益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响,探讨不同类中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制。方法:采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响。结果:Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的表达。复方组作用明显优于其他组,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。

中药复方金三莪对肝纤维化大鼠的治疗作用及其机制研究

目的 观察中药复方金三莪抗大鼠肝纤维化的疗效及其机制。方法 将 5 0只 Wistar大鼠随机分为 4组 :A组为正常组 (n=8) ,B组为肝纤维化模型组 (n=14 ) ,C组为金三莪治疗低剂量组 (n=14 ) ,D组为金三莪治疗高剂量组 (n=14 )。B,C,D组大鼠 sc CCl4 诱导大鼠肝纤维化模型 ,C,D组大鼠于造模第 4周开始 ig金三莪 ,剂量分别为 0 .6 ,1.2 g/10 0 g,每日 1次 ;A,B组 ig生理盐水 1ml/kg,第 8周处死全部大鼠。免疫组化技术检测转化生长因子 - β1 (TGF- β1 ) ,Smad3及 Sm ad7在肝内的表达及定位 ;常规生化方法检测肝功能 ;放射免疫方法检测透明质酸 (HA )含量 ;Van Gieson染色和 HE染色观察肝组织病理形态学改变。结果 肝纤维化模型大鼠经金三莪治疗后肝组织内 TGF- β1 及 Smad3表达降低 ,而 Sm ad7的表达增加 ,与模型组大鼠比较差异显著 (P<0 .0 5 ) ,TGF- β1 及Sm ad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达。与模型组比较 ,金三莪治疗后大鼠血清丙氨酸氨基转移酶 (AL T) ,天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) ,HA含量显著减低 (P<0 .0 5 ) ;肝小叶结构趋于正常 ,纤维间隔明显变薄 (P<0 .0 1)。结论 中药复方金三莪能有效减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度 。

慢病毒介导miR-375-3p过表达对慢性心力衰竭大鼠心脏重塑的影响

目的探究慢病毒介导微RNA-375-3p(miR-375-3p)过表达对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心脏重塑的影响.方法腹腔注射5 mg/(kg·d)异丙肾上腺素构建CHF大鼠模型;超声检查仪检查收缩末期左心室内径(LVIDs)、舒张末期左心室内径(LVIDd)、缩短分数(FS)和射血分数(EF);HE染色观察心肌组织病理变化;Masson染色观察心肌组织胶原纤维沉积情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-375-3p、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和Smad3 mRNA相对表达量;蛋白质免疫印迹(West-ern blotting)法检测TGF-β1、Samd蛋白水平.结果miR-375-3p过表达可抑制CHF引起的LVIDd、LVIDs水平升高,EF、FS水平降低.miR-375-3p过表达可抑制CHF引起的TGF-β1、Samd3表达,从而保护心肌组织,抑制心肌胶原纤维沉积.结论miR-375-3p过表达对CHF有一定的保护作用,其机制可能与调控TGF-β1、Samd3表达有关.

金三莪对肝纤维化大鼠TGF-β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体mRNA与Smad3、Smad7表达的影响

目的 :观察中药金三莪抗大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法 :采用金三莪治疗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型。RT -PCR检测肝组织TGFβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡmRNA ;免疫组化技术检测Smad3及Smad7在肝内的表达及定位 ,肝组织HE染色检测病理改变。结果 :与模型组大鼠比较 ,RT -PCR显示经该中药组方治疗 ,大鼠肝内TGFβ1、TGFRⅠ与TGFRⅡmRNA(P <0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,以及Smad3表达明显降低 ;而Smad7的表达增加。Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达。肝小叶结构趋于正常 ,纤维间隔明显变薄。结论 :金三莪组方能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度 ,其机理与抑制肝内TGFβ1 、TGFRⅠ与TGFRⅡmRNA及Smad3表达 ,并促进Smad7表达有关。

TGFβ1/Smad3信号通路介导的赖氨酸羟化酶2活性变化在肺纤维化胶原沉积中的作用

目的:探讨TGFβ1/Smad3信号通路对赖氨酸羟化酶2(lysyl hydroxylase 2,LH2)活性变化的影响,以及这一变化在肺纤维化胶原沉积中的作用及机制。方法:用含10%胎牛血清的F12培养基培养人肺成纤维细胞株HFL1。实验分为对照组、TGFβ1(10μg/L)刺激组和米诺地尔(5μmol/L)干预组,对照组加等量培养基;48 h后收集各组RNA及蛋白,采用RT-qPCR检测PLOD2、α-SMA及COLⅠ的mRNA表达水平,Western blot检测LH2、总Smad3、磷酸化Smad3、α-SMA、COLⅠ和COLⅣ的蛋白水平变化,ELISA检测细胞中羟基赖氨酰吡啶酚(hydroxylysylpyridinoline,HP)的含量变化。结果:TGFβ1刺激后,PLOD2、α-SMA及COLⅠ的mRNA表达上调(P<0.01);其对应的蛋白水平如LH2、磷酸化Smad3、α-SMA、COLⅠ和COLⅣ蛋白水平增高,而总Smad3的蛋白水平没有变化。米诺地尔干预后上述基因的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01)。TGFβ1刺激后ELISA检测到HP含量较对照组增加,米诺地尔干预后合成减少(P<0.05)。结论:TGFβ1/Samd3信号通路激活,使LH2表达增多;而米诺地尔通过抑制TGFβ1/Samd3信号转导,减少LH2的表达,减少羟基化胶原吡啶链的合成,从而减轻肺纤维化病变。

金三莪对实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1、Smad3、Smad7及CTGF表达的影响

[目的]观察中药金三莪抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。[方法]将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组 ,于造模第1周及第4周开始用金三莪治疗。免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF - β1)、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位 ,肝组织电镜检查 ,放射免疫法检测血清透明质酸 (HA)含量。[结果]经中药金三莪治疗后肝纤维化大鼠肝组织内TGF - β1、Smad3及CTGF表达降低 ,而Smad7的表达增加 ,TGF - β1、Smad3及CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达。电镜检查中药治疗组大鼠肝细胞结构趋于正常 ,纤维组织变薄。模型组血清HA含量明显高于正常组 (P<0.01) ,中药治疗1、2组血清HA含量明显低于模型组 (P<0.05)。[结论]中药金三莪能有效地减轻四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度 ,其机制可能是抑制肝内TGF - β1。

尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量及TGF-β1/Smad通路表达的影响

目的研究尿毒清颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量及TGF-β1/Smad通路表达影响。方法 30只SD大鼠构建腹膜透析模型,随机分为模型组(M组)、低剂量组(L组)、高剂量组(H组)。L、H组给药剂量分别为2、4 g/(kg·d)。观察大鼠体质量、自主活动次数、肾脏肥大指数、Scr、BUN、TGF-β1、p-Samd2/3。结果 (1)体质量增长速度:N组>H组>L组>M组;(2)M组自主活动次数减少最快,与其他组差异明显;(3)4组Scr、BUN、肾脏肥大指数比较,差异有显著性;L组、H组Scr、BUN、肾脏肥大指数、TGF-β1、p-Samd2/3与M组比较,均显著降低,L组、H组TGF-β1、p-Samd2/3比较,差异有显著性。结论尿毒清颗粒可提高慢性肾衰竭腹膜透析大鼠生存质量,降低Scr、BUN水平,调节机制可能与TGF-β1/Smad通路有关。

千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨YAP/Smad3表达的影响

目的:观察千草方熏洗对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨Yes相关蛋白(YAP)和Smad3表达的影响,研究千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨的保护作用及机制。方法:32只SD大鼠随机分成4组:对照组、模型组、中药组和透明质酸(HA)组,模型组、中药组和HA组均采用改良Hulth法构建大鼠KOA模型,中药组大鼠进行千草方熏洗,HA组大鼠予以关节腔内注射HA。处理后,取各组大鼠膝关节软骨组织和血清,软骨组织进行苏木精-伊红(HE)染色和Mankin’s评分,ELISA法检测血清中软骨寡聚基质蛋白(COMP)和Ⅱ型胶原C端肽(CTX-II)的表达量,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,免疫组化检测YAP和高迁移率族蛋白B2(HMGB2)的表达,并采用Western blot检测YAP、Smad3、骨成型蛋白2(BMP2)、Bax和Bcl-2的表达水平。结果:HE染色结果表明,模型组软骨细胞排列紊乱,结构不清晰;与模型组相比,中药组软骨表面更加光滑,结构较清晰,软骨基质着色较均匀。与模型组相比,中药组和HA组的Mankin’s评分显著下降,血清CTX-II含量显著升高,COMP含量显著下降(P<0.05),软骨细胞的凋亡率显著下降(P<0.05)。免疫组化和Western blot的结果表明,与模型组相比,中药组和HA组YAP、HMGB2、Smad3和Bcl-2的表达量增加,BMP2和Bax的表达量下降(P<0.05)。结论:千草方熏洗能够通过YAP/Smad3信号通路缓解KOA。

中药软肝宁对实验性肝纤维化大鼠TGFβ_1、Smad2/3表达的影响

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化后应用软肝宁的疗效及作用机制。方法用40%CCl4对Wistar大鼠造模8周,将50只分为中药预防组、中药治疗组、模型对照组及正常对照组,用软肝宁于造模第1周及第4周开始灌胃。运用免疫组织化学(S-P)技术检测转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad2/3在肝内表达,碱水解法检测肝组织羟脯胺酸(Hyp)含量,酶联免疫法检测肝组织内透明质酸(HA)的含量。结果经软肝宁防治后大鼠肝组织内TGFβ1、Smad2/3表达减少,透明质酸、羟脯胺酸水平降低。结论复方中药制剂软肝宁能有效地逆转四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的纤维化,其机理可能是抑制肝内TGFβ1、Smad2/3表达。

胚胎大鼠心脏发育中转化生长因子β1/Smad3信号通路的意义

目的观察胚胎Wistar大鼠心脏发育过程中转化生长因子(TGF)-β1、Smad3的表达,探讨其在胚胎心脏发育的意义。方法 28只月龄、体质量均相当的Wistar大鼠,随机分为7组,每组4只,分别在妊娠E12、E13、E14、E15、E16、E17、E18时麻醉,行剖宫术取出胎鼠,取其心脏,液氮保存。采用RT-PCR法检测其TGF-β1、Smad3在妊娠E12～E18胚胎心脏中的表达。结果妊娠E12～E18时,TGF-β1和Smad3表达由弱到强再减弱;TGF-β1表达高峰出现在E14,Smad3高峰出现在E17。结论 TGF-β1/Smad3信号通路对大鼠胚胎的心脏发育起一定的调控作用。