天山雪莲水提取物对小鼠辐射损伤的保护作用

目的 观察天山雪莲水提取物 (ES)对电离辐射损伤小鼠的保护作用。方法 小鼠igES 0 .75 ,1.5 ,3.0g/kg ,14d后接受 8和 2 .5Gy的照射 ,观察 8Gy照射小鼠的平均生存时间和生存率及 2 5Gy照射小鼠的脾T淋巴细胞转化能力和骨髓DNA含量。结果 ES能显著延长 8Gy照射小鼠的平均生存时间 (P <0 0 5 ) ,并提高生存率 ;显著提高 2 5Gy照射小鼠的脾T淋巴细胞转化能力和骨髓DNA含量 (P <0 0 5 ,0 0 1) ,改善免疫功能。结论 ES具有抗辐射损伤作用。

雪莲的研究进展

雪莲是我国珍稀名贵的中药材 ,具有很高的药用价值 ,应用前景广阔。雪莲生长环境恶劣 ,自然资源十分有限。由于近年来野生雪莲乱采滥挖现象严重 ,加之人工栽培困难 ,雪莲已被列为国家三级濒危物种而受到保护。综述雪莲的有效成分、药理作用、开发利用现状及解决雪莲资源短缺的途径 ,并对雪莲今后研究发展的方向进行了展望 ,以期更加有效地保护和合理开发利用雪莲资源、满足医药市场需求、保护西部生态环境和促进西部经济发展。

转天山雪莲冷调节蛋白基因烟草的获得及其抗寒性鉴定

从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF);构建植物表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因烟草,用RT-PCR对转化烟草进行鉴定,收取种子后筛选出纯合的T3株系,并通过冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果表明:(1)siCOR大小661bp,与禾本科植物粳稻的冷调节蛋白基因一致性最高(65.04%)。(2)与野生型植株相比,转siCOR基因烟草均叶片浓绿、无分支侧芽,生长快;在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因的烟草叶片相对含水量、PSⅡ相对量子产率降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株,而且转siCOR基因烟草植株叶片出现萎蔫症状的时间较迟、程度较轻,受到的伤害也较轻。研究发现,在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因烟草植株表现出良好的生理和生长优势,显示出了较强的抗寒特征。

新疆雪莲全长cDNA文库构建及表达序列标签(ESTs)特性分析

以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTMcDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA,用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链。通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA。将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上,并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库。经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL)。随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上。将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据。其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性。这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息。

新疆雪莲多倍体的诱导初探

用秋水仙素和2%二甲基亚砜共同处理新疆雪莲种子、胚根和茎段,以诱导多倍体雪莲。结果表明,茎段经过100 mg.L-1秋水仙素处理3 d诱导效果最佳,同时,离体培养其嵌合体苗茎段及叶片,诱导不定芽生成,获得了四倍体细胞比例达到90%以上的植株。

新疆雪莲化学成分的分离与鉴定

目的对新疆雪莲的化学成分进行研究。方法采用硅胶、凝胶柱色谱和重结晶等分离方法对体积分数为75%的新疆雪莲乙醇溶液提取物进行成分分离,通过谱学分析方法结合理化性质进行结构鉴定。结果共分离得到8个化合物,分别鉴定为大苞雪莲内酯(involucratolactone,1)、11α,13-dihydrozaluzanin-C(2)、dihydrozaluzanin-C(3)、7β-羟基谷甾醇(7β-hydroxysitosterol,4)、7β-羟基豆甾醇(stigmast-5,22-dien-3β,7β-diol,5)、山奈酚(kaempferol,6)、高车前素(hispidulin,7)、粗毛豚草素(jaceosidin,8)。结论化合物3、5为首次从风毛菊属植物中分离得到,化合物2、4为首次从新疆雪莲植物中分离得到。

天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建

以天山雪莲(Saussurea involucrataKar.et Kir)幼嫩叶片为研究材料,利用CreatorTMSMARTTMcD-NA Library Construction技术构建了天山雪莲叶片全长cDNA文库,原始文库滴度达3.93×105cfu/mL,文库插入片段多在1 000 bp左右。随机挑取10个克隆进行测序,通过生物信息学初步分析表明,100%为全长cDNA,大部分可以在GenBank中找到同源序列。天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建为雪莲基因资源保存和植物抗寒机理的研究奠定了基础。

植物激素和活性炭对新疆雪莲组培苗生根的影响

研究了不同植物激素和活性炭对新疆雪莲组培苗生根的影响,测定了根长、根粗、根数和生根率4个生根指标,结果表明:添加生长素IAA、IBA和NAA均可以不同程度地促进生根,但0.2mg/L的IAA效果最佳,根长最长达5.5mm,根粗最小0.96mm,根数最多达9.75条,生根率达100%;添加活性炭可以提高生根质量,最适添加量为1mg/mL。此时,根长最长达25.51mm,根粗最小为0.6mm,根数最多达13条,生根效果最佳。

HPLC法建立新疆雪莲指纹图谱研究

目的 :对 7种不同产地的新疆雪莲药材进行指纹谱比较研究。方法 :以乌鲁木齐南山产新疆雪莲药材为分析对象 ,选择适宜的色谱条件 ,建立了 7个不同产地的新疆雪莲药材样品的指纹图谱。结果 :方法学考察表明 ,本研究建立的分析方法有比较好的重现性 ;不同产地的新疆雪莲药材共有峰相对保留时间基本一致 ,但其相对面积存在一定的差异。结论 :指纹谱分析方法可简便、快速的鉴别和区分不同产地的新疆雪莲药材。

新疆雪莲的香豆素类化学成分的研究

目的研究新疆雪莲(SaussureainvolucrateKar·etKir)的化学成分。方法应用各种柱色谱的方法进行分离;应用化学和各种光谱分析的方法鉴定化合物。结果从新疆雪莲的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到8个香豆素类成分,它们分别为蛇床子内酯(osthol),佛手内酯(bergapten),异茴芹内酯(isopimpinellin),爱得尔庭(edultin),叶鞘二醇二乙酸酯(vaginidioldi-acetate),别异因波拉托内酯(alloisoimperatorin),噢洛内酯(oroselol),花椒香豆素(xanthotoxol)。结论这8个香豆素均为首次从新疆雪莲中分离得到。

天山雪莲提取物磷脂复合物溶解度及稳定性的考察

目的通过溶解度比较考察天山雪莲提取物磷脂复合物稳定性。方法分别测定天山雪莲提取物和天山雪莲提取物磷脂复合物在水和不同p H的缓冲溶液中平衡溶解度,不同p H的饱和正辛醇/水中表观油水分配系数,和强光照射、高温、高湿环境下,考察天山雪莲提取物磷脂复合物的质量及其有效成分(绿原酸和芦丁)的质量分数变化。结果磷脂复合物可明显提高天山雪莲提取物中活性成分(绿原酸和芦丁)平衡溶解度和表观油水分配系数,而且具有一定的抗光照性,但高温下,磷脂复合物稳定性较差,易吸湿。结论本研究将天山雪莲提取物磷脂复合物能不同程度改善天山雪莲提取物中活性成分的水溶性和脂溶性,同时以固体形式保存其稳定性较好。

高速逆流色谱用于天然产物分离和指纹图谱构建

利用国产高速逆流色谱分离纯化雪莲黄酮类成分和丹参醌类成分。雪莲分离选用氯仿 甲醇 水 (10∶7∶3)体系 ,固定相保留率 72 % ,仪器参数 80 0r min 2mL min ,采用一步洗脱法 ,7h内得到 14个组分 ;丹参分离选用正己烷 乙醇 水 (10∶5 5∶4 5 )体系 ,固定相保留率达到 78 8% ,采用分步洗脱 ,3个产地丹参在 13h内各分离得到 12个洗脱组分。HSCCC洗脱图谱可以表现出不同产地丹参的差别 ,并且各对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差 <3% ,因此提出将HSCCC作为构建中药指纹图谱的方法之一 ,其可行性需要通过与常规的指纹图谱构建方法比较之后做出评价。

新疆雪莲体细胞胚胎发生

通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.etKir.)的植株再生。选用新疆雪莲子叶为外植体,接种于MS+0.5mg.L-12,4-D+0.05-1mg.L-1BA的固体培养基上,进行愈伤组织的诱导。从第1次继代培养的愈伤组织中挑选出黄绿色、颗粒状、质地致密的胚性愈伤组织,转移到含0.05-0.1mg.L-12,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养,20天后可分化产生大量球形胚。继代过程中相继加入PEG和GA3,可以促进体细胞胚的分化和生长。体细胞胚在含有5mg.L-1GA3的MS固体培养基上,可发育成完整的植株。

高效液相色谱法同时测定天山雪莲中绿原酸和芦丁的含量

目的建立测定天山雪莲中绿原酸及芦丁2组分含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Kroma-sil-C18柱,以甲醇-0.4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为340 nm,流速为1 mL.min-1。结果在选定的色谱条件下,测定了天山雪莲中绿原酸及芦丁2组分含量。结论本法简单易行,可用于天山雪莲中绿原酸及芦丁的含量测定。

雪隆胶囊的质量标准研究

目的 制订雪隆胶囊的质量标准。方法 对雪莲花进行了薄层色谱鉴别 ;用分光光度法测定了 L -羟脯氨酸的含量。结果 含量测定平均回收率 10 1.1% (RSD=1.7% ,n=6 )。结论 该方法稳定 ,专属性强 。

新疆雪莲胚性愈伤组织的诱导及原生质体分离

以新疆雪莲无菌叶片为材料，诱导其产生胚性愈伤组织，再以胚性愈伤组织为分离原生质体的起始材料，研究质壁分离时间、渗透压浓度、酶液组合、酶解时间等因素对其原生质体分离效果的影响。结果表明：对诱导胚性愈伤组织有较好效果的培养基组合为：MS＋2，4-D0．1mg／L＋BA0．5mg／L＋NAA1．5mg／L＋葡萄糖30g／L；原生质体分离最佳体系为：含纤维素酶2．5％、离析酶0．2％、果胶酶1％、IVIES0．1％和甘露醇10％的酶解液，在温度（26±1）℃，pH5．8条件下酶解14～16h，游离原生质体的产量和活性均较高。

新疆雪莲新的内切几丁质酶类冷诱导基因的分离、克隆和测序

通过RT-PCR技术,从经低温驯化的新疆雪莲的叶片中分离克隆了1个新的基因。实验证明,此基因的转录是由低温诱导激活,且随着雪莲低温驯化时间的推移,转录本的量明显增加。测序结果显示,此基因全长643bp,编码200个氨基酸。序列分析发现,此基因属于Ⅱ类内切几丁质酶基因。初步预测此基因的编码产物可能具有抗冻活性。

雪莲PEBP基因原核表达载体的构建及表达

根据雪莲PEBP基因序列设计特异性引物,利用实验室构建的Teasy-PEBP质粒为模板,扩增PEBP基因,与表达载体pET-30a(+)连接转化BL21(DE3),PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,测序分析。经IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果表明:PEBP得到大量表达,表达量占菌体总蛋白的26.8%,融合蛋白的相对分子量大约是28KD,与理论值相符,为进一步研究该蛋白的理化性质奠定了基础。

天山雪莲RAPD反应条件的优化及再生体系DNA多态性分析

目的:用RAPD法研究天山雪莲再生过程中DNA的变异。方法:优化RAPD反应体系中各影响因素,分别以天山雪莲种子苗、愈伤组织、丛生芽及再生植株的总DNA为模板,进行多态性分析。结果:优化反应体系为:Mg2+2.50mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.00U、引物0.30μmol·L-1、模板DNA 20ng、dNTP0.20mmol·L-1,退火温度为37℃。20条随机引物共扩增出174条带,平均每条引物扩增8.7条带,其中多态性条带18条,多态性位点比率为10.3%。天山雪莲再生体系与种子苗之间相似性系数为0.75～0.80。结论:天山雪莲再生过程中在DNA水平上发生了一定程度的变异。

天山雪莲未知蛋白基因的克隆及其耐铝特性分析

从天山雪莲叶片低温诱导的cDNA文库中克隆了一个未知蛋白基因(SikSD-82)cDNA全长序列。生物信息学分析表明SikSD-82基因共编码262个氨基酸,具有小麦铝诱导蛋白Wali7的保守结构域,属Gn_AT_Ⅱ家族的可溶性蛋白;其氨基酸序列与蓖麻的茎部特异性表达蛋白相似性最高为60.89%;进化树分析显示,该蛋白与番茄的茎部特异性表达蛋白关系最近。亚细胞定位结果表明,SikSD-82蛋白主要定位于细胞核。在铝胁迫条件下,转SikSD-82烟草幼苗根的伸长明显优于野生型,根部铝离子和丙二醛含量均显著低于野生型烟草,转SikSD-82烟草显示出较强的耐铝性。