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支架蛋白JLP调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖
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作者 颜奇 王惠明 丁国华 《医学研究杂志》 2014年第10期24-28,共5页
目的对支架蛋白JLP在小鼠B细胞上CD40诱导信号通路活化及细胞增殖中的作用进行研究,探索支架蛋白JLP在CD40诱导小鼠B细胞信号通路及后续生物学效应中的作用。方法磁珠分选法分选出jlp野生型和jlp基因敲除小鼠模型脾脏B细胞,使用免疫印... 目的对支架蛋白JLP在小鼠B细胞上CD40诱导信号通路活化及细胞增殖中的作用进行研究,探索支架蛋白JLP在CD40诱导小鼠B细胞信号通路及后续生物学效应中的作用。方法磁珠分选法分选出jlp野生型和jlp基因敲除小鼠模型脾脏B细胞,使用免疫印迹法检测在接受CD40配体(CD40L)刺激后jlp野生型和jlp基因敲除型小鼠脾脏B细胞p38、Erk和Jnk MAPK,磷酸化c-Jun以及NF-κB信号通路及的活化情况,并使用CFSE检测两种基因型小鼠B细胞在接受CD40L刺激后细胞增殖情况。结果 jlp基因敲除小鼠B细胞在受到CD40L刺激后其p38、Erk、Jnk MAPK信号通路以及c-Jun活化情况均较jlp野生型小鼠B细胞明显减弱,而NF-κB信号通路的激活情况在两种基因型B细胞中并无明显差异,jlp基因敲除小鼠B细胞中CD40诱导的细胞增殖水平较jlp野生型B细胞明显降低。结论支架蛋白JLP参与调控B细胞上CD40诱导的MAPK信号通路活化及细胞增殖。 展开更多
关键词 支架蛋白jlp B细胞 MAPK信号通路 细胞增殖
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支架蛋白JLP在单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化中的作用及其机制探讨 被引量:9
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作者 付强 王惠明 +3 位作者 颜奇 陈朝威 张勤 丁国华 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期30-36,共7页
目的观察支架蛋白JLP基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨JLP在梗阻性肾病肾纤维化形成中的作用和可能机制。方法将jlp+/+生型(jlp+/+)小鼠和jlp敲除(jlp+/+)小鼠分为4组:jlp“假手术组(jlp+/+-... 目的观察支架蛋白JLP基因缺失对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响,探讨JLP在梗阻性肾病肾纤维化形成中的作用和可能机制。方法将jlp+/+生型(jlp+/+)小鼠和jlp敲除(jlp+/+)小鼠分为4组:jlp“假手术组(jlp+/+-Sham);jlp+/+假手术组(jlp+/+-Sham);jlp+/+模型组(jlp+/+-UUO)和jl旷模型组(jlp-/-UUO)。分别于术后7d和14d处死小鼠。Masson染色观察肾间质纤维化改变;免疫荧光、免疫组化及Western印迹法观察JLP在各组小鼠肾组织的表达与分布;免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原纤维(COL-I)、Ⅲ型胶原纤维(COL-Ⅲ)、转化生长因子β1(TGF-B1)表达;Western印迹检测肾组织α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白表达。结果jlp+/+小鼠肾组织表达JLP,主要分布于肾小管。Masson染色结果显示,与jlp+/+.UUO组比较,jlp-/-UUO组肾间质胶原纤维增加,纤维化程度加重(均P〈0.05)。免疫组化结果显示,与jlp+/+-UUO组比较,jlp+/+.UUO组小鼠肾皮质α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ和TGF-β1表达明显升高(均P〈0.05)。Western印迹结果显示,与jlp+/+.UUO组比较,jlp+/+-UUO组α-SMA、COL-I、COL-Ⅲ和TGF-β1蛋白表达明显升高(均P〈0.05),p-Smad2和p-Smad3蛋白表达也明显升高(均P〈0.05)。结论支架蛋白JLP在预防。肾纤维化的形成中起重要作用,这一作用可能是通过抑制TGF-β1的表达和肌成纤维细胞生成来实现的。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 输尿管梗阻 单侧 纤维化 肾间质 支架蛋白jlp
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支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量:3
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作者 刘珊 王惠明 +4 位作者 丁国华 颜奇 付豆 阳诚 陈朝威 《中华肾脏病杂志》 CSCD 北大核心 2016年第8期612-616,共5页
目的 观察支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响,探讨p38 MAPK信号通路在其中的作用.方法 构建敲除jlp基因的细胞模型,细胞被分为阴性对照(Ctrl-shRNA)组、jlp基因敲除(jlp-shRNA)组、阴性对照+成纤维细胞生长因子(FG... 目的 观察支架蛋白JLP对人肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响,探讨p38 MAPK信号通路在其中的作用.方法 构建敲除jlp基因的细胞模型,细胞被分为阴性对照(Ctrl-shRNA)组、jlp基因敲除(jlp-shRNA)组、阴性对照+成纤维细胞生长因子(FGF-2)组和jlp基因敲除+成纤维细胞生长因子(jlp-shRNA+ FGF-2)组.Western印迹法检测各组细胞JLP、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子(TGF)β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达;免疫荧光法检测FGF-2诱导24 h后,α-SMA、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的表达.结果 与Ctrl-shRNA组比较,FGF-2组JLP蛋白表达量明显下调(P<0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+ FGF-2组TGF-β1、α-SMA、p38 MAPK蛋白表达量明显上调,E-cadherin蛋白表达量明显下调(P<0.05);与FGF-2组比较,jlp-shRNA+FGF-2组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的荧光表达明显上调.结论 支架蛋白JLP在促纤维化环境形成中可抑制HK-2细胞间充质转分化,其机制可能与JLP负调控p38 MAPK信号通路有关. 展开更多
关键词 支架蛋白质类jlp 细胞转分化 P38丝裂原活化蛋白激酶类 HK-2细胞
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辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响 被引量:1
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作者 付豆 丁国华 +4 位作者 王惠明 颜奇 陈朝威 刘珊 阳诚 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2017年第4期517-521,共5页
目的:探索辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响。方法:(1)体外实验:采用不同剂量X线辐照HK-2细胞,并于辐照后24h和48h提取细胞蛋白及mRNA,Western印迹法检测JLP、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、转长生长因子(TGF)-β1蛋白的表达;RT-... 目的:探索辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响。方法:(1)体外实验:采用不同剂量X线辐照HK-2细胞,并于辐照后24h和48h提取细胞蛋白及mRNA,Western印迹法检测JLP、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、转长生长因子(TGF)-β1蛋白的表达;RT-PCR检测JLP mRNA的表达;免疫荧光观察辐照后α-SMA的变化。(2)体内实验:将JLP野生型(jlp^(+/+))小鼠分为辐照组和非辐照组,辐照组小鼠采用6Gy X线照射,7d后处死小鼠。Western印迹法检测肾组织辐照后JLP、α-SMA、TGF-β1、胶原蛋白(COL)-Ⅰ蛋白的表达;PAS染色观察辐照后肾脏病理改变。结果:体外研究结果显示,辐照后JLP蛋白表达下调,α-SMA、TGF-β1蛋白表达上调;免疫荧光结果显示辐照后α-SMA的荧光表达增加。jlp+/+小鼠辐照后7d肾脏病理可见明显空泡变性,刷状缘紊乱,小管坏死,脱落,部分小管再生;Western印迹结果显示,辐照后α-SMA,TGF-β1,COL-Ⅰ表达增加。结论:辐照下调肾小管上皮细胞JLP的表达,同时上调TGF-β1的表达,进一步促进α-SMA、COL-Ⅰ表达上调,加重肾脏病理损害。 展开更多
关键词 辐射 支架蛋白jlp 肾小管
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