞变性程度较轻。提示丹参对脑缺血再灌流的保护作用可能与它加强ｂＦＧＦ的修复作用有关。

直流电导入丹参合剂离子的实验研究

本文用直流电将丹参合剂离子导入大白鼠体内，用分光光度法测定皮层内原儿茶醛的导入量，证实了丹参水溶性酚酸类成分可通过直流电作用进入大白鼠皮层组织。为中药离子导入疗法，提供了理论依据。

丹参、甘露醇对肢体缺血再灌注所致肺损伤保护作用的比较

目的 :通过动物实验方法观察丹参、甘露醇对肢体缺血再灌注所致肺损伤的保护作用。方法 :16 0只Wis tar大鼠随机分成正常对照 ,缺血 3h ,缺血 3h用丹参和甘露醇 4个组。实验组于缺血、再灌注 1、2、3和 2 4h取材 ,光镜下对比观察和组织学评估。结果 :肢体缺血和再灌注后 ,实验组肺泡隔增厚、水肿 ,毛细血管扩张、充血、大量多核白细胞浸润、贴壁 ,部分肺不张。用丹参和甘露醇组的病理改变明显轻于未用丹参和甘露醇组。结论 :丹参和甘露醇都能有效地减轻肢体缺血再灌注所致的肺损伤。

丹参注射液在大鼠肝脏热缺血再灌注损伤中的保护作用

目的:对中成药丹参(RSM)注射液在大鼠肝缺血再灌注损伤(WI/RI)的保护作用机制作了初步研究。方法:采用二次阻断法建立热缺血再灌注损伤的动物模型,观察对照组与丹参组,手术后24小时内各时点的肝功能生化指标ALT、AST的变化情况并应用内参照定量逆转录聚合酶链反应技术(Q-RT-PCR)分析两组间肝脏组织中TNF-α在不同时点的表达变化情况。结果:丹参组和对照组各时点在肝脏生化指标均存在显著差异。丹参组肝脏组织内TNF-α表达明显降低且早于肝功能生化指标的变化。结论:丹参具有防治缺血再灌注损伤的作用,其机制之一是通过降低TNF-α表达并阻断由此引发的一系列级联反应的机理来实现的。

小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验

目的:探索提高胚胎干细胞(ESC)体外诱导分化为心肌细胞的实验方法.方法:采用悬滴—悬浮—贴壁三步法(悬滴三步法)和悬浮—贴壁两步法(悬浮两步法),按诱导剂的不同分为Ⅰ组:丹参+5-氮杂胞苷(5-aza)组;Ⅱ组:丹参+维甲酸(RA)组;Ⅲ组:5-aza组;Ⅳ组:丹参组;Ⅴ组:RA组;Ⅵ组:阴性对照组6组进行诱导培养,比较在2种培养方法下各组心肌细胞的分化率.结果:Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组采用悬滴三步法培养的心肌细胞分化率分别为(77.78±5.09)%,(66.67±8.82)%,(51.11±1.92)%,(44.44±5.09)%,(23.33±3.34)%;采用悬浮两步法培养的心肌细胞分化率分别为(42.22±6.94)%,(36.67±8.82)%,(25.55±10.71)%,(17.78±5.09)%,(10.00±2.84)%.各组心肌细胞分化率悬滴三步法较悬浮两步法高,差异具有统计学意义(P<0.05).采用悬滴三步法培养Ⅰ组心肌细胞分化率最高可达78%,与其它各组相比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:悬滴三步法联合采用中药丹参与5-aza为诱导剂,可为体外ESC分化为心肌细胞的实验方法提供理论依据.

丹参改善大鼠颞叶梗死后空间认知加工障碍的研究

目的探讨丹参对大鼠单侧颓叶梗死后空间认知加工能力的改善作用。方法采用立体定向光化学诱导脑梗死技术选择性地导致大鼠左侧颞对皮层梗死，术前30min及术后第3天分别给丹参组大鼠按体重腹腔注射丹参10g／kg，行为实验装置由Morris水迷宫及图像自动监视系统（morrismazeexperimentalassistantsystem，MMEAS）组成。结果丹参组大鼠在Morris迷宫中搜索目标的反应时和行程显著缩短，且较多地使用了正常的认知策略，其由随机式过渡到趋向和直线式策略的进程也与正常对照组无明显差异。结论丹参可明显改善大鼠单侧颞叶梗死后的空间认知加工障碍。本研究在丹参治疗脑梗死、预防痴呆发生方面进行了有益的探索。

丹参对移植脾再灌注损伤保护作用的实验研究

目的:研究丹参对移植脾再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:采用套管法建立大鼠脾移植模型。分别用丹参加乳酸林格液、WMO-1号液、丹参加WMO-1号液灌注保存移植脾:保存2h后重建移植脾血供:再灌注3 h后切取移植脾。比较三组移植脾的阳性凋亡细胞数、细胞间黏附分子-1(ICAM-1,CD54)免疫阳性微血管数、超氧化物歧化酶(SOD)活力值和丙二酰二醛(MDA)的含量。结果:与其他两组相比,丹参加WMO-1号液灌注保存组移植脾的阳性凋亡细胞数、ICAM-1免疫阳性微血管数、MDA含量显著降低(P＜0．01),SOD活力值显著增高(P＜0．01)。结论:丹参通过抗自由基、抑制细胞凋亡、降低ICAM-1表达等机制对移植脾再灌注损伤起保护作用。

超声提取对丹参药材中脂溶性成分的影响

通过超声提取丹参药材粉和小节状中的丹参酮ⅡA及隐丹参酮成分小样品实验研究,确立了超声提取丹参药材中脂溶性成分的最佳提取条件,探讨了超声对提取小批量丹参药材中脂溶性成分的影响,并进行了液相色图谱对比.结果表明,超声提取可用于医药工业大生产的提取工艺,所提得的丹参酮ⅡA和隐丹参酮成分与浸泡提取法所得结果比较,结构未变,提取时间短,提取率高.提取最佳条件为用体积分数为90%、料液比为1∶5的乙醇,超声提取45 min.应用此方法提取,丹参药材中的丹参酮ⅡA和隐丹参酮含量分别可达0.285 6%和0.355 5%.

HPLC同时测定丹参中丹参酮ⅡA与丹酚酸B的含量

目的：建立丹参中丹参酮ⅡA与丹酚酸B同一的HPLC测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以梯度洗脱的方式，60min内在同一谱中完成脂溶性成分丹参酮ⅡA和水溶性成分丹酚酸B的含量测定。结果：丹参酮ⅡA在0．006～0．014mg／ml范围内线性关系良好（r=0．9998），回收率为99．41％，RSD为0．92％；丹酚酸B在0．0192～0．2128mg／ml线性关系良好（r=0．9998），回收率为99．30％，RSD为0．89％。结论：HPLC法快速、简便、准确，可以同时测定丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的会号．

复方丹参辅助治疗精神分裂症的血液流变学实验研究

目的 从血液流变学角度探讨复方丹参对精神分裂症的辅助治病作用。方法 对符合CCMD - 2 -R精神分裂症诊断标准的 12 0例患者进行分组治疗 ,研究组 30例以抗精神病药加复方丹参 ,对照组 90例单以抗精神病药治疗 ,观察 4周 ,分别于治疗前和 4周后检则血液流变学 12项指标和简明精神病量表 (BPRS)总分。结果 研究组治疗 4周后的全血粘度 (30 0s- 1 和 1 0s- 1 、低切还原粘度、RBC刚性指数、RBC聚集指数和纤维蛋白原都显著低于治疗前且都显著低于对照组 (P <0 .0 5～ 0 0 1) ,脑血流量则显著高于治疗前 (P <0 .0 5 ) ;而对照组除全血粘度有显著改善外其它指标在治疗前后无显著性差异 (P >0 0 5 )。研究组治疗 4周后的BPRS减分率显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 复方丹参对精神分裂症有辅助治疗作用 。

丹参对小鼠学习记忆的促进作用

研究丹参对小鼠学习记忆的影响，以了解丹参的药理作用机制及应用前景。应用不同实验方法分别观察对小鼠学习记忆的影响。结果揭示，丹参对正常小鼠学习记忆有促进作用，对电休克小鼠学习记忆力障碍有改善作用。

芪丹合剂对高脂血症大鼠血浆ET和CGRP的影响

目的研究芪丹合剂对高脂血症大鼠血浆的作用。方法采用喂食高脂饲料方法复制大鼠高脂血症模型,以复方丹参片为对照,检测各组大鼠血浆的内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CG RP)含量。结果用药各组在50d后,上述两指标与模型组相比均有不同程度改善,高剂量组最为明显(P<0.01)。用药80d后,上述差异更加显著。结论芪丹合剂可以降低高脂血症大鼠血浆中ET含量,升高CGRP含量,具有血管内皮保护作用。

灯盏细辛治疗75例急性脑梗死的疗效观察

目的 观察灯盏细辛注射液治疗急性脑梗死的疗效。方法 急性脑梗死病人分两组 ,治疗组 75例以 13 5～ 180mg灯盏细辛 /天 ,静脉滴注 14天 ;对照组 75例以复方丹参注射液 2 0ml/天 ,静脉滴注 14天。于治疗前、后对两组病人神经功能缺损程度 (NDS)进行评分并测定 11项血液流变学指标。结果 治疗组总有效率为 91 7%明显高于对照组的 80 % (P <0 0 5 )。治疗前后的NDS治疗组和对照组分别为 2 3 89± 11 2 7/9 83± 8 71和 2 4 0 1± 10 3 8/14 68± 9 16,两组间有显著性差异 (P <0 0 1)。血液流变学的各项指标治疗组明显低于治疗前 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 灯盏细辛治疗急性脑梗塞疗效优于丹参。

黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%～ 99 4%和95 9%～ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%～ 79 0 %和81 2 %～ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。

复方丹参辅佐治疗新生儿肺炎的研究

为研究丹参对新生儿肺炎时氧自由基的作用，本文观察了新生儿肺炎患儿共４５例，随机分为常规抗感染、输液、吸氧等治疗的对照组和除常规治疗以外加用复方丹参注射液静脉滴注的治疗组．于治疗前和治疗后１周分别测定两组患儿血清过氧化脂质（ＬＰＯ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）．结果表明：治疗组ＬＰＯ和ＳＯＤ值治疗前后有显著差异（Ｐ＜０．０５），而对照组ＬＰＯ和ＳＯＤ值治疗前后无显著差异；此外，治疗组与对照组比较，治疗前两组ＬＰＯ与ＳＯＤ值无明显差异而治疗后差异显著．提示复方丹参对新生儿肺炎时氧自由基的损伤有明显的治疗作用．