移植源于人单克隆胰腺干细胞的胰岛治疗大鼠糖尿病

将人单克隆胰腺干细胞（1．0×10^4个／孔）接种在铺有明胶的6孔板内，体外定向诱导其分化为包含大量β细胞的类胰岛。双硫腙染色呈阳性。RTPCR检测，转录表达胰岛素。Sprague-Dawley成年大鼠30只，6只腹腔注射缓冲液作正常对照，24只腹腔注射2％链脲菌素制备糖尿病模型。注射后48h及5、8d，断尾采血，测定全血血糖。随机取3次血糖均〉16．65mmol／L的糖尿病大鼠用于移植试验。DMEM稀释每个阳性孔诱导胰岛细胞至100μL，分别移植在12只糖尿病大鼠左侧肾囊内。6只糖尿病模型对照大鼠左侧肾囊内分别注射100μL DMEM。实验大鼠每10d断尾测全血血糖1次。在为期67d的移植试验中，12只诱导胰岛移植大鼠血糖水平从18．93～25．78mmol／L降至6．32～11．47mmol／L。除2只死于移植感染外，其余存活了54～67d。6只糖尿病对照大鼠血糖水平持续在18．73～25．96mmol／L。1只感染死亡，5只存活了16～42d。6只正常对照大鼠血糖基本保持在3．56～5．83mmol／L，死亡率为0。结果表明，人单克隆胰腺干细胞体外定向诱导能分化为包含大量β细胞的功能性胰岛，移植这些诱导胰岛能降低糖尿病大鼠血糖水平，延长其寿命。

糖尿病模型胰岛细胞凋亡与多种细胞因子的相关性

目的探讨糖尿病大鼠模型中胰岛细胞凋亡与胰腺组织多种细胞因子的相关性。方法 Wistar大鼠16只,诱发糖尿病模型,分为2组。正常组和糖尿病组大鼠各8只,各组凋亡检测为6只。统计分析各组大鼠血糖、C反应蛋白、多种细胞因子、以及胰腺组织多种细胞因子mRNA定量和蛋白表达水平的差异。分离胰岛细胞,进一步做细胞凋亡的半定量分析。Person相关性分析胰岛细胞凋亡与细胞因子的关系。结果糖尿病组胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达和mRNA显著升高(P<0.05);糖尿病组与正常组的细胞凋亡率比较,差异有统计学意义[(17.52±9.95)%vs(8.45±2.01)%,P<0.05]。糖尿病组胰腺组织TNF-α蛋白表达和mRNA含量与胰岛细胞凋亡率呈正相关(r=0.45,P=0.02;r=0.44,P=0.00)。结论糖尿病大鼠模型中胰腺组织TNF-α可能直接作用于胰岛细胞凋亡。

三氯化镧对糖尿病大鼠胰岛B细胞的影响

目的探讨三氯化镧(LaCl3)对糖尿病大鼠胰岛B细胞保护及修复作用。方法将糖尿病SD大鼠随机分为:低剂量(0.01mg/kg,Lacl3)、中剂量(0.05mg/kg,LaCl3)、高剂量组(0.25mg/kg,LaCl3)及对照组,测定血糖及空腹血清胰岛素、C肽,治疗8周后取胰腺行透射电镜观察。结果治疗后8周低剂量组随机血糖降低6.04±2.01mmol/L,空腹血清胰岛素由15.86±2.12mIu/L升为25.99±5.62mIu/L,C肽由0.07±0.03ng/ml升为0.16±0.02ng/ml。对照组电镜见胰岛B细胞分泌颗粒减少或消失;低剂量组分泌颗粒密集。结论低剂量LaCl3可促进胰岛B细胞再生,修复胰岛B细胞功能。

胰升糖素样肽-l对2型糖尿病大鼠胰岛细胞bc1-2和bax蛋白表达的影响

目的观察胰升糖素样肽-1(GLP-1)对2型糖尿病大鼠胰岛细胞bcl-2和bax蛋白表达的影响及与剂量的关系。方法采用高脂高糖饲料喂养结合小剂量链脲佐菌素注射法成功建立2型糖尿病大鼠模型,用高、中、低3个剂量GLP-1对2型糖尿病大鼠进行为期4周的干预,比较干预各组与未干预组糖尿病大鼠胰岛细胞bcl-2和bax蛋白表达的变化。结果对比糖尿病组,GLP-1干预各组大鼠胰岛细胞bax蛋白表达率均明显降低,与GLP-1剂量呈负相关;bcl-2/bax比值均明显升高,与GLP-1剂量呈正相关。结论GLP-1能明显降低2型糖尿病大鼠胰岛细胞bax蛋白的表达率,增加bcl-2/bax比值。提示GLP-1对2型糖尿病大鼠的胰岛细胞有明显抗凋亡作用,并与GLP-1剂量有关。

运动对糖尿病大鼠胰岛的影响及其机制探讨

目的探讨有氧运动对2型糖尿病大鼠胰岛及β细胞的影响及其机制。方法 Wistar大鼠30只,随机选取10只为C组,其余20只用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)配合高脂高糖饲料喂养建造2型糖尿病大鼠模型,留其成功的15只再分两组,一组为DMC组(n=7);另组为DME组(n=7,实验结束时死亡1只)。DME组大鼠以每天20 m/min强度跑台运动30 min,每6 d休息1 d,共持续8周,其余大鼠笼内自由活动。实验结束时,腹主动脉取血测血糖、血清Ins含量,并推算HOMA;切取胰腺前三分之一行石蜡切片、HE染色,在数码显微镜下观察胰岛形态及β细胞结构并拍照;在100倍视野下,运用Motic Images Advanced 3.1图像处理软件测量胰岛周长和面积,并由此计算出SF;将剩余胰腺匀浆后测其Ins含量、GK及微量总ATP酶活性。结果 DME组大鼠胰岛周长和面积均较DMC组大鼠显著增加(P<0.05),但仍低于C组大鼠,SF显著增高;β细胞肥大及空泡、胞核固缩等现象较DMC组大鼠显著改善;DME组大鼠血糖、Ins含量、胰腺GK及微量总ATP酶活性均显著高于DMC组大鼠(P<0.05);SF及HOMA也有显著变化。结论有氧运动可降低2型糖尿病大鼠的血糖浓度、改善胰岛以及胰岛β细胞形态结构,归因于胰腺组织GK、ATP合成酶活性及胰岛素敏感性的提高。

糖尿病早期大鼠胰岛B细胞超微结构的改变及氨胍的保护作用

目的:探讨糖尿病早期大鼠胰岛B细胞超微结构的改变及氨胍(Aminoguaniodine,AG)的保护作用。方法:选择30只健康成年SD大鼠随机分成Ⅰ(正常对照)组、Ⅱ(糖尿病)组和Ⅲ(糖尿病氨胍治疗)组,对Ⅱ、Ⅲ两组一次性空腹注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱发糖尿病模型。以后各组大鼠每30d测血糖一次。90d时取胰尾组织行透射电镜观察。结果:在30d、60d和90d后Ⅱ、Ⅲ两组血糖升高,与Ⅰ组比较及Ⅱ、Ⅲ两组间比较,差异有显著性(P<0.05)。糖尿病90d大鼠胰尾胰岛B细胞核固缩,粗面内质网和线粒体出现退行性改变,并见有大量脂滴堆积。AG治疗组90d大鼠胰尾胰岛B细胞细胞核、粗面内质网和线粒体均有明显恢复,胞浆内未见有脂滴堆积。结论:氨胍对糖尿病大鼠胰岛B细胞有保护作用。

苯那普利对糖尿病大鼠胰岛细胞功能的影响

目的研究苯那普利对糖尿病大鼠胰岛细胞功能的影响。方法采用长期高脂饮食加小剂量链脲菌素(STZ,30mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,以苯那普利10mg·kg-1.d-1进行干预,2个月后行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检测胰岛细胞功能,试剂盒检测胰腺组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色和免疫组化对胰腺形态学及十二指肠同源框蛋白-1(PDX-1)进行观察。结果DM组大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌明显延迟,MDA含量(7.10±0.21)nmol/mg较NC组(3.25±0.12)nmol/mg显著升高(P<0.01),SOD活性(38.9±2.1)U/mg较NC组(51.01±1.47)U/mg显著降低(P<0.01),免疫组化胰岛素染色阳性面积(12.8±2.2)%及PDX-1平均光密度0.240±0.051显著低于NC组[(42.6±2.7)%,(0.648±0.087)nmol/mg](P<0.01),苯那普利干预后胰岛素释放曲线基本接近正常形态,MDA含量(5.87±0.19)nmol/mg较DM组显著降低(P<0.01),SOD活性(45.3±1.7)较DM组显著升高(P<0.01),免疫组化胰岛素染色阳性面积(18.8±2.7)%及PDX-1平均光密度0.40±0.044较DM组显著增高(P<0.01)。结论苯那普利可以减轻糖尿病大鼠氧化应激反应,并上调PDX-1的表达,改善胰岛细胞功能。

胰腺星状细胞移植对胰岛功能和形态的影响

目的:通过胰腺星状细胞(PSC)移植的体内研究来观察PSC对胰岛β细胞及血糖代谢的影响。方法:PSC体外分离培养,并通过胰腺移植入正常血糖的Wistar和高血糖Goto-Kakizaki(GK)大鼠体内。移植16周后糖耐量试验和糖化血红蛋白(glycated haemoglobin,Hb A1c)检测胰岛功能;胰岛素免疫荧光染色观察胰岛β细胞;马松染色评估胰岛纤维化。结果:PSC移植进一步损伤了GK大鼠胰岛功能,导致了血糖和Hb A1c的升高,减少了胰岛素分泌,加重了胰岛的破坏和纤维化,但未观察到PSC移植对Wistar大鼠的影响。结论:PSC在糖尿病环境下可以加重胰岛破坏,可能参与2型糖尿病β细胞衰竭的进程。

大鼠胰岛细胞原代培养模型的研究

目的:建立一种客观的用于糖尿病和降血糖药物研究的大鼠胰岛细胞原代培养模型。方法:大鼠胰腺经胶原酶消化后,利用细胞贴壁时间、紧密程度及存活时间的差异,获得较为纯净的胰岛细胞。通过胰岛素含量测定,葡萄糖刺激实验及移植实验评价该细胞的功能。结果:分离得到的胰岛细胞成活率可达95％以上;双硫腙染色表明大部分细胞团为含有β细胞的胰岛细胞团;经RPMI 1640培养的细胞,其上清及细胞内的胰岛素含量均高于DMEM组,且对葡萄糖刺激的敏感性优于DMEM组;培养的胰岛细胞移植入1型糖尿病模型小鼠体内,可使糖尿病小鼠的血糖降至正常。结论:利用该方法得到的胰岛细胞活力和纯度均较高,体外培养后细胞功能正常,有望成为一种实用的降糖药研究的细胞模型。

低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能的调节作用

本研究工作以健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为对象，分４组：（１）对照组；（２）糖尿病组；（３）预防加治疗组；（４）治疗组。第２、３、４组均应用ＳＴＺ制成糖尿病大鼠，其中３、４组应用低剂量三氯化钐（０．０５ｍｇ／ｋｇ）治疗６周后，采用放射免疫检测术测定了各组动物血浆中胰岛素、胰高血糖素、生长抑素及血糖的变化。实验结果表明：经使用低剂量三氯化钐治疗后的第（３）、（４）组动物均活泼、状态良好，体重增加，血浆中胰岛素水平增高及生长抑素水平下降，均与正常对照组近似；胰高血糖素及血糖水平均呈下降趋势。由此可见，低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能具有调节作用，从而使糖尿病大鼠的健康状况得以明显改善。

SD大鼠胰腺导管上皮细胞培养技术的研究

目的分离纯化SD大鼠胰腺导管上皮细胞,为将其转分化为胰岛细胞提供细胞来源。方法用酶消化法培养SD大鼠胰腺导管上皮细胞,观察细胞增殖动态,用CK-19进行免疫组化鉴定。结果胰腺导管上皮细胞可在体外有效扩增,有效去除成纤维细胞是扩增的关键。结论低血清培养和反复贴壁法可获得较纯的胰腺导管上皮细胞。

糖脂平对2型糖尿病大鼠糖、脂毒性及胰腺组织氧化应激的影响

目的:观察糖脂平对2型糖尿病大鼠糖、脂毒性及胰腺组织氧化应激的影响。方法:采用高脂喂养联合低剂量(30 mg.kg-1)链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。将糖尿病模型鼠随机分为模型组、糖脂平组、α-硫辛酸组,正常鼠为正常对照组,每组10只。糖脂平组予糖脂平按生药20 g.kg-1.d-1ig,α-硫辛酸组予20 mg.kg-1.d-1ig,其他2组大鼠予等体积蒸馏水ig,连续处理8周。观察体质量(BM)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素水平(FINS)、血清游离脂肪酸(FFA)以及胰腺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化;观察胰腺组织病理改变。结果:与模型组比较,经糖脂平、α-硫辛酸处理后两组大鼠体质量、血糖、空腹胰岛素、游离脂肪酸及氧化应激指标均明显改善(P<0.01或0.05);病理观察显示胰岛数量明显增加,胰岛组织结构部分修复。糖脂平组大鼠在FPG,HbA1c,FFA,FINS水平的改善方面优于α-硫辛酸组,病理改变亦相对较轻。结论:中药糖脂平能有效抑制2型糖尿病大鼠糖、脂毒性及胰腺组织的氧化应激损伤,保护胰岛细胞,改善胰岛素分泌及糖、脂代谢。