Sch B对猪精液常温保存效果的影响

为了研究五味子乙素(Sch B)对猪精液常温保存效果的影响,本实验设计6个猪精液常温保存稀释粉配方,在筛选出的最佳自配基础稀释粉配方中添加了0、1、5、10、15μmol/L的Sch B,通过检测精子活率、质膜完整性、顶体完整性以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量,分析Sch B对猪精液常温保存效果的影响。结果表明:6号基础稀释粉猪精液常温保存效果最佳,有效保存时间为4d,精子活率为0.63,质膜完整率为59.33%,顶体完整率为78.29%,均显著高于其他处理组(P<0.05);在6号自配基础粉中加入10μmol/L Sch B猪精液的有效保存时间为5d,精子活率达到0.61,T-AOC浓度为4.85 U/mL,显著高于其他处理组(P<0.05),并使MDA浓度显著降低为1.44nmol/mL(P<0.05)。因此,基础稀释粉中添加Sch B可提高猪精液常温保存品质,延长精子有效保存时间,其最佳添加量为10μmol/L。

五味子乙素对BaP致HTR8-SVneo细胞DNA氧化损伤的保护作用

目的:研究环境污染物苯并(a)芘(Ba P)致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SV neo DNA氧化损伤的作用机制,探讨五味子乙素(Sch B)的可能保护作用。方法:本实验分为空白组、Ba P组、Sch B不同浓度组(0.1、0.5、2μmol/L),以HTR8-SV neo细胞为载体,构建Ba P氧化应激损伤模型,测定芳香烃受体(AHR)基因表达量,DNA的损伤情况,人X射线修复交差互补组1(XRCC1)和人多聚ADP核糖聚合酶(PARP1)基因及蛋白的表达水平。结果 :相比Ba P组,五味子乙素预处理组细胞AHR mRNA表达量及DNA损伤程度明显减轻(P<0.05),而细胞内XRCC1、PARP1 mRNA和蛋白的表达量逐渐增加(P<0.05)。结论:五味子乙素能预防Ba P致HTR8-SVneo细胞DNA的氧化损伤。

五味子乙素通过NOS/NO系统预防BaP所致HTR8-SVneo细胞氧化损伤

目的研究五味子乙素(Sch B)预防环境污染物苯并(a)芘(BaP)致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo氧化损伤的机制。方法以HTR8-SVneo细胞为载体,构建BaP氧化应激模型。实验分为3组,BaP组、Sch B组和空白对照组。MTS法检测细胞存活率,还原酶法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)及总一氧化氮合酶(TNOS)含量,用RT-PCR法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA水平。结果 BaP组细胞存活率(72.2±0.9)%较对照组显著下降(P<0.05);而0.1、0.5或2μmol/L Sch B+20μmol/L BaP各组的细胞存活率分别为(78.2±1.5)%、(86.5±0.6)%、(93.4±1.0)%,显著高于BaP组(P<0.05)。BaP组细胞培养液中NO、TNOS含量、iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05);而与BaP组相比,Sch B组中NO、TNOS含量,iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均随着Sch B剂量的增加逐渐下降(P<0.05)。结论 Sch B可有效预防BaP所致的HTR8-SVneo细胞氧化损伤,其机制可能与NOS/NO系统的平衡有关。

健脾补肾方对亚临床甲减孕鼠胎盘分泌功能及NF-κB/MMP-9通路的调控作用

目的通过研究健脾补肾方对亚临床甲减孕鼠胎盘分泌功能及核转录因子(NF-κB)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的调控作用,探讨健脾补肾方的保胎机制。方法将90只Wistar雌性大鼠随机分成2组:正常对照组10只,模型组80只。建立亚临床甲减动物模型,达到完全甲减状态的模型大鼠中随机挑选10只为中药低剂量孕前给药组(Q),予皮下注射剂量为9.5μg/(kg·d)的L-T4,连续9d,第10天放免法检测大鼠血清TSH、TT4,筛选成功的亚临床甲减大鼠模型,将亚临床甲减大鼠以雌∶雄=2∶1的比例合笼。通过观察阴道栓,结合阴道涂片找精子,判断是否交配,并确定D0天,然后随机分为4组:(1)模型组即亚临床甲减模型组;(2)中药低剂量组;(3)中药高剂量组;(4)西药组。放免法测定怀孕第10天(D10)的孕鼠血清绒毛膜促性腺激素(HCG)、雌二醇(E_2)、孕酮(P);免疫组化、Western Blot法检测NF-κB和MMP-9在各组孕鼠胎盘组织中的表达。结果与模型组比较,D10天,各给药组的血清P、HCG水平均有显著增高(P<0.01),E_2水平Q组差异最显著(P<0.01)和X组有显著的变化(P<0.05);免疫组化及Western Blot结果均显示各给药组胎盘组织NF-κB及MMP-9水平均显著提高(P<0.05)。结论健脾补肾方可以提高NF-κB和MMP-9在亚临床甲减孕鼠胎盘组织中的表达,促进亚临床甲减孕鼠胎盘的分泌功能。

CD100在参与过敏性紫癜发病中B淋巴细胞分泌IgA的作用及机制初探

目的探讨分化抗原簇100(cluster of differentiation 100,CD100)参与过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病中B淋巴细胞产生IgA环节的具体作用。方法选取42例急性期初发HSP患者作为试验组,20例健康体检者为对照组,4例接受美容切除手术者作为皮损对照组。采用酶联免疫吸附试验检测实验组治疗前后以及对照组血清可溶型CD100(soluble CD100,sCD100)水平。对试验组中10例皮损组织与美容切除手术的4例正常皮肤组织行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE staining)和免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC staining)。采用流式细胞术检测试验组治疗前后与对照组外周血各细胞亚群胞膜表面CD100的流式细胞术平均荧光强度(mean fluorescence intensity of flow cytometry,MFI),以及试验组治疗前与对照组表达CD100的细胞亚群比例和CD19+CD138+B淋巴细胞(即浆母细胞)比例。结果①实试组治疗前血清sCD100水平较对照组升高,治疗后较治疗前下降;实试组治疗前血清IgA水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组治疗前血清sCD100水平与IgA水平呈正相关(P<0.05)。②HE染色显示HSP皮损处真皮浅层血管周围有较多淋巴细胞浸润。IHC结果显示,CD100在淋巴细胞胞膜及胞质中均有表达,呈浅褐色和棕黄色;相较正常皮肤组织,HSP皮损处真皮浅层血管周围有较多表达CD100的淋巴细胞浸润。③试验组治疗前外周血CD100+CD4+T淋巴细胞表面CD100的MFI值较对照组显著降低,经过治疗以后MFI值较治疗前增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CD100+CD4+T淋巴细胞增多,其胞膜表面大量脱落CD100可能促进HSP的B淋巴细胞分泌IgA参与发病过程。

微创斜形切口联合改良Bösch截骨术治疗足拇外翻畸形疗效观察

目的观察微创斜形切口联合改良Bösch截骨术治疗足拇外翻畸形的临床疗效。方法回顾性分析自2021-07—2022-12采用微创斜形切口联合改良Bösch截骨术治疗的20例(25足)足拇外翻畸形,沿第1跖骨远端干骺端内侧皮肤皱纹作一长约1.5 cm斜形切口,切口起于第1跖骨颈背内侧,斜向内下至第1跖骨头跖内侧,通过第1跖骨头颈部横形截骨并拇趾内侧克氏针髓内固定及跖骨截骨断端单枚空心钉固定。结果20例均获得随访,随访时间平均11.3(3~18)个月。本组均未进行Akin截骨,1例术中因骨刀方向偏移导致撑开跖骨截骨断端时出现骨质劈裂,继续予以断端克氏针及螺钉内固定。术后切口一期愈合,无感染、足背内侧皮神经损伤导致的感觉麻木、截骨端延迟愈合、截骨端不愈合发生,转移性跖骨痛及足拇囊炎症状消失。2例重度足拇外翻畸形术后6个月复发,行翻修手术并增加第1近节趾骨Akin截骨。其余17例(22足)末次随访时足拇外翻角为5.6°~9.8°,平均7.2°;第1、2跖骨间夹角为3.8°~7.5°,平均6.1°;第1近节、远节趾骨间角为4.3°~6.8°,平均5.9°;第1跖骨远端关节角为3.8°~6.2°,平均4.7°;末次随访时前足功能AOFAS评分为81~92分,平均88.4分。结论采用微创斜形切口联合改良B?sch截骨术治疗足拇外翻畸形的疗效满意,避免了足背内侧皮神经及拇趾内侧分支的损伤,可以通过截骨方向调整跖骨长短,旋前、旋后、抬高或降低跖骨头,保留了跖骨骨量,缩短了手术时间。

五味子乙素对二氧化硅致大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨五味子乙素(schisandrin B,Sch-B)对二氧化硅致大鼠肺损伤的保护作用。方法将64只大鼠随机分为对照组、染矽尘组、Sch-B干预组。非暴露气管法建立大鼠二氧化硅矽肺模型,灌胃给予Sch-B80 mg/kg/d。药后3、7、14和21 d,对照组、染矽尘组和Sch-B干预组分别随机安乐死4、6和6只大鼠,取其肺组织,测定肺系数;光镜观测其病理8切片;紫外分光光度计检测大鼠肺组织匀浆中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量变化。结果Sch-B对矽肺病理形态学有明显的改善作用,可以降低染矽大鼠的肺系数,降低肺组织匀浆中HYP和MDA含量,提高GSH含量,与染矽尘组比较,具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论Sch-B可以提高机体的抗氧化能力,对二氧化硅致大鼠肺损伤具有保护作用。

天然抗氧化剂对抗PC12细胞氧化损伤的实验研究

目的:研究五味子乙素(SchB)对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及作用机制。方法:SchB与PC12细胞预培养24h后,加入H2O2处理,在倒置显微镜下观察细胞的形态改变,采用MTT法测定细胞生存率,采用单细胞凝胶电泳法测定DNA单链损伤,采用荧光法测定细胞内的谷胱甘肽(GSH)含量。结果:H2O2处理后细胞生存率明显降低,细胞内DNA单链损伤明显升高,而GSH含量明显降低。经SchB预培养的细胞生存率明显升高,细胞内DNA单链损伤明显减轻,GSH含量明显升高,其作用呈剂量依赖关系。结论:SchB对PC12细胞有明显的保护作用,其作用机制可能与提高GSH抗氧化系统的能力有关。

五味子乙素对丙戊酸钠肝脏损伤的保护作用

目的观察五味子乙素(SchB)对丙戊酸钠诱导大鼠肝损伤的保护作用。方法 30只大鼠随机分成丙戊酸钠组、SchB加丙戊酸钠联合给药组及对照组各10只,分别给予丙戊酸钠、SchB+丙戊酸钠、生理盐水灌胃,2周后眼眶采集血液5mL,检测血清转氨酶水平。结果丙戊酸钠组血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶为(72.29±4.14)IU/L、(67.26±2.38)IU/L,对照组分别为(39.80±5.92)IU/L、(33.00±4.59)IU/L,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丙戊酸钠加五味子乙素组谷草转氨酶和谷丙转氨酶分别为(32.29±3.68)IU/L、(34.25±5.69)IU/L,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);各组大鼠总蛋白、白蛋白等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙戊酸钠可造成大鼠肝功能异常,而SchB可缓解肝功能的损害,发挥保肝作用。

不同浓度五味子乙素对人胃癌细胞株MGC-803增殖、凋亡的影响

目的:观察五味子乙素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用。方法:用10、50、100、200μmol/L浓度五味子乙素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果:倒置显微镜下,随着五味子乙素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当五味子乙素作用浓度是100μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞。结论:高浓度的五味子乙素可诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡,具有量效依赖关系。

五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上INa的影响。结果五味子乙素(>3μmol/L)对INa可产生显著抑制作用(P<0.05,P<0.01),并呈浓度依赖性。五味子乙素(10、30μmol/L)可使钠通道的I-V曲线显著上移,但I-V曲线的激活电位、峰电位及形态未发生改变,使INa的激活曲线向去极化方向迁移(P<0.01),半数激活电位由给药前(-53.90±5.21) mV变为(-43.69±5.34) mV和(-40.80±3.23) mV。五味子乙素能使INa失活曲线向超级化方向移动(P<0.01),半数失活电压(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(-57.80±6.21) mV、(-71.16±6.45) mV和(-81.03±7.53) mV。此外,五味子乙素还能显著延长INa失活后恢复时间(P<0.01),τ(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(16.68±1.72) ms、(25.73±2.93) ms和(43.79±3.87) ms。结论五味子乙素能浓度依赖性阻滞大鼠心室肌细胞INa,对其激活、失活和失活后恢复动力学特征均有影响。

五味子乙素对汞性大鼠急性肾损伤的影响

目的探讨五味子乙素（Sch B）对汞致大鼠急性肾损伤的影响。方法 Wistar大鼠30只,按体重随机分成5组：第1组为正常对照组,第2~4组分别为低、中、高剂量单纯染汞组,第5组为Sch B预处理组。对照组和单纯染汞组空腹以大豆油灌胃,Sch B预处理组16 mg/kg Sch B空腹灌胃,灌胃容量为5 ml/kg;2 h后,对照组皮下注射生理盐水,低、中、高剂量单纯染汞组分别皮下注射2.2μmol/kg、4.4μmol/kg、8.8μmol/kg氯化汞,Sch B预处理组皮下注射8.8μmol/kg氯化汞,注射容量为5 ml/kg。第二日重复上述操作,并将大鼠放入代谢笼,收集24 h尿液;而后将大鼠乙醚麻醉,腹主动脉采血,切取大鼠肾皮质,测定尿汞和肾皮质汞,尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿乳酸脱氢酶（LDH）及尿碱性磷酸酶（ALP）活力,尿蛋白和血尿素氮（BUN）含量,肾皮质还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果与对照组比较,高剂量氯化汞组尿汞和肾皮质汞含量,尿NAG、LDH及ALP活力,尿蛋白和BUN含量,GSH和MDA含量均显著升高,SOD和GSH-Px活力显著降低;与高剂量氯化汞组比较,Sch B预处理组尿NAG、LDH及ALP活力,尿蛋白和BUN含量,GSH和MDA含量均显著降低,SOD和GSH-Px活力明显升高。结论 Sch B预处理对汞性大鼠急性肾损伤有一定的拮抗作用。

Tfh通过CD40／CD40L轴在介导儿童过敏性紫癜发病中的作用与机制初探

目的探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）通过CD40/CD40L轴参与过敏性紫癜（HSP）及紫癜性肾炎（HSPN）发生发展的免疫学机制。方法选取急性期初发HSP患儿和健康体检儿童共55例，HSP患儿根据肾脏累及情况分3组：无肾脏累及组22例（A组）、纯血尿组11例（B组）、血尿合并蛋白尿组11例（C组）；另设正常对照组11例。用流式细胞术检测外周血CD19＋B细胞及亚类比例，分泌不同Ig的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例，及CD19＋B细胞及亚类上CD40和Tfh上CD40L表达水平。结果与对照组相比，C组中CD19＋CD86＋B、CD19＋CD138＋B细胞、CD40L＋Tfh比例增加，差异有统计学意义（P〈0.05），A、B组中上述指标有增加趋势，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与对照组相比，A、B、C组中CD19＋B、CD19＋CD27＋B细胞、表达CD40的CD19＋B细胞及其亚类、分泌IgG和IgM及IgD的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例差异无统计学意义（P〉0.05），而A、B、C组中分泌IgA和IgE的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞比例增加，差异有统计学意义（P〈0.05）。分泌IgA的CD19＋B、CD19＋CD38＋B细胞与CD40L＋Tfh呈显著正相关（P〈0.05）。结论Tfh介导CD40/CD40L信号通路异常可能是影响HSP发生及HSPN肾脏损害严重程度的免疫学机制。

五味子乙素对顺铂所致大鼠肾氧化损伤的保护作用

目的:研究五味子乙素(Sch B)对顺铂(DDP)所致肾毒性的保护作用及机制。方法:将Wistar大鼠30只随机分为3组:对照组、单纯DDP染毒组、DDP+Sch B干预组,对照组腹腔注射生理盐水,DDP组和DDP+Sch B干预组腹腔注射顺铂(2 mg·kg-1)染毒,共10次,Sch B干预组空腹灌胃Sch B8 mg·kg-1,注射、灌胃容量5 ml·kg-1,30 d后测定大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量以及肾组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。结果:DDP染毒组大鼠血清BUN、Cr值升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),Sch B干预组两指标明显低于DDP组,差异有统计学意义(P<0.05)。DDP染毒后,大鼠GSH、MDA含量显著高于对照组(P<0.01),SOD、GSH-Px活力显著低于对照组(P<0.01);Sch B干预组上述4项指标均明显改善,与DDP染毒组比,GSH、MDA含量降低,SOD、GSH-Px活力升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Sch B可恢复SOD和GSH-Px等抗氧化酶活力,减少脂质过氧化产物MDA的生成,对顺铂所致肾组织的氧化损伤具有一定的拮抗作用。