乳腺癌组织Sam68表达与腋淋巴结状态的相关性研究

目的探讨乳腺癌组织中Sam68蛋白的表达与E-cadherin及腋窝淋巴结状态之间的关系。方法采用Power Vision二步法检测78例乳腺癌及20例乳腺良性肿瘤组织中Sam68蛋白(Src-associated substrated during mitosis of 68KD)、核增殖抗原(Ki67)、人表皮生长因子受体2(HumanEpidermalReceptor2,HER2)及上皮钙粘附蛋白(E-cadherin),分析Sam68蛋白表达与Ki67、HER2、E-cadherin及腋窝淋巴结转移的相关性。结果Sam68蛋白表达水平在乳腺癌组织中比乳腺良性肿瘤明显上调,其表达与Ki67及HER2表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关。结论 Sam68蛋白可能促进乳腺癌细胞增殖,腋窝淋巴结转移。

乳腺癌组织Sam68蛋白与临床预后的相关性研究

目的:探讨乳腺癌组织中Sam68蛋白的表达与乳腺癌患者临床预后之间的关系。方法:采用Power Vision二步法检测78例乳腺癌及20例乳腺良性肿瘤Sam68蛋白的表达,分析Sam68蛋白表达差异与临床病理因素及临床预后的关系。结果:与乳腺良性肿瘤相比,Sam68蛋白表达水平在乳腺癌组织中明显上调,其表达水平与肿瘤大小、淋巴结状态、TNM分期有关(P=0.001,P=0.018,P=0.000),Sam68蛋白低表达组总生存时间和无病生存时间明显高于Sam68蛋白高表达组(P=0.039,P=0.026)。结论:Sam68蛋白与乳腺癌临床病理特征及临床生存密切相关,可能是乳腺癌预后的生物学指标之一。

RNA结合蛋白Sam68及其功能

细胞通过基因表达调控来应对外界刺激,其中影响mRNA稳定性及翻译效率的转录后调控发挥重要作用。RNA结合蛋白(RNA binding proteins,RBPs)是介导转录后调控的重要分子,Sam68(SRC associated in mitosis of 68 kD)是集信号转导特性与RNA激活功能于一身的RNA结合蛋白,参与转录、可变剪接及核输出等mRNA的代谢过程,且Sam68可通过信号通路参与细胞应答、细胞周期调控和疾病发生等。最新研究表明,Sam68可通过非编码RNAs(noncoding RNA,ncRNAs)参与表观遗传、转录与转录后调控。本文在介绍Sam68结构和转录后修饰的基础上,着重讨论Sam68在信号转导、可变剪接、ncRNAs代谢、疾病发生等方面的最新研究进展。

敲除Sam68基因导致白血病细胞系细胞生长迟缓和G2/M期延长

RNA结合蛋白Sam68是细胞有丝分裂期Src酪氨酸磷酸化的靶蛋白.尽管确切机制尚不清楚,一些人还是认为Sam68可通过调控RNA的代谢参与细胞周期调控.利用基因打靶技术,在DT40细胞分离出Sam68基因缺失的细胞系.利用该细胞系,进行Sam68的功能解析.与野生型细胞系相比,Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓.通过细胞周期研究揭示,这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长.因为参与细胞周期G2/M期调控的周期因子Cdc2激酶的活性没有改变,所以提示Sam68不依赖于Cdc2激酶的活性参与细胞周期中G2/M期调控.

Sam68基因对子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的探讨Sam68基因对人子宫内膜癌细胞增殖的影响.方法建立Sam68稳定干扰和过表达子宫内膜癌细胞株,Real-time PCR和Western blot验证干扰和过表达效率,MTT法、平板克隆法、软琼脂克隆形成实验、BrdU法检测沉默及过表达Sam68基因对子宫内膜癌细胞增殖活力的影响.结果利用逆转录病毒载体成功构建了Sam68 RNAi/HEC-1A、Sam68 RNAi/RL952以及Sam68 pc DNA-3/Ishikawa子宫内膜癌细胞模型.沉默Sam68基因可降低子宫内膜癌细胞增殖,抑制细胞的集落形成能力,而过表达则效果相反.结论利用RNAi靶向沉默Sam68基因可有效抑制人子宫内膜癌细胞的增殖,过表达则可促进增殖.Sam68在子宫内膜癌的发生发展中可能起到癌基因的作用.

Sam68蛋白在晚期伴转移性宫颈癌患者中的表达水平及与其远期预后的相关性分析

目的探讨Sam68蛋白在晚期伴转移性宫颈癌患者中的表达水平及与其远期预后的相关性。方法选取2008年5月—2014年12月我院收治宫颈癌患者144例为研究对象,取晚期伴转移性宫颈癌患者的病理组织84例为A组、早期宫颈癌病理组织60例为B组,癌旁正常的宫颈组织84例为C组。记录Sam68蛋白在3组中的表达情况及其与晚期伴转移性宫颈癌患者预后的关系。结果 A组和B组癌组织中的Sam68蛋白阳性表达率均高于C组,且A组高于B组(P<0.05)。A组中Sam68蛋白阳性患者3年生存率低于Sam68蛋白阴性患者(P<0.05)。肿瘤分化程度越低、临床分期越高、淋巴结转移数目越多、治疗前血红蛋白过低、采用单纯放疗和Sam68蛋白阳性的晚期伴转移性宫颈癌患者3年生存率均显著降低(P<0.05)。临床分期Ⅳa期、治疗前血红蛋白过低、单纯放疗和Sam68蛋白阳性期均为影响晚期伴转移宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 Sam68蛋白在晚期伴转移宫颈癌患者癌组织中表达水平较高,且其表达阳性是导致该类患者远期生存率较低的独立危险因素,可作为评估远期预后的有效指标之一。

核蛋白Sam68的原核表达及鉴定

为了构建pGEX-4T-1-Sam68原核表达载体,表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白,采用PCR扩增Sam68基因,插入pGEX-4T-1的Eco R I和Sal I位点,并转化Rosetta(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达,GST pull-down技术验证Sam68的结合活性。酶切和测序结果证实Sam68基因正确插入pGEX-4T-1载体中,载体能够在Rosetta(DE3)细胞中正确表达,且纯化的GST-Sam68蛋白具有与PI3K p85特异结合的活性,说明成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Sam68。

Sam68及其在肿瘤形成中的作用

Sam68是一种细胞内信号转导及RNA激活蛋白,通过自身的多个功能性模体与RNA,Src激酶家族及其他多种细胞内信号分子相作用。它作为细胞信号转导过程中的衔接蛋白参与细胞周期的调控,与细胞增殖和凋亡密切相关。其表达异常可导致细胞的恶性转化。

沉默Sam68对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Sam68基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖能力的影响及可能的分子机制。方法通过靶向沉默鼻咽癌5-8F细胞内源性Sam68基因,研究细胞增殖能力的变化情况,并采用qRT-PCR和Western blotting实验方法检测Sam68、细胞周期相关蛋白及其上游分子的表达情况。结果转染Sam68靶向siRNA的5-8F细胞中,Sam68蛋白和mRNA表达水平均明显降低。MTT、细胞周期实验证实干扰Sam68后5-8F细胞的增殖能力受到抑制;Western blotting检测结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达明显下调,p27表达上调,同时p-FOXO3a、p-Akt和p-GSK-3β的表达明显下调,而总FOXO3a、Akt和GSK-3β的表达则无明显变化。结论 Sam68可能通过激活Akt/FOXO3a信号通路对细胞增殖的相关分子进行调控,进而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。

Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨Sam68在结直肠癌发生发展中的作用。方法建立Sam68稳定过表达和稳定干扰的结直肠癌细胞株,通过克隆形成实验、MTT法和Transwell侵袭实验检测Sam68对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果成功建立Sam68稳定过表达和稳定干扰细胞株;过表达Sam68的结直肠癌细胞株SW480和Ls174t增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05);干扰Sam68的结直肠癌细胞株SW620和HCT116增殖、侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05)。结论 Sam68促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,在结直肠癌发生发展过程中起重要作用。

PTP1B和Sam68在结直肠癌中的表达及其意义

目的观察蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)及Sam68(Src-associated substrated during mitosis of 68KD)在结直肠癌的发生发展中的表达及其相关性,探究其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学(SABC)法检测53例结直癌组织及20例癌旁正常组织中PTP1B、Sam68的表达情况,并结合临床病理学资料进行统计分析;采用Western blotting方法检测12例结直肠癌组织及对应癌旁正常组织中的PTP1B及Sam68蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示PTP1B、Sam68在结直肠癌组织的阳性表达率明显高于正常大肠组织,差异均有统计学意义(均P<0.001)。PTP1B、Sam68的表达均与分化程度、TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05);相关性分析显示,PTP1B与Sam68表达呈正相关(r=0.463,P<0.001)。Western blotting检测结果显示结直肠癌组织中PTP1B和Sam68的蛋白表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。结论 PTP1B、Sam68可能与大肠癌的发生、浸润及转移有关,两者共同促进大肠癌的发生、发展、侵袭及转移。

Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的探讨Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达及其与围产结局的关系。方法选取临床确诊的子痫前期孕产妇236例为疾病组,并以择期行剖宫产的正常妊娠晚期孕产妇30例为对照组。在两组新生儿娩出15 min内在母体面取胎盘组织进行Nkx2-5、Sam68和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)表达水平的检测,统计两组围产儿死亡率,并分析疾病组胎盘组织Nkx2-5和Sam68表达与胎盘组织sFlt-1表达水平和围产结局的关系。结果疾病组患者围产儿死亡率为6.36%(15/236),高于对照组的0(0/30)(P<0.05)。疾病组胎盘组织Nkx2-5、Sam68和sFlt-1 mRNA相对表达量亦均高于对照组(P<0.05)。与疾病组围产儿存活者比较,其围产儿死亡者的胎盘组织Nkx2-5、Sam68和sFlt-1 mRNA相对表达量均较高(P<0.05)。Logistic相关分析结果显示,子痫前期胎盘组织Nkx2-5和Sam68 mRNA相对表达量与围产儿死亡均密切相关(P<0.05);Pearson线性相关分析结果显示,子痫前期胎盘组织Nkx2-5和Sam68 mRNA相对表达量与胎盘组织sFlt-1 mRNA相对表达量均呈正相关(r=0.886,0.879,P<0.05)。结论 Nkx2-5和Sam68在子痫前期胎盘组织中的表达水平较高且与其病情相关因子sFlt-1和围产结局相关,Nkx2-5和Sam68可能参与子痫前期的发生、发展。

Sam68蛋白在宫颈癌组织中的表达及其与预后的相关性研究

目的探讨宫颈癌组织中Sam68蛋白的表达及其与宫颈癌患者临床预后之间的关系。方法对笔者收集的78例宫颈癌患者的相关资料进行分析,将其设置为实验组,选择同期入院的20例良性宫颈肿瘤患者,将其设置为对照组,采用Power Vision二步法对患者Sam68蛋白进行检测,分析Sam68蛋白表达差异及其临床病理因素、与患者治疗预后的关系。结果宫颈癌患者Sam68蛋白阳性表达率为60.3%(47/78),宫颈良性肿瘤者Sam68蛋白不表达或弱表达,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌患者中Sam68蛋白表达与患者的年龄、肿瘤细胞的分化程度无明显相关性(P>0.05);Sam68蛋白表达与肿瘤的大小、TNM分期以及患者淋巴结状态存在明显相关性(P<0.05);Sam68蛋白表达水平和患者总生存时间以及无病生存时间存在相关关系(P<0.05);Sam68蛋白高表达患者5年总生存率(70%)低于Sam68蛋白低表达者(87%);Sam68蛋白高表达者5年无病生存率(53%)低于Sam68蛋白低表达者(79%)。结论患者体内Sam68蛋白和宫颈癌临床病理特征、患者生存期之间关系密切,Sam68蛋白含量越高,患者预后越长,可以将其作为宫颈癌预后的生物学指标。

Sam68蛋白对宫颈癌细胞增殖的影响研究

目的：观察Sam68蛋白对宫颈癌细胞增殖的影响，并对此命题作出探讨与研究。方法对我院2012年12月～2013年12月收治的宫颈肿瘤患者进行抽样，选取100例患者对比观察，其中宫颈良性肿瘤患者44例，宫颈癌患者56例，分别作为对照组和观察组，分析两组每一名患者肿瘤组织中Sam68蛋白、核增殖抗原（Ki67）、皮钙黏附蛋白（E-cadherin）指数变化。结果在对100例患者进行治疗后，宫颈良性肿瘤患者Sam68蛋白表达水平明显低于宫颈癌患者，并且与E-cadherin表达呈正相关，与Ki67表达呈负相关。结论在宫颈癌组织中Sam68蛋白的表达明显高于正常宫颈组织，对宫颈癌细胞增殖有一定的促进作用。

沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究

本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响。针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化。结果表明:与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制(P<0.05);沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖。

Sam68在常见肿瘤中的研究进展

Sam68是RNA结合蛋白的成员之一,兼具信号转导和RNA激活功能,主要通过其KH同源结构域发挥作用,在肿瘤、风湿等疾病以及炎症、细胞凋亡中扮演重要角色。Sam68可以通过参与转录、翻译、可变剪接等RNA代谢过程,进而调控肿瘤细胞的增殖、扩散、迁移、入侵,与肺癌、结直肠癌、前列腺癌等常见肿瘤的发生发展有关。此外,Sam68也可能参与疼痛的过程,深入研究Sam68在信号转导过程中与各种激酶的协同作用以及在剪接过程中的具体分子机制,对肿瘤及疼痛的临床治疗具有重要意义。

RNA结合蛋白Sam68调控胃癌细胞生物学行为和患者预后机制的研究

背景:Sam68基因表达失控会诱导多种类型癌细胞的细胞周期进程、细胞增殖、转化以及肿瘤发生和转移。然而,目前尚不确定Sam68在胃癌细胞中的具体作用和分子机制。目的:探讨Sam68表达与胃癌患者临床预后以及胃癌细胞生物学行为之间的相关性。方法:收集161例胃癌组织和癌旁正常组织,采用蛋白质印迹法和免疫组化染色检测Sam68表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征之间的关系。以siRNA Sam68转染胃癌AGS细胞,CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验评估细胞迁移能力,Transwell实验评估细胞侵袭能力。结果:Sam68在胃癌组织中的表达增加,并与浸润深度、TNM分期和淋巴结转移相关。Sam68高表达与胃癌患者的预后不良有关。转染Sam68 siRNA后,胃癌细胞增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力均下降。结论:Sam68可能是一个新的评估胃癌细胞生长、迁移和侵袭的因子,对胃癌患者预后具有重要意义。

SAM68和SENP-1在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨SAM68与SENP-1在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2014年1月至2018年1月在本院未经相关治疗初次行穿刺活检或手术切除的前列腺组织标本94例,免疫组化法检测50例前列腺癌组织和44例良性前列腺增生组织中SAM68与SENP-1的表达情况,并结合临床病理学资料进行统计分析。结果免疫组化结果显示:SAM68与SENP-1在前列腺癌组织中的阳性表达率明显高于前列腺增生组织(P<0.001)。SENP-1与SAM68的表达均与分化程度、TNM分期及骨转移相关(P<0.05);相关性分析显示:SENP-1与SAM68表达呈正相关(r=0.463,P<0.001)。结论 SAM68与SENP-1在前列腺癌组织中高表达,并与前列腺癌的发生和恶性进展有关,且有望成为前列腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

Sam68基因过表达可促进乳腺癌MCF-7细胞发生上皮-间质转化

目的 :探讨Sam68(Src-associated in mitosis 68 k D)对乳腺癌MCF-7细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、增殖、迁移和侵袭的影响。方法 :将重组质粒pc DNA-3-Sam68转染至乳腺癌MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测Sam68以及EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)m RNA及蛋白的表达,CCK-8法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果:重组质粒pc DNA-3-Sam68转染MCF-7细胞48 h后,Sam68m RNA和蛋白明显过表达(P值均<0.05)。EMT标志物E-cadherin、N-cadherin和vimentin m RNA的表达水平无明显变化(P值均>0.05),E-cadherin蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),而N-cadherin和vimentin蛋白的表达水平则明显上调(P值均<0.05)。并且,细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P值均<0.05)。结论 :过表达Sam68基因可增强乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这一作用可能与调控EMT的发生有关。

沉默Sam68基因表达抑制乳腺癌细胞的上皮-间质转化

目的 :探讨沉默Sam68(Src-associated substrated during mitosis of 68KD)基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 :采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测具有不同侵袭能力的乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中Sam68 m RNA及蛋白的表达情况;选择Sam68高表达的MDA-MB-231细胞,利用si RNA技术沉默细胞中内源性Sam68蛋白的表达。随后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)m RNA及蛋白的表达;采用CCK-8法、Transwell小室迁移和侵袭实验检测沉默Sam 68基因表达后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,迁移和侵袭的影响。结果 :Sam68蛋白在高侵袭性的间质型乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达(P<0.05);采用si RNA沉默MDA-MB-231细胞内源性Sam68蛋白的表达后,E-cadherin的表达水平明显上调(P<0.05),而vimentin的表达水平明显下调(P<0.05);MDA-MB-231细胞的增殖能力以及细胞的迁移和侵袭能力明显降低(P值均<0.05),细胞可能发生间质-上皮转化。结论 :Sam68在高侵袭性乳腺癌细胞中高表达,沉默Sam68基因的表达能抑制EMT的发生,并降低细胞增殖、侵袭和迁移能力。