尿苷肽类抗生素sansanmycin E的分离、纯化和结构鉴定

目的从Streptomyces sp SS产生的尿苷肽类抗生素sansanmycins复合物中分离、提取和纯化小组分的尿苷肽类化合物,并进行结构鉴定。方法利用大孔树脂吸附、反相制备HPLC等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果分离到一个尿苷肽类化合物sansanmycin E。结论经鉴定sansanmycin E为新结构化合物。

尿苷肽类抗生素sansanmycin D的分离、纯化和结构鉴定

目的从尿苷肽类抗生素sansanmycins的产生菌Streptomyces sp.SS的发酵液中分离、提取和纯化小组分,并进行结构鉴定。方法以铜绿假单胞菌为检定菌,利用大孔树脂吸附、反相制备HPLC等方法进行分离纯化。用光谱分析,进行结构解析。结果分离到一个尿苷肽类化合物sansanmycin D。结论Sansanmycin D与文献报道的mureidomycin A结构一致。

Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体内外抗菌活性的初步研究

目的评价sansanmycinA对临床分离铜绿假单胞菌的体内、外抗菌活性。方法体外试验以微量肉汤稀释法测定sansanmycinA同时对照10种药物对150株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC），以平皿计数法测定最低杀菌浓度（MBC）；半体内试验以微量稀释法测定sansanmycinA的血清抑菌活性（SBS）和血清杀菌活性（SBA）。结果Sansanmycin A对铜绿假单胞菌体外抗菌活性与哌拉西林相似，其MIC50和MBC50分别为8和16μg／mL，MIC范围为2-〉512gg／mL，MBC范围为2～〉512μg／mL，头孢曲松和替卡西林对铜绿假单胞菌的MIC50和MBC50较sansanmycin A高2-4倍。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌显示浓度依赖性杀菌作用。Sansanmycin A对铜绿假单胞菌峰时SBS和SBA中位数分别为1：256和1：128。结论SansanmycinA对铜绿假单胞菌显示较强的体外和体内杀莴活件，有讲一步研究和开发的价佰。

新型尿苷肽类化合物Sansanmycin P的提取分离、结构鉴定及活性研究

目的从放线菌Streptomyces sp SS发酵液中分离新型活性尿苷肽类似物。方法发酵液经D4006大孔吸附树脂、DEAE-葡聚糖凝胶及制备液相分离纯化,获得单一化合物;根据UV、MS、MS/MS、1D和2D NMR确定化合物结构,并进行抗菌活性研究。结果分离纯化得到1个N-末端含有1-甲基-6-羟基四氢异喹啉的尿苷肽类化合物Sansanmycin P。初步体外抗菌活性,抗铜绿假单胞菌MIC>32μg/ml,抗结核杆菌MIC>32μg/ml。结论 Sansanmycin P为全新结构Sansanmycins类似物,具有一定抗结核杆菌和铜绿假单胞菌活性。

Effects of Combined Treatment with Sansanmycin and Macrolides on Pseudomonas aeruginosa and Formation of Biofilm

Objective To observe the effects of combined treatment with sansanmycin and macrolides on Pseudomonas aeruginosa and formation of biofilm. Methods Micro-dilution method was used to determine the minimal inhibitory concentrations （MICs） of sansanmycin, gentamycin, carbenicillin, polymyxin B, roxithromycin, piperacillin, and tazobactam. PAl and PA27853 biofilms were observed under optical microscope after staining and under SEM after treatment with sansanmycin at different dosages and combined treatment with sansanmycin and roxithromycin. Viable bacteria in PAl and PA27853 biofilms were counted after treatment with sansanmycin at different dosages or combined treatment with sansanmycin and roxithromycin. Results The MIC of sansanmycin was lower than that of gentamycin and polymyxin B, but was higher than that of carbenicillin. Roxithromycin enhanced the penetration of sansanmycin to PAl and PA27853 strains through biofilms. PAl and PA27853 biofilms were gradually cleared with the increased dosages of sansanmycin or with the combined sansanmycin and roxithromycin. Conclusion Sub-MIC levels of roxithromycin and sansanmycin substantially inhibit the generation of biofilms and proliferation of bacteria. Therefore, combined antibiotics can be used in treatment of intractable bacterial infection.

Sansanmycin生物合成基因簇在天蓝色链霉菌中的异源表达

Sansanmycins(SSs)是一类由Streptomyces sp.SS产生的尿苷肽类抗生素,具有抗结核分枝杆菌和铜绿假单胞菌活性。该类化合物主要是由4',5'-烯胺-3'-脱氧尿苷通过肽键与假四肽肽链中的N-甲基-2,3-二氨基丁酰基(DABA)相连。为了研究相关基因的功能,进一步利用合成生物学的手段获得SSs的新结构衍生物,本实验克隆了完整的SS生物合成基因簇,并将其在天蓝色链霉菌M1146、M1152和M1154中异源表达。借助于HPLC和LC-HRMS/MS等对重组菌株的发酵液进行分析,结果表明三株异源表达菌株均能产生SS-A,而且M1154异源表达菌株的SS-A产量与未退化的野生型菌株相当。同时从M1154异源表达菌株发酵液中发现了一个可能为新结构的SS类似物SS-1154。

HPLC-MS/MS法发现ssaX阻断菌株中两个尿苷肽类新化合物

目的对ssaX基因阻断菌株次级代谢产物中的sansanmycin类似物进行研究,发现新化合物。方法对Streptomyces sp.SS野生菌株及ssa X基因阻断株的发酵液分别进行固相萃取,收集60%甲醇水洗脱液进行HPLC-MS/MS分析。通过与文献报道的已知化合物数据相比较的方法,分析其中sansanmycin类化合物结构并利用MS/MS对其结构进行确证。结果从ssa X基因阻断株的发酵液中发现了8个sansanmycin类化合物,其中SS-MX-7和SS-MX-8为新结构化合物。SS-MX-7化学结构中假四肽肽链上的第一位和第四位氨基酸残基均为酪氨酸取代,而SS-MX-8的这两个位置均为苯丙氨酸。结论 ssa X基因阻断株产生的两个新sansanmycin类似物,进一步丰富了尿苷肽类化合物的结构多样性,同时也为利用HPLC-MS/MS方法在其他重组菌株中发现尿苷肽类新化合物奠定了基础。