三白草酮超临界CO_2萃取工艺优化及三白草超临界萃取物体外抗肿瘤活性

目的优化三白草酮超临界CO2萃取工艺,并评价三白草Saururi Herba超临界萃取物体外抗肿瘤活性。方法以萃取压力、萃取温度、萃取时间、夹带剂(乙醇)体积分数、夹带剂用量为影响因素,三白草酮提取率为评价指标,正交试验优化萃取工艺,MTT法测定萃取物对人肝癌细胞7721/Adm耐药株的抑制作用。结果最佳条件为萃取压力30 MPa,萃取温度50℃,萃取时间2 h,乙醇体积分数95%,用量1倍,三白草酮平均提取率0.173%。所得萃取物显著抑制了7721/Adm细胞增殖(IC50=50.08μg/mL),活性强于乙醇提取物(IC50=150.59μg/mL)。结论该方法稳定可行,适合萃取三白草酮,而且三白草超临界CO2萃取物具有较强的体外抗肿瘤活性。

基于UHPLC-Q-TOF-MS的三白草化学成分分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间高分辨质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)对三白草的化学成分进行快速分析。方法采用Waters XSelected T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.5μm),以含2 mmol/L乙酸铵的甲酸∶甲醇(体积比0.05∶99.95)为流动相A,含2 mmol/L乙酸铵的甲酸∶H2O(体积比0.05∶99.95)为流动相B,梯度洗脱,柱温35℃,流速0.4 mL/min;采用电喷雾离子化源(ESI)正离子模式采集数据。结果通过对保留时间、精确相对分子量及二级质谱裂解碎片信息进行分析,并结合数据库及相关参考文献,从三白草中共鉴定出15个具有紫外吸收的化合物。结论UHPLC-Q-TOF-MS技术能快速、准确地鉴定三白草中的化学成分,为进一步研究三白草药效物质基础和质量控制奠定基础。

三白草木脂素对创伤性脑损伤大鼠神经保护作用及Nrf2-ARE信号通路的影响

目的:探讨三白草木脂素对创伤性脑损伤(TBI)模型大鼠的神经保护作用及脑组织核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应原件(ARE)信号通路参与的机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、木脂素组3组,每组20只。除假手术组外,其余大鼠构建TBI模型。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿,TUNEL染色评价神经元的凋亡,酶活性检测试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)的水平,并比较各组大鼠脑组织中Nrf2蛋白、亚铁血红素加氧酶1(HO-1)和奎宁氧化还原酶1(NQO1)mRNA的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组2 h和24 h m NSS、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、氧化应激产物MDA的水平、细胞核Nrf2蛋白相对表达水平显著升高,氧化酶SOD、GSH-Px的活性、细胞质Nrf2蛋白相对表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,木脂素组24 h m NSS、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、氧化应激产物MDA的水平、细胞质Nrf2蛋白相对表达明显降低,SOD、GSH-Px的活性、细胞核Nrf2蛋白相对表达、HO-1和NQO1 mRNA的表达水平明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:三白草木脂素通过减弱氧化应激来保护脑组织免受TBI的影响,同时Nrf2-ARE信号通路激活可能是三白草木脂素发挥其神经保护作用的机制之一。

三白草提取物抗乳腺癌转移作用及其机制研究

目的:研究三白草提取物(extracts from Saururi Herba,ESH)的抗乳腺癌转移作用。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立实验性转移模型;采用体外细胞黏附、迁移以及侵袭法,观察ESH对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附、迁移以及侵袭的影响;采用Runx2转录因子分析法和Western blot法,观察ESH对Runx2活性的影响。结果:给药后,ESH 200,400 mg·kg-1剂量组裸鼠肺组织中人ck19的平均表达量分别为55.85%,42.28%,显著低于空白组(P<0.01);体外黏附实验表明,ESH可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P<0.01);ESH 80,160 g·L-1剂量组的细胞迁移细胞数分别为(106.4±52.4),(40.4±7.6)个,与空白组相比具有统计学差异(P<0.01);细胞侵袭实验表明,ESH低、中、高剂量组的侵袭细胞抑制率分别为32.57%,68.04%和71.92%,与空白组相比具有统计学差异(P<0.01)。Runx2转录因子活性分析以及Western blot实验结果表明,ESH可显著抑制Runx2的磷酸化,从而抑制其转录活性。结论:ESH具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内Runx2磷酸化可能是其发挥抗转移作用的机制之一。