基于指纹图谱和网络药理学的经典名方三化汤质量标志物预测

目的:建立三化汤的指纹图谱,利用网络药理学方法筛选质量控制指标性成分。方法:建立15批三化汤的高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012A版)进行相似度评价后确定共有峰;通过与对照药材、对照品比对,对峰进行归属和指认;并采用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对15批三化汤进行质量评价;利用网络药理学筛选三化汤的核心作用靶点和通路,通过分子对接将核心靶点与13个成分进行对接验证,筛选出三化汤质量控制的指标性成分。结果:三化汤物质基准的HPLC指纹图谱共标定17个共有峰,相似度均大于0.97;共指认13个色谱峰,分别为辛弗林、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、厚朴酚、和厚朴酚、紫花前胡苷、异欧前胡素,其中含量排名前4的成分为柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林、紫花前胡苷;OPLS-DA将样品分为3类,通过变量重要性投影得出新橙皮苷、柚皮苷、紫花前胡苷、大黄酸对三化汤物质基准影响较大;网络药理学预测13个成分可能通过肿瘤蛋白P53 (TP53)、蛋白激酶B1 (Akt1)、90 kDa热休克蛋白αA1 (HSP90AA1)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α (PIK3CA)等38个核心靶点,作用于内分泌抵抗、脂质和动脉粥样硬化、前列腺癌、PI3KAkt1信号通路、结直肠癌等157条主要通路发挥药效作用,度值前5位的成分为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚。分子对接结果显示,13个成分均能与Akt1稳定地结合。结论:通过整合含量测定、化学计量学、网络药理学,共筛选出新橙皮苷、柚皮苷、紫花前胡苷、大黄酸、辛弗林、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚10个成分可能为三化汤的质量标志物。

通腑化痰活血法对脑梗死急性期患者白介素-6C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察通腑化痰活血法对脑梗死急性期患者白介素-6、C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α的影响。方法:80例患者随机分为观察组和对照组,每组各40例,对照组予以西医常规治疗,观察组在对照组基础上加用通腑化痰活血方治疗,治疗30 d。观察2组患者的临床疗效和治疗前后NIHSS评分、血清白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化。结果:观察组总有效率为87.5%,明显优于对照组之总有效率65%(P<0.05)。观察组治疗后NIHSS评分下降程度优于对照组(P<0.05)。观察组和治疗组治疗后IL-6、CRP、TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01),但观察组下降程度明显优于对照组(P<0.05)。结论:通腑化痰活血法治疗脑梗死急性期疗效显著,且能促进患者神经功能恢复,其作用机制可能与降低患者血清炎性因子有关。

通腑化痰活血法对脑梗死急性期患者抗凝血酶Ⅲ前列环素、血栓素A_2的影响

目的:观察通腑化痰活血法治疗脑梗死急性期患者的疗效及其对抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、前列环素(PGI_2)、血栓素A_2(TXA_2)的影响。方法:92例脑梗死急性期患者随机分为观察组和对照组,2组均予以西医常规治疗,观察组在此基础上加用通腑化痰活血方治疗,观察2组的临床疗效和治疗前后日常生活能力评分指数(Barthel指数)、血浆AT-Ⅲ、6-keto-PGF1α、TXB_2的变化情况。结果:观察组疗效优于对照组(P<0.05);观察组治疗后Barthel指数上升程度较对照组明显(P<0.05)。2组治疗后血浆AT-Ⅲ、6-keto-PGF1α水平较治疗前明显提高(P<0.05或P<0.01),TXB_2水平较治疗前明显下降(P<0.05);观察组改善程度优于对照组(P<0.05)。结论:通腑化痰活血法可提高脑梗死急性期患者的治疗效果,改善患者日常生活能力,其作用机制与纠正高凝状态、抑制血栓形成有关。

HPLC-多波长切换法同时测定经典名方三化汤中12种成分的含量

目的:建立同时测定经典名方三化汤中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚等12种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-多波长切换法。色谱柱为COSMOSIL C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长分别为280 nm(柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷)、254 nm(芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚)、310 nm(羌活醇、大黄素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:12种成分的分离度均较良好,阴性对照无干扰。柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、羌活醇、大黄素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚分别在55.4~5540、3.8~380、45.6~4560、1.2~120、2.1~210、2.2~220、2~200、2.4~240、0.8~80、1.2~120、1.7~170、1.1~110μg/mL质量浓度范围内与其峰面积的线性关系良好(R2≥0.9996);检测限分别为0.064、0.024、0.053、0.018、0.020、0.041、0.050、0.091、0.030、0.180、0.028、0.083μg/mL,定量限分别为0.213、0.075、0.174、0.060、0.063、0.138、0.166、0.323、0.130、0.600、0.094、0.275μg/mL;精密度、稳定性(24 h)和重复性试验的RSD均小于2%(n=6);平均加样回收率分别为99.54%、99.69%、100.01%、99.93%、100.36%、99.65%、100.03%、100.47%、99.97%、100.68%、99.90%、100.17%,RSD均小于2%(n=6)。结论:本研究所建立的HPLC-多波长切换法操作简便、专属性强、稳定性好,可用于三化汤中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等12种成分含量的同时测定。

加味三化汤联合常规疗法治疗急性脑出血临床观察

目的:观察加味三化汤联合常规疗法治疗急性脑出血的疗效及对血清中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的影响。方法:筛选100例急性脑出血痰热腑实、风痰闭阻证患者,按随机数字表法分成治疗组和对照组,每组50例。2组均予常规对症治疗,治疗组联合加味三化汤治疗,2组疗程均为2周。比较2组治疗前后的格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、中医症状评分、血清IL-6、TNF-α水平及临床疗效。结果:治疗后,治疗组总有效率为92.00%,高于对照组的74.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。2组GCS评分均较治疗前升高,NIHSS评分均较治疗前减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,治疗组NIHSS评分减少更显著,差异均有统计学意义(P<0.01)。2组头痛、目眩、痰多、大便干便秘、舌苔黄腻、舌质暗红评分均较治疗前减少(P<0.01);与对照组比较,治疗组各项症状评分减少更明显(P<0.01)。2组IL-6和TNF-α水平均较治疗前降低(P<0.01);与对照组比较,治疗组IL-6和TNF-α水平降低更明显(P<0.01)。结论:加味三化汤联合常规疗法治疗急性脑出血痰热腑实、风痰闭阻证疗效明显,缓解机体内炎症反应的效果确切,可有效促进神经功能缺损的恢复及意识状态的改善,值得进一步探讨。

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP-9 mRNA表达的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g.kg-1)ig、尼莫地平组(8.1 mg.kg-1)ig。大鼠常规饲养3d后ig给药,每日1次,连续给药7 d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织MMP-9的表达,采用逆转录聚式酶链反应法(RT-PCR)检测脑组织MMP-9 mRNA的表达。结果:模型组脑组织MMP-9,MMP-9mRNA表达显著升高(P<0.01);三化汤高剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达显著降低(P<0.01),尼莫地平组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达也明显降低(P<0.05),三化汤低剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达降低不明显;三化汤高剂量组降低脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达较尼莫地平组明显。结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。

三化汤对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的保护作用

目的:观察三化汤对大鼠脑缺血再灌注血脑屏障损伤的保护作用。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g.kg-1)ig、尼莫地平组(8.1 mg.kg-1)ig。大鼠常规饲养3 d后灌胃给药,每日1次,连续给药7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。采用比色法检测大鼠脑组织伊文思蓝(EB)的含量,采用酶联免疫法检测大鼠血清S100B蛋白的含量。结果:假手术组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量减少,模型组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量显著升高(P<0.01);与模型组比,各用药组大鼠脑组织EB含量、血清S100B蛋白含量显著降低(P<0.05),其中三化汤高剂量组、尼莫地平组比三化汤低剂量组降低明显(P<0.05)。结论:大鼠脑缺血再灌注后可引起血脑屏障的损伤,三化汤对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障损伤具有一定的保护作用。

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织胞质附着蛋白(ZO-1)表达的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g·kg-1)、尼莫地平组(8.1 mg·kg-1)。大鼠常规饲养3 d后灌胃给药,每日1次,连续7 d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。脑缺血2 h再灌注24 h后,取脑组织采用免疫组织化学法检测各组大鼠ZO-1的表达。结果:与假手术组比,模型组脑组织ZO-1表达显著降低(P<0.01);与模型组比,三化汤高剂量组脑组织ZO-1表达显著升高(P<0.01),尼莫地平组脑组织ZO-1表达也明显升高(P<0.05),三化汤低剂量组脑组织ZO-1表达升高不明显,无显著性差异;三化汤高剂量组升高脑组织ZO-1表达较尼莫地平组明显(P<0.05)。结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。