基于网络药理学及分子对接技术探究三妙丸治疗强直性脊柱炎的作用机制

目的通过网络药理学探究三妙丸对强直性脊柱炎的作用机制,并使用分子对接技术进一步分析相关有效成份及核心靶点。方法中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索三妙丸有效成份及作用靶点,使用人类基因数据库(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、遗传药理学与药物基因组学数据库(PharmGKB)、疗效靶点数据库(TTD)、药物数据库(DrugBank)数据库检索疾病相关靶点,使用Perl语言进行归类数据分析,R语言绘制Venn图,分析出三妙丸作用于强直性脊柱炎的靶点。蛋白质相互作用数据库(STRING)网络平台检索靶蛋白之间相互关系,并导出PPI网络图,使用Cytoscape软件将药物有效成份及疾病相关靶点网络关系可视化。使用Bioconductor数据,R语言进行数据分析并绘制相关柱状图、气泡图、通路图。使用PubChem数据库、PDB数据库受体、配体信息,通过AutoDockTools进行分子对接、打分。结果检索出三妙丸中共44个有效成份,其中25个有效成份与强直性脊柱炎相关联;三妙丸中有效成份作用靶点203个,强直性脊柱炎相关靶点2200个,相关联靶点71个。基因本体富集分析(GO)及京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)分析,三妙丸通过白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、辅助性T细胞17细胞分化信号通路、破骨细胞分化信号通路、核因子-kappaβ信号通路治疗强直性脊柱炎。三妙丸有多种有效成份作用于强直性脊柱炎核心靶点环氧合酶2(COX2)、基质金属蛋白酶(MMP9),预测有效成份吴茱萸次碱、槲皮素、黄芩黄素可对COX2、MMP9靶点发挥作用。结论三妙丸治疗强直性脊柱炎是多靶点、多途径和多重机制。吴茱萸次碱可能是作用于COX2、MMP9靶点治疗强直性脊柱炎的新机制。

二妙丸与三妙丸治疗痛风作用机制的研究进展

痛风是一种常见的风湿免疫病,急性发作时,肢体末端常出现红、肿、热和剧烈疼痛。传统中药具有毒副作用小和多靶点等优点,已成为研治痛风的新方向,但因其治疗机制尚未完全明确而未能普及。二妙丸、三妙丸是主治焦湿热痹证的古老中药复方,是至今治疗痛风的常用中药,但其成分、配比与作用机制的研究仍需不断完善与探索。本文对二妙丸、三妙丸治疗痛风的研究现状与进展进行综述,以期为临床研究提供参考。

三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制研究

目的:研究三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制。方法:用弗氏完全佐剂和湿热处理法制备大鼠湿热痹症关节炎模型,造模成功的大鼠分为3组:模型组,含牛膝的三妙丸(18 g.kg-1)组,不含牛膝三妙丸(10 g.kg-1)组。HPLC法测定三妙丸中主要成分小檗碱在心脏、关节组织中的分布情况,体积法测定大鼠足关节肿胀度,同时观察组织病理变化;测定血浆血液流变学指标。结果:含牛膝三妙丸组在给药后2,4,6 h和多次给药14 d后关节浓度均高于不含牛膝组,关节/心脏小檗碱浓度比显著大于不含牛膝组。含牛膝的三妙丸明显改善关节炎模型大鼠的关节肿胀和组织病理改变。含牛膝三妙丸组明显改善关节炎大鼠血液流变学指标,与不含牛膝三妙丸组比P<0.01,与模型组相比也有显著性差异(P<0.01)。结论:牛膝能够引导三妙丸中主要有效成分小檗碱的靶组织分布,并与其药效作用相吻合。其促进小檗碱组织分布的作用和其活血作用可能有一定关系。

三妙丸及其组方药材的化学成分、质量控制及临床应用

三妙丸为中药经典方剂,具有清热燥湿的功效,临床多用于治疗痛风和高尿酸血症。本文通过查阅近5年的文献资料,对三妙丸及其组方药材的化学成分、质量控制方法及临床应用进行综述,为三妙丸的质量评价以及临床用药等提供科学依据。

三妙丸中牛膝引药作用的机理研究

目的通过药代动力学组织分布研究法,研究牛膝在正常大鼠体内对三妙丸中主要有效成分小檗碱组织分布的影响,以探讨其引药的作用。方法大鼠均分成两组,分别灌胃给予含或不含牛膝的三妙丸水提物,给药后2 h,4 h,6 h和7d处死动物,取血浆和心脏、后肢关节组织的匀浆,用高效液相色谱(HPLC)法测定组织中小檗碱的浓度。结果含牛膝三妙丸组动物给药后关节药物浓度在2 h时与去牛膝三妙丸组相近,4 h明显高于去牛膝组,6 h与去牛膝组相近,多次给药后明显高于去牛膝组。含牛膝组的关节/心脏药物浓度比始终明显大于去牛膝组。结论牛膝有促进三妙丸中有效成分小檗碱向关节组织分布的作用。

三妙丸抗下肢丹毒复发的实验研究

目的 :研究三妙丸对小鼠免疫系统及炎症反应的影响。方法 :用碳粒廓清实验研究药物对小鼠网状内皮系统的影响 ;观察药物对 2 ,4二硝基氯苯 (DNCB)诱导的迟发性超敏反应 (DTH)及小鼠血清溶血素含量的影响 ;用二甲苯耳廓肿胀法和棉球肉芽肿法观察药物对炎症反应的影响。结果 :三妙丸及苍术醇提胶囊能增加小鼠网状内皮系统的吞噬功能 ,增强小鼠迟发性超敏反应 ,提高血清溶血素含量及免疫器官重量 ;能对抗二甲苯所致耳廓肿胀、抑制肉芽的增生。结论 :三妙丸有抗炎及免疫调节作用 ,可能是其抗下肢丹毒复发的药理作用基础。

三妙丸类方及川牛膝对急性痛风性关节炎大鼠炎症反应的作用机制研究

目的:从NF-κB信号传导通路角度探讨三妙丸类方及引经药川牛膝对急性痛风性关节炎大鼠炎症反应的作用及机制。方法:70只大鼠随机取10只作为正常组,其余60只大鼠制备急性痛风性关节炎大鼠模型,随机分为模型组、二妙丸组、三妙丸低剂量组、三妙丸高剂量组、川牛膝低剂量组、川牛膝高剂量组。观察各组大鼠踝关节周径的变化;药物干预3天后,取大鼠滑膜组织,运用ELISA法、Westernblot法测定细胞因子水平及NF-κBP65蛋白表达水平;对滑膜组织进行HE染色,观察其病理学变化。结果:各药物干预组大鼠滑膜组织NF-κBP65、TNF-α、IL-6、IL-8、滑膜组织病理学积分低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论:三妙丸类方及川牛膝通过下调NF-κBP65蛋白表达,抑制TNF-α、IL-6、IL-8的水平,减轻急性痛风性关节炎大鼠踝关节的炎症反应,以三妙丸高剂量组疗效尤为显著;三妙丸抗炎作用优于二妙丸,机制在于引经药川牛膝对二妙丸的药效协同作用。

二妙丸、三妙丸、四妙丸中β-桉叶醇和茅术醇的含量测定

目的：建立用毛细管ＧＣ法测定二妙丸、三妙丸、四妙丸中β－桉叶醇和茅术醇含量的方法。方法：以丹皮酚为内标物，用毛细管ＧＣ法对二妙丸、三妙丸、四妙丸中β－桉叶醇和茅术醇的含量进行测定。结果：对３０种成药的含量测定表明，大部分成药中含有β－桉叶醇和茅术醇，β－桉叶醇含量最高的二妙丸为Ｒ４，含量达２．９５％；三妙丸为Ｓ９，含量达３．３１％；四妙丸为Ｆ２，含量达１．３６％。茅术醇含量最高的二妙丸为Ｒ４，含量达１．３９％；三妙丸为Ｓ９，含量达２．５３％；四妙丸为Ｆ２，含量达０．９５％。结论：本法为科学评价二妙丸、三妙丸、四妙丸的质量提供了有效化学手段。

三妙丸方诸药基原考

目的对《医学正传》三妙丸中诸药的基原植物进行考证,为临床正确选药提供依据。方法查阅古代本草、方书和2010年版《中华人民共和国药典》(一部)及相关研究文献,梳理三妙丸的使用沿革,研究三妙丸及其加味方的使用历史。结果三妙丸中牛膝原载为川牛膝,其原植物或为川牛膝Cyathula officinalis Kuan。然清代、民国时期多用怀牛膝组方,其原植物为怀牛膝Achyranthes bidentata Bl.。现今临床川牛膝、怀牛膝皆用,而《中华人民共和国药典》规定三妙丸中用怀牛膝。方中苍术原载为苍术,原植物为茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.,现今多使用其栽培品以及北苍术A.chinensis(DC.)Koidz.。方中黄柏即为川黄柏Phellodendron chinense Schneid.,供应不足时亦可用关黄柏P.amurense Rupr.代替。结论三妙丸方中3味药的基原植物分别为川牛膝、茅苍术和川黄柏。

三妙丸中牛膝的基原考证及其引经作用浅析

查阅历代典籍,梳理牛膝在三妙丸中的应用发展演变、考证其基原,并结合文献所载性味归经和现代研究浅析其引经作用,为指导三妙丸和牛膝的科学研究及临床应用提供参考。结果表明:牛膝常用品种有川牛膝(来源于苋科杯苋属川牛膝Cyathula officinalis Kuan)、怀牛膝(来源于苋科牛膝属牛膝Achyranthes bidentata BI.)两种。三妙丸原载为川牛膝,后世川牛膝、怀牛膝皆用。川牛膝、怀牛膝的引经作用,推测与其"苦"、"酸"味及入肝肾经有关;此外,现代研究表明,其引经作用可能是通过促进黄柏、苍术主要有效成分的靶组织分布、改善血液黏度及与黄柏、苍术的药效协同等实现。

健坤胶囊对大鼠、小鼠动物模型抗炎、镇痛和抗菌作用随机平行对照研究

[目的]观察健坤胶囊对大鼠、小鼠动物模型抗炎、镇痛和抗菌作用。[方法]采用小鼠二甲苯耳廓肿胀实验、大鼠角叉菜胶足肿胀实验和大鼠棉球肉芽肿实验,观察健坤胶囊的抗炎作用;采用小鼠醋酸扭体实验观察其镇痛作用;采用体外抑菌实验观察其抗菌作用。[结果]健坤胶囊明显降低小鼠二甲苯耳廓肿胀,抑制大鼠角叉菜胶足肿胀,抑制大鼠棉球肉芽肿,抑制小鼠醋酸扭体反应,体外明显抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌和绿脓杆菌的生长。[结论]健坤胶囊对大鼠、小鼠动物模型具有明显的抗炎、镇痛和抗菌作用。

基于“关键成分-效应靶点-核心通路”关联网络分析的三妙丸治疗类风湿性关节炎分子机制研究

目的:采用“关键成分-效应靶点-核心通路”关联网络分析方法探索三妙丸治疗类风湿性关节炎(RA)的潜在作用机制。方法:基于中药数据库分析方法,以口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18作为筛选条件,寻找三妙丸主要活性成分和相关作用靶点。用CTD网络分析平台及人类基因和基因表型综合数据库获得RA作用靶点,利用Cytoscape 3.7.1软件中的Merge功能筛选交集共有靶点。将共有靶点输入STRING系统构建靶点蛋白相互作用(PPI)网络,通过聚类分析筛选效应靶点,采用WebGestalt富集分析靶点功能及信号通路,并构建“关键成分-效应靶点-核心通路”关联网络。结果:筛选得到三妙丸中60个化学成分,作用于RA的59个靶点,其中效应关键靶点共15个,包括前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子(TNF)等,与炎症反应、防御反应及细胞因子调节等生物过程紧密相关,可通过调节细胞因子与受体的相互作用、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、T细胞受体信号等通路发挥其治疗RA的作用。结论:三妙丸能通过多成分、多靶点、多通路起到治疗RA的作用,为三妙丸的有效性评价、效应机制研究提供参考。

基于NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路探讨加味三妙丸防治痛风性关节炎的作用及机制

[目的]基于Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎性体轴和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,探讨加味三妙丸(modified Sanmiao pill,MSMP)对THP-1细胞痛风炎症模型的抗炎作用及机制。[方法]通过尿酸钠(monosodium urate,MSU)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同诱导建立THP-1细胞痛风炎症模型。以MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌水平,Western blot检测NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路中相关蛋白表达情况。[结果]MSU与LPS联用可诱导THP-1细胞产生典型痛风炎症。与空白组比较,模型组THP-1细胞分泌IL-1β水平显著升高(P<0.01);NLRP3炎性体轴相关蛋白NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、磷酸化NF-κB p65(phospho-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of NF-κBα,p-IκBα)、磷酸化IκB激酶α(phospho-inhibitor of NF-κB kinaseα,p-IKKα)及上游调节蛋白髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,MSMP具有较强的抗炎效果,对NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路两条路径相关蛋白的异常表达均具有明显的调控作用,不同剂量的MSMP显著降低IL-1β的分泌(P<0.01),明显下调NLRP3、ASC、caspase-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-IKKα及MyD88、TLR2、TLR4等蛋白的表达,且具有剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。[结论] MSMP在痛风炎症细胞模型上表现出较强的抗痛风性关节炎作用,其机制与调控NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路相关蛋白的表达密切相关。

基于三妙丸抗类风湿性关节炎作用机制的网络药理学研究

目的采用网络药理学技术对三妙丸抗类风湿性关节炎作用机制进行研究。方法基于中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)研究了三妙丸所含化学成分及体内作用靶标,根据利宾斯基五原则筛选潜在成分,并富集分析与类风湿性关节炎现相关的体内靶标。进而阐明三妙丸抗类风湿性关节炎的关键作用机制。结果通过上述方法共计发现与类风湿性关节炎相关的有效成分82个,直接相关的作用靶标7个,相关代谢通路110条。关键成分分别是汉黄芩素、β-谷甾醇、槲皮素、小檗碱、黄连碱、黄柏碱等,涉及到的与类风湿性关节炎相关的靶标有转录因子-1、趋化因子2、前列腺素2/H合成酶、肿瘤坏死因子、蛋白激酶激酶、硫蛋白还原酶、酪氨酸蛋白激酶。涉及相关代谢通路为丝裂原活化蛋白激酶信号通路、细胞凋亡、结节样受体信号通路、T细胞受体信号通路、B细胞受体信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、癌症中的胆碱代谢、炎症性肠病、类风湿关节炎、流体剪切应力与动脉粥样硬化、花生四烯酸代谢、NF-κB信号通路、血管内皮生长因子信号通路。结论三妙丸通过多成分、多靶点、多通路协同起效的方式起到抗类风湿性关节炎的作用。本研究才网络药理学技术层面,基于中药系统药理学数据库及分析平台的三妙丸有效成分及体内预测靶标理论化揭示了三妙丸看类风湿性关节炎的作用机制,为三妙丸及先关药物的新药研发和机制研究奠定基础。

内外兼治痛风性关节炎42例临床观察

[目的]观察内外兼治痛风性关节炎的临床疗效。[方法]治疗组42例石膏知母汤合三妙丸加减口服,外用金黄散软膏帖敷;对照组30例秋水仙碱口服,疗程均为1周。[结果]治疗组的临床疗效优于对照组(P<0.01)。[结论]中医药内外兼治痛风性关节炎有良好的清热镇痛、降血尿酸作用,见效快,副作用少,复发率低。

三妙丸中盐酸小檗碱的含量测定

目的采用高效液相色谱(HPLC)法测定三妙丸的盐酸小檗碱含量。方法采用Diamonsil ODS1 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以50∶50的乙腈-0.1%磷酸溶液(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长265 nm。结果盐酸小檗碱进样量在0.127～2.54μg范围内与峰面积线性关系良好,回归方程Y=418 567.505-92 087.201X,r=0.999 4。平均加样回收率为99.53%,RSD为0.48%(n=6)。结论该法简便、准确、专属、重复性好,为三妙丸的盐酸小檗碱含量分析提供了科学有效的方法。

三妙丸工艺的优化及工艺验证

目的针对三妙丸制丸过程中易出现丸药开裂的情况,优化了三妙丸的制丸工艺参数,并进行了工艺验证。方法首先制得三妙丸粉,然后以丸药外观、水分、溶散时限为评价指标,通过考察不同丸径及干燥温度,优化三妙丸的制丸工艺参数,并进行三批次工艺验证。结果三妙丸制丸工艺参数条件优化为,丸径控制为5.0±0.25mm,泛制成丸,70℃干燥。结论工艺简单可行,产品各项指标稳定。

邵华教授运用三妙丸治疗痛风的经验

近年来,痛风的发病率明显增加,发病年龄逐渐年轻化,严重影响了人们的生活质量。现介绍邵华教授运用三妙丸加味治疗痛风的经验,认为痰湿内蕴是痛风发病的关键内因,加之外感六淫之邪,以致此病迁延不愈,容易急性复发,强调祛湿化痰、化瘀通络是治疗痛风的治本之道。三妙丸具有清热利湿、活血通络的功效,加味之后可以更好的治疗痛风,在临床上也取得了令人满意的效果。

二妙丸与三妙丸中4种生物碱在正常和关节炎模型大鼠体内的药动学与组织分布差异

考察二妙丸与三妙丸中4种生物碱在正常和关节炎模型大鼠体内的药动学与组织分布差异。通过注射弗氏完全佐剂建立模型大鼠,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS),正离子多反应监测模式检测正常大鼠和模型大鼠分别灌胃二妙丸与三妙丸后血浆和组织中4种生物碱成分,比较4种活性成分的药动学和组织分布差异,探讨牛膝对三妙丸主要成分的影响。建立了同时检测4种生物碱的UPLC-MS/MS方法,该方法专属性、线性关系、准确度、精密度、稳定性等均符合要求。药动学研究发现,与正常大鼠比较,模型大鼠灌胃二妙丸后,黄柏碱、木兰花碱、小檗碱和巴马汀的AUC和C_(max)明显降低,清除率显著增加,肝、肾和关节中4种生物碱的分布浓度、组织/血浆浓度比明显减少;牛膝可增加模型大鼠体内黄柏碱、小檗碱、巴马汀的AUC,降低清除率,显著增加4种生物碱在肝、肾和踝关节中的分布,但对正常大鼠体内4种生物碱的药动学及组织分布未有明显影响,提示牛膝可能通过增加关节炎状态下三妙丸有效成分的组织分布,发挥引经作用。

中药复方三妙丸中化学成分的HPLC-TOF/MS分析

目的:采用高效液相色谱-飞行时间质谱(HPLC-TOF/MS)联用技术分析中药复方三妙丸中的主要化学成分。方法:色谱分离采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,3μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.6 mL.min-1,柱温25℃。质谱定性鉴别采用TOF/MS正离子模式扫描,电压4 kV,雾化气压力275.85 kPa,干燥气流速10 L.min-1,干燥气温度350℃。结果:在优化的液质联用条件下,通过飞行时间质谱以及碎片离子裂解分析,鉴定了三妙丸中23个化学成分,包括3组同分异构体。结论:所建立的HPLC-TOF/MS联用法,可为鉴定三妙丸中的化学成分提供一种快速、高效的方法。